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In questo articolo

  • Riepilogo
  • Abstract
  • Introduzione
  • Protocollo
  • Risultati
  • Discussione
  • Divulgazioni
  • Riconoscimenti
  • Materiali
  • Riferimenti
  • Ristampe e Autorizzazioni

Riepilogo

Qui, presentiamo i protocolli per la sintesi dei nucleosidi disaccaride di regioselettiva O- glicosilazione di ribonucleosides tramite una protezione temporanea della loro 2', 3'-diolo moiety utilizzando un estere boronico ciclico. Questo metodo si applica a diversi nucleosidi non protetti quali adenosina, guanosina, citidina, uridina, 5-methyluridine e 5-fluorouridine dare corrispondente nucleosidi disaccaride.

Abstract

Nucleosidi disaccaride, che consistono di disaccaride e nucleobase moiety, sono stati conosciuti come un prezioso gruppo di prodotti naturali, avendo molteplici bioattività. Anche se chimica O- glycosylation è una strategia comunemente benefica per sintetizzare nucleosidi disaccaride, la preparazione di substrati come glicosil donatori e accettori richiede protezione gruppo noioso manipolazioni e una purificazione presso ogni passo sintetico. Nel frattempo, diversi gruppi di ricerca hanno riferito che boronico ed esteri di Borinici servono come una protezione o attivazione di un gruppo di derivati di carboidrati per ottenere il regio - e/o stereoselettiva acilazione, alchilazione, sililazione e glicosilazione. In questo articolo, dimostriamo la procedura per la regioselettiva O- glicosilazione di ribonucleosides non protetti utilizzando acido boronico. L'esterificazione di 2', 3'-diolo di ribonucleosides con Acido boronico rende la protezione temporanea di diolo e, O- glycosylation seguente con un glicosil donatore in presenza di p- toluenesulfenyl cloruro e argento TRIFLATI, permessi la reazione regioselettiva del gruppo idrossile 5' permettersi i nucleosidi disaccaride. Questo metodo potrebbe essere applicato a vari nucleosidi, quali guanosina, adenosina, citidina, uridina, 5-metyluridine e 5-fluorouridine. In questo articolo e il video di accompagnamento rappresentano informazioni utili (visivo) per la O- glicosilazione dei nucleosidi non protetti e loro analoghi per la sintesi di non solo nucleosidi disaccaride, ma anche una varietà di biologicamente rilevanti derivati.

Introduzione

Nucleosidi disaccaride, che sono coniugati di un nucleoside e una parte del carboidrato collegato tramite un O-glicosidici bond, costituiscono un'importante classe di naturale carboidrati derivati1,2 ,3,4,5,6,7. Per esempio, sono incorporati in macromolecole biologiche quali tRNA (acido ribonucleico transfer) e poli (ADP = adenosina difosfato), così come in alcuni agenti antibatterici e altre sostanze biologicamente attive (ad es., adenophostins, amicetins, ezomycin)5,6,8,9,10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19. Quindi, disaccaride nucleosidi e loro derivati devono essere composti di piombo per la ricerca di scoperta di farmaci. Le metodologie per la sintesi dei nucleosidi disaccaride sono classificate in tre categorie; enzimatica O- glicosilazione20,21, chimico N- glicosilazione5,9,16,22,23, 24e chimici O- glicosilazione7,9,14,16,18,19,24, 25,26,27,28,29,30,31,32,33, 34,35,36,37. In particolare, chimica O- glycosylation sarebbe un metodo efficiente per la sintesi stereoselettiva e sintesi su larga scala dei nucleosidi disaccaride. Precedenti ricerche hanno dimostrato che l'O- glycosylation di 2'-trifosfati 2 con il thioglycosyl donatore 1, utilizzando la combinazione di p- toluenesulfenyl cloruro e argento triflato, garantisce la desiderato disaccaride nucleosidici 3 (Figura 1A; AR = arilico e PG = protezione gruppo)38.

