Metodi per rilevare la tosse e l'infiammazione delle vie aeree nei topi

Riepilogo

Qui, descriviamo la misurazione della tosse utilizzando un sistema di pletismografia di tutto il corpo (WBP) non invasivo e in tempo reale e le procedure normative per la raccolta di campioni di tessuto di topi e introduciamo alcuni metodi per valutare l'infiammazione delle vie aeree.

Abstract

La tosse cronica, che dura più di 8 settimane, è uno dei disturbi più comuni che richiedono cure mediche e i pazienti soffrono di un enorme onere socioeconomico e di un marcato peggioramento della qualità della vita. I modelli animali possono imitare la complessa fisiopatologia della tosse e sono strumenti importanti per la ricerca sulla tosse. Il rilevamento della sensibilità alla tosse e dell'infiammazione delle vie aeree è di grande importanza per lo studio del complesso meccanismo patologico della tosse. Questo articolo descrive la misurazione della tosse utilizzando un sistema di pletismografia di tutto il corpo (WBP) non invasivo e in tempo reale e le procedure normative per la raccolta di campioni di tessuto (inclusi sangue, polmone, milza e trachea) di topi. Introduce alcuni metodi per valutare l'infiammazione delle vie aeree, tra cui i cambiamenti patologici nelle sezioni polmonari e tracheali colorate con ematossilina ed eosina (HE), la concentrazione totale di proteine, la concentrazione di acido urico e l'attività della lattato deidrogenasi (LDH) nel surnatante del liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF) e i leucociti e la conta cellulare differenziale del BALF. Questi metodi sono riproducibili e servono come strumenti preziosi per studiare la complessa fisiopatologia della tosse.

Introduzione

La tosse è un importante comportamento di difesa per mantenere la pervietà delle vie aeree e proteggere i polmoni da sostanze potenzialmente dannose. Tuttavia, quando è disregolata, la tosse diventa una condizione patologica¹. La tosse cronica, solitamente definita come della durata di otto o più settimane, è uno dei sintomi più frequenti che richiedono cure mediche². Poiché la tosse cronica persiste spesso per anni, i pazienti soffrono di un enorme onere socioeconomico e di un marcato peggioramento della qualità della vita ^3,4,5<....

Protocollo

Tutte le procedure sono state approvate dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Medicina di Guangzhou (20240248) e sono state eseguite in stretta conformità con le linee guida approvate. In questo studio sono stati utilizzati topi C57BL/6 maschi privi di patogeni specifici del peso di 20-25 g. Tutti i topi sono stati alloggiati a temperatura controllata (22 ± 2 °C), umidità (50% ± 20%) e illuminazione (dalle 6:30 alle 18:30) in gabbie dal fondo solido con cibo e acqua disponibili ad libitum. La linea temporale del protocollo è illustrata nella Figura 1.

1. Istituzione di un model....

Risultati

La Figura 6 mostra immagini rappresentative di cambiamenti patologici nel polmone colorato con HE (Figura 6A, B), nella trachea (Figura 6C, D) e nella milza (Figura 6E, F). L'infezione da virus H1N1 ha provocato alterazioni infiammatorie nei polmoni di topo, tra cui edema e molti linfociti e infiltrazione di neutrofili. L'infezione da virus H1N1 ha anch.......

Discussione

Alcune tosse cronica refrattaria e post-infettiva sono condizioni comuni associate all'infezione da virus respiratorio²⁷. Al fine di valutare meglio la sensibilità alla tosse e l'infiammazione delle vie aeree, in questo studio è stato stabilito un modello murino di tosse utilizzando il virus H1N1. Modelli di tosse murina appropriati dovrebbero essere selezionati per altri studi in base allo scopo dello studio. La maggior parte degli studi precedenti ha utilizzato la cavia come modello animale in.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
4% paraformaldehyde	Biosharp	BL539A
Buxco Small Animal Whole Body Plethysmography System	DSI	—
Calcium-free and magnesium-free Hank’s Balanced Salt Solution	Beyotime	C0219
Citric acid	Sigma-Aldrich	C2404
Hematoxylin-Eosin	BASO Biotechnology	BA-4098
Heparin sodium	Alfa Aesar	A16198
Influenza A/California/7/2009 (H1N1) virus	ATCC	VR-1894
Isoflurane	RWD	R510-22
Lactate dehydrogenase assay kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A020-2-2
Normal saline	Guangzhou Zhongbo Biotechnology	1234-1
Pasteur pipet	NEST	318415
Pentobarbital sodium	Merck	P3761
Phosphate buffered saline	Meilunbio	MA0015
Total protein assay kit	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	A045-3
Uric acid assay kit	Thermo Fisher Scientific	A22181