Gli autori ringraziano Christiane Pahrmann per la sua assistenza tecnica e istologia performanti.

<html> Topi BALB / c per un peso minimo di 20 g in età da 8 a 12 settimane sono acquistati da Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). I topi sono alloggiati in condizioni convenzionali, alimentati pellet del mouse standard e acqua ad libitum. Anestetizzare mouse con isoflurano (2%) con una camera di induzione. <ol><li> Radere la zona del collo e il lato sinistro della gabbia toracica e disinfettare con l&#39;80% di etanolo. </li><li> Posizionare il mouse sul dorso e posto una maschera sul suo naso e la bocca per mantenere l&#39;anestesia. </li><li> Verificare i riflessi pizzicare la coda e le zampe posteriori per essere sicuri che il mouse è sufficiente anesthesized. </li><li> In vista microscopico eseguire una incisione mediana che separa la cervicale, i muscoli della pelle e tessuto che copre la trachea. </li><li> Quando la trachea è esposto tagliare un piccolo foro nel tessuto tra due anelli cartuccia di sotto della glottide per inserire il tubo endotracheale (Figura 1). Inserire il tubo endotracheale tenendo la parte craniale della trachea utilizzando micro forecepts chirurgico. Controllare il movimento del torace per essere sicuri che entrambi i polmoni sono ben ventilato. </li><li> La frequenza respiratoria (RR) dovrebbero essere circa 110 al minuto, con una pressione inspiratoria di 17 a 18 centimetri H 2 O. Girare il mouse con cura, situata sul lato destro, verso il lato sinistro. Eseguire una toracotomia leftsided tra il 3 e il 4 ° costola, e sezionare il tessuto muscolare e con attenzione, usando un Cauter per prevenire le emorragie. </li><li> Aprire il torace con attenzione, una volta che il torace è aperto, trovare il cuore, senza toccare il polmone con oggetti appuntiti. Ora rimuovere la parte del sacco pericardico che copre il cuore. </li><li> Il LAD si trova tra l&#39;arteria polmonare e l&#39;atrio sinistro. Utilizzare un Prolene 8-0 sutura (Ethicon, Norderstedt) per legare la LAD prossimale con una sutura singola (Figura 2). </li><li> Posizionare un drenaggio toracico (28G, catetere venale), tra il 4 e il 5 ° costola. </li><li> Chiudere l&#39;incisione del torace in strati, con 6-0 punti di sutura Prolene esecuzione (Ethicon, Norderstedt, Germania) per adattare le costole e suture Prolene 4-0 in esecuzione (Ethicon, Norderstedt, Germania) per chiudere la pelle. </li><li> Scolate il torace con l&#39;aiuto di una siringa da 2 ml con cura (Figura 3). Posizionare il mouse sul dorso. Ora prendete il tubo endotracheale e adeguare le anelli tracheali con una sola cartuccia punto singolo con 7-0 punti di sutura Prolene (Ethicon, Norderstedt, Germania). </li><li> Posizionare la maschera del mouse e chiudere la pelle con Prolene 4-0 esecuzione suture (Ethicon, Norderstedt, Germania). </li></ol> Validazione Ci sono diverse possibilità di confermare il successo della LAD-legatura. Il test della troponina può essere eseguito 6 a 18 ore dopo l&#39;intervento chirurgico, usando soltanto 150 litri di sangue, senza la necessità di eutanasia degli animali. Il sangue viene applicata a un kit personalizzato di test della troponina (T TROP sensibili, Roche, Mannheim) (Figura 4). Troponina è una proteina regolatrice della filamenti di actina della cellula muscolare, ci sono isotipi differenti nei tre tipi di muscolo. La cTnI e cTnT isotipi si trovano nel cuore e sono uscito nel danno tissutale. Il test standardizzato per la troponina T (cTnT) si basa su due specifici anticorpi monoclonali cuore, uno trappole della troponina nel campione di sangue, il secondo è un indicatore. La zona infartuata può essere identificato macroscopicamente dopo 3 giorni (Figura 5). TTC (2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro) colorazione dei tessuti misure di viabilità per valutare dimensioni dell&#39;infarto. Evans colorante blu (1,5%, 1,0 ml) in tampone fosfato salino (PBS) viene iniettato nella cavità ventricolare sinistra per misurare l&#39;area del miocardio ischemico. Il mouse è eutanasia e il cuore viene raccolto e sezionato in fette. Le fette di tessuto sono incubati in 1% di soluzione di TTC PBS, pH 7,4 a 37 ° C per 20 min. I tessuti sono fissati nel 10% PBS-formalina tamponata durante la notte a 2-8 ° C. TTC viene somministrato ex vivo per la tintura blu di Evans-negativi aree (Figura 6). Per istologia il mouse deve essere eutanasia e il cuore deve essere integrato per ulteriori elaborazioni. Dopo l&#39;esecuzione di sezioni di paraffina, le diapositive sono macchiati con H &amp; E (ematossilina e eosina) o tricromica di visualizzare tessuto fibrotico (Figura 7). <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1: tubo tracheale. 1A: Esposto trachea, dopo ventrale incisione cervicale. 1B: Trachea è aperto due anelli di cartilagine caudale alla laringe. 1C: tubo tracheale viene inserito nella trachea. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: Il cuore è esposto attraverso una toracotomia sinistra lato, il ragazzo è legato. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Dopo il torace è chiuso, uno scarico pleura viene eseguita. Il mouse è ancora sotto anestesia. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4: Due linee appaiono dopo pochi minuti quando il test della troponina positivo. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="Figura 5" /> Figura 5: mostra il cuore espiantato. 5A: vista macroscopico del cuore con l&#39;area ischemica con un colore sbiadito biancastro. 5B: Sezione del cuore infartuato, l&#39;area ischemica mostra in alto a destra.