A seguito di questi risultati, abbiamo deciso di sviluppare il O- glycosylation di applicazione del sistema di promotore triflato argento/cloruro di p- toluenesulfenyl ribonucleosides. Mentre diversi esempi di O- glicosilazione di ribonucleosides parzialmente protette sono state dimostrate7,9,14,16,18,19 ,24,32,33,34,35,36,37, l'uso di non protetto o protetto da temporaneamente ribonucleosides come un accettore di glicosil per O- glycosylation è stata segnalata in modo trascurabile. Di conseguenza, lo sviluppo di regioselettiva O- glicosilazione di ribonucleosides temporaneamente protetto o non protetto sarebbe fornire un metodo sintetico più vantaggioso senza proteggere le manipolazioni di gruppo di ribonucleosides. Al fine di raggiungere la regioselettiva O- glicosilazione di ribonucleosides, ci siamo concentrati sui composti del boro, perché diversi esempi di acilazione di regio - e/o stereoselettiva, alchilazione, sililazione e glicosilazione del carboidrato strumenti derivati assistiti da boronico o acido Borinici sono stati segnalati39,40,41,42,43,44,45 ,46,47,48,49,50. In questo articolo, dimostriamo la procedura per la sintesi dei nucleosidi disaccaride che utilizzano regioselettiva O- glicosilazione presso il gruppo di 5'-idrossile di ribonucleosides via boronico intermedio. Nella strategia presentata qui, estere boronico intermedio 6 sarebbe essere garantita da esterificazione del ribonucleoside 4 con la boronico acido 5, che permette la regioselettiva O- glicosilazione presso il gruppo di 5'-idrossile con thioglycosyl donatore 7 per dare il disaccaride nucleosidici 8 (Figura 1B)51. Inoltre abbiamo studiato l'interazione di un ribonucleoside e Acido boronico dalla spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (NMR), per osservare la formazione di un estere boronico. Esterificazione per rendere boronico e una reazione di glicosilazione richiedono condizioni anidra per evitare l'idrolisi dell'estere boronico e glicosil donatore. In questo articolo, dimostriamo le tipiche procedure per ottenere le condizioni anidra per reazioni di glicosilazione successo per ricercatori e studenti non solo in chimica, ma anche in altri campi di ricerca.

Protocollo

Nota: Tutti i dati sperimentali [NMR, spettroscopia infrarossa (IR), spettroscopie di massa (MS), ottiche rotazioni e dati di analisi elementale] dei composti sintetizzati sono stati segnalati in un precedente carta51.

