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Method Article
La caratterizzazione dei caratteri dell'apparato radicale è una delle aree di ricerca che è ancora agli inizi, in particolare nella canna da zucchero. L'integrazione di più approcci per fenotipare con precisione le radici della canna da zucchero porta a risultati completi e olistici, consentendo l'utilizzo di tratti e meccanismi identificati per l'allevamento convenzionale e molecolare.
Le radici sono i principali conduttori di acqua e sostanze nutritive e svolgono un ruolo vitale nel sostenere la crescita e la resa in ambienti stressanti. Lo studio delle radici delle piante pone difficoltà metodologiche nella valutazione e nel campionamento in situ , il che è particolarmente vero per la canna da zucchero (Saccharum spp.). I metodi tradizionali durante gli anni '20 hanno documentato la variazione genotipica negli apparati radicali della canna da zucchero, dopo di che fino a poco tempo fa sono stati riportati pochi studi sui tratti radicali della canna da zucchero di per sé . Oltre alla morfologia, le caratteristiche della rizosfera, compresi gli effetti allelopatici e/o l'affinità per la simbiosi microbica, determinano l'insediamento e la sopravvivenza delle piante.
In definitiva, gli apparati radicali definiscono la produttività fuori terra della canna da zucchero. Con l'impulso per le varietà resistenti al clima, sta diventando sempre più rilevante esplorare e utilizzare la variabilità dei tratti dell'apparato radicale della canna da zucchero. Questo articolo descrive approcci su più fronti per la fenotipizzazione delle radici della canna da zucchero, tra cui lo scavo sul campo mediante campionamento in trincea, l'uso di un campionatore di carote radicali, piattaforme rialzate per il campionamento delle radici e l'allevamento di piante in coltura idroponica, impiegati da un team di scienziati presso l'Indian Council of Agricultural Research-Sugarcane Breeding Institute (ICAR-SBI).
Lo scavo sul campo mediante campionamento in trincea è indispensabile per valutare le radici delle piante nel loro ambiente di crescita naturale. L'uso di piattaforme rialzate che simulano le condizioni del campo e un campionatore di carote radicolari sono approcci alternativi, con una notevole riduzione dei tempi, una dimensione uniforme del campione e una minore perdita di materiale radicale. La coltura idroponica delle piante consente lo studio della morfologia, delle caratteristiche anatomiche e della biologia della rizosfera, compresa l'essudazione di composti organici e le interazioni microbiche. I dati generati da diversi esperimenti con diversi metodi di campionamento si aggiungono alla ricchezza di informazioni sui tratti dell'apparato radicale della canna da zucchero.
La canna da zucchero (Saccharum spp.), un'importante fonte alimentare e di bioenergia, è un'importante coltura industriale adatta alla coltivazione in molti paesi con condizioni climatiche tropicali e subtropicali. Grazie alla via fotosintetica C4 per l'assimilazione del carbonio, la canna da zucchero è altamente produttiva, utilizzando in modo efficiente input agricoli come acqua e fertilizzanti. La lavorazione post-raccolta della canna da zucchero produce prodotti economicamente preziosi come lo zucchero e il jaggery, insieme ai suoi sottoprodotti: melassa, etanolo ed energia. La canna da zucchero è prodotta da quasi 100 paesi su una superficie di 25,97 Mha, che rappresenta circa l'1,5% del totale dei terreni coltivabili. L'India da sola contribuisce al 16% della produzione mondiale di canna da zucchero (circa 306 Mt), con una produttività media di 70 t·ha−1 1. I principali stress abiotici che influenzano drasticamente la produzione di canna da zucchero includono deficit idrici, ristagno idrico, temperature estreme e proprietà del suolo come carenza di nutrienti, salinità, sodicità e alcalinità. La sfida più grande per lo sviluppo di colture abiotiche tolleranti allo stress è quella di individuare tratti specifici che conferiscano un sostanziale vantaggio di resa in condizioni di stress.
Diversi aspetti della fisiologia della canna da zucchero sono poco compresi, tra cui la relazione radice-germoglio, che influisce drasticamente sulla produttività della canna. La radice di canna da zucchero non è studiata così bene come i germogli, sebbene i diversi tipi, come le radici di sett, le radici dei germogli e le radici adulte, possano essere distinti dal punto di vista dello sviluppo con funzioni variabili. Sono state osservate differenze genotipiche per quanto riguarda il numero e la lunghezza delle radici dei sedimenti che emergono durante la germinazione2. Le radici di Sett sono implicate nella germinazione dei germogli di canna da zucchero, garantendo l'insediamento precoce delle colture, e vengono successivamente sostituite da radici di germogli, che sono robuste, che emergono dalla base del germoglio in via di sviluppo3. I rami fini osservati nelle radici del sett aiutano ad ancorare le giovani piante e aiutano nell'assorbimento di acqua e sostanze nutritive fino a quando non vengono sostituiti dalle radici dei germogli. Simili alle radici di sedimentazione, anche le radici dei germogli derivano dai primordi radicali presenti negli internodi inferiori e non espansi della canna.