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	<li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart.">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li><li>Jaquet, K., KT, K. r. a. u. s. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats:+what+is+the+mechanism.">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li><li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects.">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li></ol>

Finanziamento Il presente studio è stato sostenuto dalla Clinica Universitaria di Amburgo (MK, Donna Abilitazione Grant), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, Research Award 2009). Dichiarazione Tutti gli animali hanno ricevuto assistenza umana in conformità ai principi di cura degli animali da laboratorio, gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla Società Nazionale per la ricerca medica e la Guida per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio pubblicato dalla National Institutes of Health (National Institutes of Health pubblicazione 85-23, revisione 1985). Tutti gli animali sono stati ottenuti da Charles River Laboratories (Sulzfeld, Germania) e sono stati mantenuti in strutture di cura degli animali della Clinica Universitaria di Amburgo Eppendorf. Gli animali hanno ricevuto standard di cibo e acqua ad libitum.

In sintesi, questo video visualizza la LAD-legatura modello passo-passo e identifica LAD-legature nei topi, come gli interventi chirurgici facilmente realizzabile.

lad-ligation: a murine model of myocardial infarction

Modelli di ricerca di infarto e ischemia miocardica sono essenziali per studiare i processi acuti e cronici pathobiological e fisiopatologici in ischemia miocardica e di sviluppare e ottimizzare il trattamento futuro. Due diversi metodi di creazione di ischemia miocardica sono svolte nei roditori da laboratorio. Il primo metodo è quello di creare crio infarto, una tecnica veloce ma impreciso, dove viene applicato un crio-pen sulla superficie del cuore (1-3). Usando questo metodo lo scienziato non può garantire che la crio-cicatrice porta a ischemia, anche una vasta ferita del miocardio è creata che mostra gli effetti collaterali fisiopatologici che non sono legati a infarto del miocardio. Il secondo metodo è la legatura permanente della discendente anteriore sinistra (LAD). Qui il LAD è legatura con un punto singolo, formando una ischemia che può essere visto quasi immediatamente. Chiudendo il LAD, non ulteriormente il flusso di sangue è consentito in quell&#39;area, mentre il tessuto circostante miocardico non è quasi colpito. Questa procedura chirurgica imita gli aspetti pathobiological e fisiopatologici che si verificano in infarto legate ischemia miocardica. Il metodo introdotto in questo video dimostra la procedura chirurgica di un modello di infarto del mouse legando il LAD. Questo modello è conveniente per gli studi pathobiological e fisiopatologiche e sui immunobiologici infarto cardiaco. La tecnica illustrata assicura un&#39;elevata precisione e correla bene con sezioni istologiche.

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LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Questo video illustra come utilizzare un modello veloce e affidabile per lo studio dei processi fisiopatologici pathobiological e di ischemia miocardica.

LAD-Legatura: un modello murino di infarto miocardico

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

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