1. procedura di O- glicosilazione reazioni

  1. Sintesi di composti α/β-12 (12 di voce nella tabella 1)
    Nota: 1-13 di voci nella tabella 1 sono state effettuate utilizzando una procedura simile.
    1. Protezione temporanea di 2', 3'-diolo di ribonucleoside40
      1. Pallone a forma di pera (pallone da 1), sciogliere in un 10ml mannosyl donatore α -9 (28,4 mg, 0.0486 mmol)52, uridina 10 (7,9 mg, 0.0324 mmol) e 4-(trifluoromethyl) phenylboronic acido 11C (9,3 mg, 0.0490 mmol) in piridina anidra (0,40 mL).
        Nota: È consigliabile l'uso di un pallone da 10 mL per la pera perché, nel passaggio 1.1.3.1, la miscela di reazione sarà trasferita al pallone da 2 (una 10ml due colli pallone con un setto collegato ad esso) contenente molecolare setacci in polvere.
      2. Co-evaporare la miscela di reazione (ottenuta al passaggio 1.1.1.1.) con piridina anidra (0,40 mL, 3 x) e anidro 1,4-diossano (0,40 mL, 3 x) a temperatura ambiente per ca. 40 ° C per rimuovere tutta l'acqua.
      3. Disciogliere il residuo (ottenuto al passaggio 1.1.1.2.) in anidro 1,4-diossano (0,32 mL) e mescolare la miscela di reazione alla sua temperatura di riflusso per 1 h formare un estere boronico (protezione temporanea).
      4. Rimuovere il solvente mediante evaporatore rotante seguito da una pompa a vuoto.
    2. Attivazione di setacci molecolari
      1. In un pallone a sfondo sferico due colli da 10 mL con un setto collegato ad esso (pallone da 2), aggiungere 4 Å polvere di setacci molecolari (64 mg).
        Nota: Setacci molecolari appropriati dovrebbero essere selezionati secondo il solvente utilizzato per la glicosilazione (3 Å per acetonitrile) e 4 Å per 1,4-diossano, diclorometano e propionitrile.
      2. Riscaldare i setacci molecolari in un forno a microonde sotto pressione atmosferica e raffredarli sotto pressione ridotta evacuata da una pompa a vuoto (3x) e poi asciugarle con una pistola di calore sotto pressione ridotta durante la sostituzione dell'aria con gas argon diverse volte.
    3. Glicosilazione
      1. Sciogliere il residuo del passaggio 1.1.1.4. in boccetta 1 in propionitrile (0,64 mL) o altri solventi e trasferire questa soluzione in pallone 2.
        Nota: Acetonitrile, 1,4-diossano, diclorometano e propionitrile sono stati utilizzati per le voci 1-7 e 9, voce 10, voce 11 e voci 8, 12 e 13, rispettivamente.
      2. Mescolare la miscela di reazione nella beuta 2 a temperatura ambiente per 0,5 h seguita da raffreddamento a-40 ° C.
        Nota: La temperatura è stata modificata secondo il solvente utilizzato per la glicosilazione (-40 ° C per diclorometano e propionitrile), temperatura ambiente per 1,4-diossano e -20 ° C per acetonitrile.
      3. Aggiungere la miscela di reazione alla stessa temperatura utilizzata nel passaggio 1.1.3.2 argento triflato (49,9 mg, 0,194 mmol) e p -toluenesulfenyl cloruro (12,8 µ l, 0,0968 mmol).
      4. Mescolare la miscela di reazione alla stessa temperatura per 1,5 h.
      5. Controllare la reazione di cromatografia di strato sottile (TLC) con esano/etile acetato [3/1 (v/v)] per verificare i glicosil donatori [il coefficiente di conservazione (Rf) (donatore α -9) = 0,63] e con cloroformio/metanolo [10/1 (v/v))] per controllare il glicosil Gettoniere e prodotti [Rf (accettore 10) = 0,03, Rf (prodotto desiderato) = 0,50].
      6. Placare la miscela di reazione con bicarbonato di sodio acquoso saturo (1,0 mL), diluirlo con cloroformio (2,0 mL), rimuovere il materiale insolubile con Celitee lavare accuratamente la Celite con cloroformio (20 mL).
      7. Lavare il filtrato (strato organico) con acquoso saturato bicarbonato di sodio (20 mL, 3 x) e salamoia (20 mL) utilizzando un imbuto separatore mL 100.
      8. Asciugare lo strato organico risultante con solfato di sodio, filtrare i materiali insolubili e concentrare il filtrato utilizzando un evaporatore rotante.
      9. All'incirca purificare il residuo da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 50/1 (v/v)] di permettersi grezza 5'-O-(6"-O- acetil-2", 3", 4"- tri-O- benzil-α/β-ᴅ-mannopyranosyl) uridina contenente un piccole quantità di sottoprodotti (15,2 mg, sciroppo incolore).
    4. Acetilazione
      1. In un flaconcino da 5 mL, sciogliere il composto grezzo risultante preparato al punto 1.1.3.9 in piridina anidra (0,20 mL).