Poiché le radici dei germogli persistono nella pianta per una durata maggiore, sono 4x-10 volte più spesse delle radici a cubetto. Le radici dei germogli costituiscono l'unico apparato radicale della canna da zucchero, con un ruolo importante nell'ulteriore crescita e sviluppo. Il vigore delle radici dei germogli è positivamente associato al vigore vegetativo complessivo della pianta. Il continuo sviluppo delle radici, derivante dal ricambio delle radici dei germogli e dei germogli, dà origine all'"apparato radicale adulto" della canna da zucchero, che si adatta sempre alle condizioni ambientali prevalenti. In generale, un apparato radicale più profondo e prolifico rende disponibile più acqua e sostanze nutritive per la coltura rispetto a una distribuzione meno profonda delle radici. Le dissezioni periodiche hanno rivelato che, quando il contenuto di umidità del suolo era elevato, si osservavano apparati radicali poco profondi, mentre un apparato radicale molto più profondo si sviluppava quando la falda freatica scendeva2. L'apparato radicale della canna da zucchero rimane attivo anche dopo la raccolta del raccolto, contribuendo alla crescita del raccolto ratoon fino a quando non emergono nuove radici di germogli dalle gemme sotterranee4. L'angolo radicale e il livello di ramificazione delle radici sono due fattori importanti che determinano il volume di terreno esplorato dalle radici delle piante. L'angolo radicale, un tratto genotipico, può essere alterato attraverso l'allevamento convenzionale o approcci molecolari per migliorare la tolleranza agli stress biotici e abiotici. Al contrario, il livello di ramificazione radicale è principalmente influenzato dall'ambiente, rendendo necessario un monitoraggio periodico dello sviluppo delle radici e della sua risposta alle condizioni localizzate del suolo.
Le caratteristiche anatomiche delle radici della canna da zucchero sono state esaminate per accertare le differenze per quanto riguarda il genotipo e l'ambiente. L'anatomia delle radici della canna da zucchero assomiglia a quella delle radici mature di altre graminacee come il mais, in cui la corteccia comprende strati cellulari ben differenziati in uno schema regolare. L'endoderma è suberizzato, seguito da un periciclo a strato singolo. Gli elementi metaxilematici sono i principali conduttori di ioni acqua e nutrienti, disposti radialmente e intervallati da gruppi di floema, questi ultimi costituiti da un elemento setaccio con due celle compagne. La grande massa centrale di cellule indifferenziate forma il midollo della radice. Le caratteristiche anatomiche distinte delle cultivar di canna da zucchero corrispondono alle proprietà idrauliche delle radici, influenzando così il movimento dell'acqua. I primi studi sulle differenze nei tratti anatomici radicali della canna da zucchero hanno rivelato che, in condizioni di basso stress da umidità, è stato osservato un pronunciato ispessimento della parete cellulare negli strati immediatamente all'interno dell'endoderma, tra il midollo e la regione vascolare, e intorno ai vasi5. Tali cellule ispessite possono essere un adattamento per prevenire il flusso all'indietro della linfa e per la resistenza meccanica durante lo stress.
Alcuni tratti importanti implicati nella resistenza alla siccità della canna da zucchero includono lo spessore relativo e il numero di strati esodermici, il rapporto tra corteccia e stele, gli spazi intercellulari nella corteccia e le punte dei peli delle radici ispessite. I rapporti tra l'area occupata dalle cellule corticali e l'area occupata dai tessuti stellari delle radici dei germogli sono significativamente diversi tra le cultivar di canna da zucchero, con ampia variabilità rispetto all'area della stele6. La conduttività idraulica delle radici della canna da zucchero è correlata alla dimensione e al numero di elementi metaxilematici nelle radici dei germogli. È probabile che gli strati cellulari idrofobici all'interno della radice definiscano zone di movimento dell'acqua apoplastica. Le bande caspariane suberizzate si trovano nell'endoderma e nell'ipoderma (definito esoderma), che fungono da barriere idrofobiche. La disintegrazione delle cellule corticali porta alla formazione di aerenchima lisigeno nelle radici più vecchie e nelle piante sottoposte a condizioni di ipossia, indipendentemente dall'età di sviluppo. La formazione di aerenchima durante lo stress da ristagno idrico è correlata al mantenimento della crescita nelle varietà resistenti7.