      2. Aggiungi N,N-dimetil-4-aminopiridina (una quantità catalitica) e anidride acetica (20,4 µ l, 0.0216 mmol: 10 equivalenti basato sul composto grezzo) alla soluzione a 0 ° C.
      3. Mescolare la miscela di reazione alla stessa temperatura per 0,5 h seguita da un riscaldamento a temperatura ambiente.
      4. Dopo aver agitato durante la notte, controllare la reazione di TLC con cloroformio/metanolo [30/1 (v/v)] [Rf (α/β-12) = 0,45].
      5. Diluire la miscela di reazione con cloroformio (20 mL).
      6. Lavare lo strato organico con acido cloridrico 1 M (20 mL, 3 x), acquoso saturato bicarbonato di sodio (20 mL, 3 x) e salamoia (20 mL) utilizzando un imbuto separatore mL 100.
      7. Asciugare lo strato organico risultante con solfato di sodio, filtrare i materiali insolubili e concentrare il filtrato utilizzando un evaporatore rotante.
      8. Purificare il residuo da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 90/1 (v/v)] per dare α/β-12 (15,8 mg, 61%, α/β = 1/1.6, incolore solido amorfo).
  2. Sintesi di composti β-22 di β-30 (tabella 2) e β-33 (tabella 3)
    Nota: La sintesi di β-22-Β-30e β-33è stata effettuata utilizzando una procedura simile.
    1. Sintesi di composti β-22 (voce 1 nella tabella 2)
      1. Protezione temporanea di 2', 3'-diolo di ribonucleoside
        1. Pallone a forma di pera (pallone da 3), sciogliere in un 10ml adenosina 13 (20,4 mg, 0.0763 mmol), galactosyl donatore β -21 (80,4 mg, 0.114 mmol)53e 4-(trifluoromethyl) acido phenylboronic 11C (21,7 mg, 0.114 mmol) in anidro piridina (0,76 mL).
          Nota: L'uso di un pallone da 10 mL per la pera è consigliata perché la miscela di reazione sarà trasferita al pallone 4 (una 10ml due colli pallone con un setto collegato ad esso) contenente molecolare setacci polvere nel passaggio 1.2.1.3.1.
        2. Co-evaporare la miscela di reazione (ottenuta al passaggio 1.2.1.1.1.) con piridina anidra (0,76 mL, 3 x) e anidro 1,4-diossano (0,76 mL, 3 x) a temperatura ambiente per ca. 40 ° C per rimuovere tutta l'acqua.
        3. Disciogliere il residuo (ottenuto al passaggio 1.2.1.1.2.) in anidro 1,4-diossano (0,76 mL) e mescolare la miscela di reazione alla sua temperatura di riflusso per 1 h formare un estere boronico (una protezione temporanea).
        4. Rimuovere il solvente mediante evaporatore rotante seguito da una pompa a vuoto.
      2. Attivazione di setacci molecolari
        1. In un pallone a sfondo sferico due colli da 10 mL con un setto collegato ad esso (recipiente 4), aggiungere 4 Å polvere di setacci molecolari (150 mg).
        2. Riscaldare i setacci molecolari in un forno a microonde sotto pressione atmosferica e raffredarli sotto pressione ridotta evacuata da una pompa a vuoto (3x) e poi asciugarle con una pistola di calore sotto pressione ridotta durante la sostituzione dell'aria con gas argon diverse volte.
      3. Glicosilazione
        1. Sciogliere il residuo del passo 1.2.1.1.4. in beuta, 3 in propionitrile (1,50 mL) e trasferire questa soluzione in pallone 4.
        2. Mescolare la miscela di reazione a temperatura ambiente per 0,5 h, seguito da raffreddamento a-40 ° C.
        3. Aggiungere argento triflato (117,6 mg, 0,458 mmol) e p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol) alla miscela di reazione alla stessa temperatura, come indicato al punto 1.2.1.3.2.
        4. Mescolare la miscela di reazione, alla stessa temperatura per 1,5 h.
        5. Controllare la reazione di TLC con esano/etile acetato [2/1 (v/v)] per verificare i glicosil donatori [Rf (donatore β -21) = 0,62] e con cloroformio/metanolo [10/1 (v/v)] per verificare il glicosil accettori e prodotti [Rf (accettore 13 ) = 0,05, Rf (prodotto desiderato) = 0.30].
        6. Placare la miscela di reazione con bicarbonato di sodio acquoso saturo (2,0 mL), diluirlo con cloroformio (3,0 mL), rimuovere i materiali insolubili attraverso Celitee lavare accuratamente la Celite con cloroformio (30 mL).
        7. Lavare il filtrato (strato organico) con acquoso saturato bicarbonato di sodio (30 mL, 3 x) e salamoia (30 mL) utilizzando un imbuto separatore mL 100.
        8. Asciugare lo strato organico risultante con solfato di sodio, filtrare i materiali insolubili e concentrare il filtrato utilizzando un evaporatore rotante.
        9. Purificare il residuo da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 30/1 (v/v)] di permettersi β -22 (27,4 mg, 42%, solido incolore).
    2. Sintesi di composti β-23 (voce 2, tabella 2)
      1. Condotta la reazione utilizzando 14 (28,4 mg, 0.0765 mmol)54, β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11C (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,8 mg, 0,458 mmol), anidro 1,4-diossano (0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 50/1 (v/v)] per dare β–23 (21,9 mg, 30%, solido incolore). TLC: Rf (β -23) = 0,37 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].
    3. Sintesi di composti β-24 (voce 3 della tabella 2)
      1. Condurre la reazione utilizzando 15 (21,6 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11C (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,6 mg, 0,458 mmol), anidro (1,4-diossano 0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 8/1 (v/v)] per dare β -24 (8,1 mg, 12%, solido incolore). TLC: Rf (β -24) = 0.20 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].
    4. Sintesi di composti β-25 (voce 4 nella tabella 2)
      1. Condotta la reazione utilizzando 16 (27,0 mg, 0.0764 mmol)55, β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11C (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,8 mg, 0,458 mmol), anidro 1,4-diossano (0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 20/1 (v/v)] per dare β -25 (31,4 mg, 44%, solido incolore). TLC: Rf (β -25) = 0.27 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].
    5. Sintesi di composti β-26 (ingresso 5 nella tabella 2)
      1. Condurre la reazione utilizzando 10 (18,6 mg, 0.0762 mmol), β -21 (80,4 mg, 0.114 mmol), 11C (21,7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,6 mg, 0,458 mmol), anidro (1,4-diossano 0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 40/1 (v/v)] per dare β -26 (26,1 mg, 42%, solido incolore). TLC: Rf (β -26) = 0,45 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].
    6. Sintesi di composti β-27 (6 entrata nella tabella 2)
      1. Condurre la reazione utilizzando 17 (19,7 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11C (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,6 mg, 0,458 mmol), anidro (1,4-diossano 0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 40/1 (v/v)] per dare β -27 (33,8 mg, 53%, solido incolore). TLC: Rf (β -27) = 0,50 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].
    7. Sintesi di composti β-28 (entrata 7 nella tabella 2)
      1. Condurre la reazione utilizzando 18 (20,0 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80,4 mg, 0.114 mmol), 11C (21,7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,6 mg, 0,458 mmol), anidro (1,4-diossano 0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio poi acetato di etile/cloroformio = 1/1 (v/v)] per dare β–28 (38,8 mg, 61%, solido incolore). TLC: Rf (β -28) = 0,33 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].
    8. Sintesi di composti β-29 (ingresso 8 nella tabella 2)
      1. Condurre la reazione utilizzando 19 (18,5 mg, 0.0761 mmol), β -21 (80,4 mg, 0.114 mmol), 11C (21,7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,6 mg, 0,458 mmol), anidro (1,4-diossano 0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 10/1 (v/v)] per dare β -29 (34,1 mg, 55%, solido incolore). TLC: Rf (β -29) = 0,25 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].
    9. Sintesi di composti β-30 (voce 9 della tabella 2)
      1. Condotta la reazione utilizzando 20 (26,6 mg, 0,0766 mmol)56, β -21 (80,6 mg, 0.115 mmol), 11C (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,8 mg, 0,458 mmol), anidro 1,4-diossano (0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 50/1 (v/v)] per dare β -30 (28,0 mg, 40%, solido incolore). TLC: Rf (β -30) = 0,48 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].
    10. Sintesi di composti β-33 (voce 1 nella tabella 3)
      1. Condotta la reazione utilizzando 18 (20,0 mg, 0.0762 mmol), β -31 (80,4 mg, 0.114 mmol)57, 11C (21,7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 µ l, 0,229 mmol), argento triflato (117,6 mg, 0,458 mmol), anidro 1,4-diossano (0,76 mL), anidro propionitrile (1,50 mL) e 4 Å setacci molecolari (150 mg). Purificare il residuo risultante da cromatografia a colonna [gel di silice, cloroformio/metanolo = 1/0 - 30/1 (v/v)] per dare β -33 (34,5 mg, 54%, solido incolore). TLC: Rf (β -33) = 0,33 [cloroformio/metanolo = 10/1 (v/v)].