La morfologia e l'anatomia delle radici di Erianthus arundinaceus [Retzius] Jeswiet (generi imparentati con Saccharum spp.) sono implicate nella sua forte tolleranza agli stress ambientali8. Le radici di Erianthus arundinaceus mostrano radici nodali distribuite ad angoli ripidi, con fitti peli radicali per facilitare l'assorbimento di acqua e ioni nutritivi dalle zone più profonde del suolo. L'apparato radicale profondo è costituito da molte radici nodali che crescono con angoli di crescita ripidi. Il diametro delle radici nodali è correlato alle dimensioni e al numero di grandi vasi xilematici, i primi che variano ampiamente da 0,5 mm a 5,0 mm. Queste radici nodali formano anche una guaina rizomatosa, con un ipoderma che mostra uno sclerenchima lignificato nella corteccia esterna (esoderma), un aerenchima lisigeno nella porzione centrale della corteccia e granuli di amido nella stele. Oltre all'architettura e ai tratti morfologici, i composti organici essudati dalle radici svolgono un ruolo importante nel determinare la germinazione, l'insediamento e la sopravvivenza delle piante, con plausibili effetti allelopatici e/o affinità per la simbiosi microbica.
L'attività enzimatica delle radici e i dettagli più fini della morfologia, tra cui la pigmentazione del cappello radicale e il potenziale di ringiovanimento in caso di lesione, sono stati documentati nelle varietà di canna da zucchero coltivate in coltura idroponica9. La crescita delle radici mostra una risposta altamente plastica ai cambiamenti nell'ambiente del suolo, sia in termini di forma che di dimensioni dell'apparato radicale. La varietà di canna da zucchero più efficiente sarebbe quella che ha pochi germogli o un numero ottimale di germogli, con un numero corrispondentemente inferiore di radici, favorendo una migliore sopravvivenza in condizioni di stress. Lo studio sistematico dell'apparato radicale dovrebbe, quindi, costituire una componente importante di qualsiasi programma di miglioramento delle colture10. La maggior parte degli esperimenti incentrati sulle radici si basa principalmente su aspetti di sviluppo, mentre spesso manca un focus sulla plasticità funzionale11. Oltre alla distribuzione strutturale, la plasticità funzionale delle radici svolge un ruolo cruciale nella sopravvivenza sotto stress e, pertanto, supporterebbe gli allevatori nei loro sforzi per includere i tratti dell'apparato radicale nella pipeline di selezione per la tolleranza allo stress abiotico e migliorare la robustezza della canna da zucchero.
Considerando la sua importanza nel sostenere la crescita e la resa in ambienti stressanti, è essenziale esplorare e utilizzare la variabilità intrinseca nei tratti dell'apparato radicale della canna da zucchero. L'enfasi sulla selezione dei tratti dei componenti e dei meccanismi che conferiscono un apparato radicale superiore è la strada da seguire per migliorare le prestazioni delle colture in condizioni climatiche mutevoli. La valutazione fenotipica è un processo lungo e costoso; Tuttavia, l'integrazione di approcci su più fronti aggiungerebbe un enorme valore alla sua utilità nel miglioramento delle colture. In questo manoscritto vengono descritti quattro diversi approcci per la fenotipizzazione delle radici nella canna da zucchero, ciascuno con i propri pregi e difetti, il che implica che è necessario uno sforzo concertato per arrivare a risultati completi e olistici.
1. Scavo in campo mediante campionamento di trincee
Figura 1: Metodo di campionamento della trincea per lo scavo sul campo delle radici. (A) Trincea scavata lateralmente lungo il campo, (B) getto d'acqua e (C) vista interna che mostra la profondità della trincea. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
2. Campionatore di carote di radice per ridurre gli errori di campionamento
Figura 2: Campionatore del nucleo radice. (A) Dimensioni, (B) vista dall'alto e (C) sito di campionamento. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
3. Struttura di fenotipizzazione radicale per facilitare il campionamento in diverse fasi fenodinamiche
Figura 3: Struttura della fenotipizzazione radice. (A) Dimensioni, (B) panoramica dei tre compartimenti e (C) vista di un compartimento. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
4. Coltura idroponica delle piante per studiare la biologia della rizosfera
Chimico | Concentrazione finale |
Nitrato di potassio | 0,608 grammi· L-1 |
Nitrato di calcio | 1.415 grammi· L-1 |
Diidrogeno fosfato di potassio | 0,164 grammi· L-1 |
Solfato di magnesio | 0,560 grammi· L-1 |
EDTA-sale monosodico ferrico | 6,00 g·250L-1 |
Acido borico | 1,43 g·250L-1 |
Cloruro di manganese tetraidrato | 0,91 g·250L-1 |
Solfato di zinco | 0,11 g·250L-1 |
Supfato rameico | 0,04 g·250L-1 |
Acido molibdico | 0,01 g250L-1 |
Tabella 1: Composizione della soluzione nutritiva modificata per la coltura idroponica della canna da zucchero.