2. deprotezione di β-28 (Figura 2)

  1. In un flaconcino da 5 mL, aggiungere β -28 (25,2 mg, 0.0300 mmol) e 10 M metilammina in metanolo (2,0 mL)58.
  2. Mescolare la miscela di reazione a 0 ° C per 2 h seguita da riscaldandola a temperatura ambiente.
  3. Dopo mescolando per 13 h, controllare la reazione di TLC con cloroformio/metanolo [10/1 (v/v)] [Rf (β -35) = 0,20].
  4. Concentrare la miscela di reazione mediante un evaporatore rotante.
  5. Sciogliere il residuo risultante in acqua (15 mL) e lavare lo strato acquoso con diclorometano (15 mL, 3 x) utilizzando un imbuto separatore 50 mL.
  6. Concentrare lo strato acquoso mediante un evaporatore rotante.
  7. Purificare il residuo di preparativa ad alte prestazioni cromatografia liquida (HPLC) [colonna: ODS (ottadecilsilano) colonna (20Φ x 250 mm), eluente: acqua (contiene acido trifluoroacetico 0,1% [v/v]), portata: 8,0 mL/min, rilevamento: 266 nm, temperatura: 25 ° C, tempo di permanenza: 20 min] per dare β -35 (7,9 mg, 62%, incolore solido amorfo)59.

3. NMR studi di estere boronico ciclico (Figura 3 e 4)

  1. Preparazione e misurazione dei 36
    1. Sciogliere in matraccio da 10 mL a forma di pera, uridina 10 (34,3 mg, 0.140 mmol) e 4-(trifluoromethyl) acido phenylboronic 11C (40,0 mg, 0.211 mmol) in piridina anidra (1,00 mL).
    2. Co-evaporare la miscela di reazione con piridina anidra (1,00 mL, 3 x) e anidro 1,4-diossano (1,00 mL, 3 x) a temperatura ambiente per ca. 40 ° C per rimuovere tutta l'acqua.
    3. Disciogliere il residuo in anidro 1,4-diossano (1,40 mL) e mescolare la miscela di reazione alla sua temperatura di riflusso per 1 h formare un estere boronico (una protezione temporanea).
    4. Versare la miscela di reazione (0,14 mL) per un flaconcino da 5 mL.
    5. Rimuovere il solvente dal flaconcino da 5 mL utilizzando un evaporatore rotante, seguito da una pompa a vuoto.
    6. Sciogliere il residuo risultante 36 in acetonitrile -d3 (0,64 mL).
    7. Misurare 1H, 11B e spettroscopie NMR F 19utilizzando un quarzo tubo NMR a 25 ° C.
  2. Preparazione e misurazione dei 38
    1. Preparare la miscela di reazione 38 da 11C (40,0 mg, 0.211 mmol) utilizzando la procedura simile a quella del passo 3.1.

Risultati

I risultati di O- glicosilazione di uridina 10 con thiomannoside α -9 sono riassunti in tabella 160,61. Nella voce 1, O- glycosylation di 10 con α -9 in assenza di derivati dell'acido Boronici ha provocato la formazione di una miscela complicata. Nella voce 2, 10 e phenylboronic acido 11a erano...

Discussione

Lo scopo di questo manoscritto è quello di mostrare un metodo sintetico conveniente per preparare nucleosidi disaccaride utilizzando ribonucleosides non protetti senza manipolazioni di gruppo protezione noioso. Segnaliamo qui il regioselettiva O- glycosylations di nucleosidi tramite il temporaneo 2', 3'-diolo protezione da un estere boronico ciclico (Figura 1B)51.

La preparazione dell'estere boronico cicl...

Divulgazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Riconoscimenti

Questa ricerca è stata finanziata da donazioni dal Ministero della pubblica istruzione, cultura, sport, scienza e tecnologia (MEXT) del Giappone (nn. 15 00408 K, 24659011, 24640156, 245900425 e 22390005 per Shin Aoki), da una sovvenzione della ricerca biochimica di Tokyo Foundation, Tokyo, Giappone e dal fondo per le aree di ricerca strategica TUS (Tokyo University of Science). Vorremmo ringraziare Noriko Sawabe (facoltà di scienze farmaceutiche, Università delle scienze di Tokyo) per le misurazioni degli spettri NMR, Fukiko Hasegawa (facoltà di scienze farmaceutiche, Università delle scienze di Tokyo) per le misurazioni della massa spettri e Tomoko Matsuo (Istituto di ricerca per la scienza e tecnologia, Tokyo University of Science) per le misurazioni delle analisi elementare.