Figura 4: Impianto idroponico. La configurazione (A) personalizzata per la coltivazione di canna da zucchero e (B) per il raccolto di 5 mesi (panno nero rimosso solo a scopo fotografico). Questa cifra è stata modificata da Hari et al.9. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Variazione dei caratteri morfologici radicali delle varietà di canna da zucchero
Immagini rappresentative dell'apparato radicale in Co 62175, scavato dal campo mediante campionamento in trincea e coltivato in una configurazione idroponica, sono presentate nella Figura 5A, B. Radici lunghe (~100 cm) sono state osservate nelle varietà Co 62175 e Co 99006, mentre Co 99006 ha registrato il peso radicale più elevato (127 g?...
Gli apparati radicali definiscono la produttività fuori terra della canna da zucchero, rendendo necessario che tutte le sue sfaccettature siano esplorate e comprese a fondo per lo sviluppo di varietà resistenti al clima. Un team di scienziati dell'ICAR-SBI, composto da fisiologi vegetali, un microbiologo, un ingegnere agrario, un biochimico e allevatori di piante, ha impiegato approcci su più fronti per la fenotipizzazione delle radici della canna da zucchero, tra cui lo scavo sul cam...
Tutti gli autori dichiarano che non sussistono conflitti di interesse.
Gli autori riconoscono l'infrastruttura e il supporto offerti dal direttore dell'ICAR-Sugarcane Breeding Institute, Coimbatore, per la creazione di strutture per la fenotipizzazione delle radici della canna da zucchero. Il finanziamento fornito dal Science and Engineering Research Board, Department of Science and Technology, Government of India, sotto forma di Early Career Research Award to KV (ECR/2017/000738), è debitamente riconosciuto. Gli autori ringraziano Brindha, Karpagam, Rajesh, Sivaraj e Amburose per la loro assistenza nella generazione di dati in modo meticoloso.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Aeration pump with pipeline accessories | Purchased from local sources | NA | Used for hydroponic culture of sugarcane |
Boric acid | Sisco Research Laboratories, India | 80266 | Preparation of modified Hoagland's solution |
Calcium nitrate | Central Drug House, India | 27606 | Preparation of modified Hoagland's solution |
Composted coir pith | Purchased from local sources | NA | Used for germinating sugarcane setts |
Cupric sulphate | Sisco Research Laboratories, India | 38869 | Preparation of modified Hoagland's solution |
DEAE-cellulose | Sisco Research Laboratories, India | 10529 | anion exchange resin for processing of root exudates |
EDTA-ferric monosodium salt | Sisco Research Laboratories, India | 59389 | Preparation of modified Hoagland's solution |
Farm yard manure | Purchased from local sources | NA | Used for germinating sugarcane setts |
Glass tanks | Fabricated in-house | NA | Used for hydroponic culture of sugarcane |
HPLC | Agilent Technologies | 1200 Infinity | Quantification of organic acids in root exudates |
Magnesium sulphate | Sisco Research Laboratories, India | 29117 | Preparation of modified Hoagland's solution |
Manganese chloride | Sisco Research Laboratories, India | 75113 | Preparation of modified Hoagland's solution |
Molybdic acid | Sisco Research Laboratories, India | 49664 | Preparation of modified Hoagland's solution |
Potassium dihydrogen phosphate | Central Drug House, India | 29608 | Preparation of modified Hoagland's solution |
Potassium nitrate | Central Drug House, India | 29638 | Preparation of modified Hoagland's solution |
Protrays | Fabricated in-house | NA | Used for germinating sugarcane setts |
Red soil | Purchased from local sources | NA | Used for germinating sugarcane setts |
Root core sampler | Fabricated in-house | NA | Used for in situ root sampling |
Sand | Purchased from local sources | NA | Used for germinating sugarcane setts |
Seralite-120 | Sisco Research Laboratories, India | 14891 | cation exchange resin for processing of root exudates |
Supporting frame | Purchased from local sources | NA | Used for hydroponic culture of sugarcane |
Water motor pump | Purchased from local sources | NA | Used for hydroponic culture of sugarcane |
Whatman filter paper grade 1 | Universal Scientific | 1001090 | Processing of root exudates |
WinRhizo PRO (software) | Regent Instruments Inc., Canada | STD4800 | Two-dimensional root scanner with software for analysis of roots |
Zinc sulphate | Sisco Research Laboratories, India | 76455 | Preparation of modified Hoagland's solution |
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