Materiali

NameCompanyCatalog NumberComments
Silver trifluoromethanesulfonateNacalai Tesque34945-61
Phenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride)Tokyo Chemical IndustryB0857
p-Methoxyphenylboronic acidWako Pure Chemical Industries321-69201
4-(Trifluoromethyl)phenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride)Tokyo Chemical IndustryT1788
2,4-Difluorophenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride)Tokyo Chemical IndustryD3391
Cyclopentylboronic acid (contains varying amounts of Anhydride)Tokyo Chemical IndustryC2442
4-Nitrophenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride)Tokyo Chemical IndustryN0812
4-Hexylphenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride)Tokyo Chemical IndustryH1489
AdenosineMerck KGaA862.
GuanosineAcros Organics411130050
CytidineTokyo Chemical IndustryC0522
UridineTokyo Chemical IndustryU0020
5-FluorouridineTokyo Chemical IndustryF0636
5-MethyluridineSigmaM-9885
Methylamine (40% in Methanol, ca. 9.8mol/L)Tokyo Chemical IndustryM1016
N,N-dimethyl-4-aminopyridineWako Pure Chemical Industries044-19211
Acetic anhydrideNacalai Tesque00226-15
Pyridine, DehydratedWako Pure Chemical Industries161-18453
AcetonitrileKanto Chemical01031-96
1,4-DioxaneNacalai Tesque13622-73
DichloromethaneWako Pure Chemical Industries130-02457
PropionitrileWako Pure Chemical Industries164-04756
Molecular sieves 4A powderNacalai Tesque04168-65
Molecular sieves 3A powderNacalai Tesque04176-55
Celite 545RVSNacalai Tesque08034-85
Acetonitrile-D3 (D,99.8%)Cambridge Isotope LaboratoriesDLM-21-10
Trifluoroacetic acidNacalai Tesque34831-25
TLC Silica gel 60 F254Merck KGaA1.05715.0001
ChromatorexFuji Silysia ChemicalFL100D
Sodium hydrogen carbonateWako Pure Chemical Industries191-01305
Hydrochloric acidWako Pure Chemical Industries080-01061
Sodium sulfateNacalai Tesque31915-96
ChloroformKanto Chemical07278-81
Sodium chlorideWako Pure Chemical Industries194-01677
MethanolNacalai Tesque21914-74
JEOL Always 300JEOLMeasurement of NMR
Lamda 400JEOLMeasurement of NMR
PerkinElmer Spectrum 100 FT-IR SpectrometerPerkin ElmerMeasurement of IR
JEOL JMS-700JEOLMeasurement of MS
PerkinElmer CHN 2400 analyzerPerkin ElmerMeasurement of elemental analysis
JASCO P-1030 digital polarimeterJASCOMeasurement of optical rotation
JASCO PU-2089 Plus intelligent HPLC pumpJASCOFor HPLC
Jasco UV-2075 Plus Intelligent UV/Vis DetectorJASCOFor HPLC
Rheodyne Model 7125 InjectorSigma-Aldrich58826For HPLC
Chromatopac C-R8AShimadzuFor HPLC
Senshu Pak Pegasil ODSSenshu ScientificFor HPLC
p-Toluenesulfenyl chloridePrepared  Ref. 38
Phenyl 6-O-acetyl-2,3,4-tri-O-benzyl-1-thio-a-D-mannopyranoside (a-9)Prepared  Ref. 52
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-b-D-galactopyranoside (b-21)Prepared  Ref. 53
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-b-D-glucopyranoside (b-31)Prepared  Ref. 57
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-a-D-Mannopyranoside (a-32)Prepared  Ref. 67
6-N-Benzoyladenosine (14)Prepared  Ref. 54
2-N-Isobutyrylguanosine (16)Prepared  Ref. 55
4-N-Benzoylcytidine (20)Prepared  Ref. 56

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