Gli autori sono molto grati al dottor Richard Inculet per aver fornito i tessuti bronchiali. Ricerca etica approvazioni consiglio sono stati ottenuti da San Giuseppe Healthcare Hamilton e The University of Western Ontario / London Health Sciences Centre (Dr. David McCormack), Tissue and Archives Comitato, Dipartimento di Patologia. Ringraziamo anche Ernie Spitzer (Microscopia Elettronica, McMaster University) per aver fornito TEM delle nostre culture ALI, Farkas e Daniela per aver fornito alcuni dei materiali necessari per immunocolorazione. Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione di blocco termine dalla Società Ontario Toracica; Dr. Asma Yaghi è stato sostenuto da una borsa di studio FSORC, Sanità San Giuseppe, Hamilton, Ontario, Canada.

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	<li>Phillips, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+Cells+on+Transwell+Inserts+-+Tips+and+Techniques+[Internet].">Growing Cells on Transwell Inserts - Tips and Techniques [Internet].</a> Corning Life Sciences, Technical Resources, Online Training. , (2008).</li><li>Turi, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+activates+anion+exchange+protein+2+and+AP-1+in+airway+epithelial+cells.">Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 283, L791-L798 (2002).</li><li>Lechner, J. F., Haugen, A., McClendon, I. A., Pettis, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+growth+of+normal+adult+human+bronchial+epithelial+cells+in+a+serum-free+medium.">Clonal growth of normal adult human bronchial epithelial cells in a serum-free medium.</a> In Vitro. 18, 633-642 (1982).</li><li>Yoshisue, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+ciliated+bronchial+epithelium+1,+a+ciliated+cell-associated+gene+induced+during+mucociliary+differentiation.">Characterization of ciliated bronchial epithelium 1, a ciliated cell-associated gene induced during mucociliary differentiation.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 491-500 (2004).</li><li>Wetering, S. v. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+secretory+leukocyte+proteinase+inhibitor+(SLPI)+production+by+human+bronchial+epithelial+cells:+increase+of+cell-associated+SLPI+by+neutrophil+elastase.">Regulation of secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI) production by human bronchial epithelial cells: increase of cell-associated SLPI by neutrophil elastase.</a> J. Investig. Med. 48, 359-366 (2000).</li><li>Tristram, D. A., Hicks, W., Hard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+and+human+bronchial+epithelium.">Respiratory syncytial virus and human bronchial epithelium.</a> Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 124, 777-783 (1998).</li><li>Mattinger, C., Nyugen, T., Schafer, D., Hormann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+serum-free+culture+conditions+for+primary+human+nasal+epithelial+cells.">Evaluation of serum-free culture conditions for primary human nasal epithelial cells.</a> Int. J. Hyg. Environ. Health. 205, 235-238 (2002).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culture of epithelial cells. , 1-23 (1992).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+bronchial+epithelial+cell+cultures+in+Culture+of+specialized+cells+series.">Normal human bronchial epithelial cell cultures in Culture of specialized cells series.</a> Culture of epithelial cells. , 181-196 (1992).</li></ol>

In questo studio abbiamo presentato i metodi dettagliati per la cultura e l&#39;espansione delle primarie cellule epiteliali bronchiali umane. Abbiamo dimostrato come espianti e trapianti di tessuto bronchiale, colta nei media che promuovono la crescita delle cellule epiteliali, in grado di fornire una fonte continua di cellule epiteliali delle vie respiratorie umane per gli studi di non-differenziati modelli cellulari (in immersione) e differenziata (cresciuta in aria-liquido) . Queste cellule possono essere utilizzate...

Altri requisiti: incubatore, biologici di sicurezza cabinet (BSC), centrifughe, piastre di coltura da 100 mm, provette sterili (15 ml, 50 ml, e 2 ml), puntali sterili, manico bisturi e lame, di piccole forbici affilate, camici e guanti. Questi possono essere ottenuti dai vostri fornitori preferiti.

primary human bronchial epithelial cells grown from explants

Cellule epiteliali bronchiali umane sono necessarie per modelli cellulari della malattia e per indagare l&#39;effetto di eccipienti e agenti farmacologici sulla funzione e la struttura delle cellule epiteliali umane. Qui si descrivono in dettaglio il metodo di coltivazione cellule epiteliali bronchiali dal tessuto delle vie aeree bronchiali che viene raccolto dal chirurgo al momento della chirurgia polmonare (ad esempio il cancro ai polmoni o di riduzione del volume polmonare). Con l&#39;approvazione etica e il consenso informato, il chirurgo prende ciò che è necessario per patologia e ci fornisce una porzione bronchiale che è lontano dalle zone malate. Il tessuto viene quindi utilizzato come fonte di espianti che possono essere utilizzati per la coltivazione di cellule primarie epiteliali bronchiali in coltura. Segmenti bronchiali circa 0,5-1cm di lunghezza e ≤ 1 centimetro di diametro, sono sciacquati con EBSS freddi e eccesso di tessuto parenchimale è stato rimosso. I segmenti sono tagliati aperti e tritata in 2-3mm<sup&gt; 3</sup&gt; Pezzi di tessuto. I pezzi sono usati come fonte di cellule primarie. Dopo piastre di coltura rivestimento 100 millimetri per 1-2 ore con una combinazione di collagene (30 mg / ml), fibronectina (10 mg / ml), e BSA (10 mg / ml), le piastre sono graffiati in zone 4-5 e tessuti i pezzi sono posti in aree graffiato, allora terreno di coltura (DMEM / Ham F-12 con additivi) adatto per la crescita delle cellule epiteliali viene aggiunto e le piastre sono poste in un incubatore a 37 ° C in 5% di CO<sub&gt; 2</subAria&gt; umidificata. Il terreno di coltura viene cambiato ogni 3-4 giorni. Le cellule epiteliali crescono dai pezzi che formano anelli di circa 1,5 cm di diametro in 3-4 settimane. Espianti possono essere riutilizzati fino a 6 volte spostandoli in nuovi preverniciato piatti. Le cellule sono sollevati utilizzando tripsina / EDTA, in pool, contati, e ri-placcato in fiaschi cellulare T75 Bind per aumentare il loro numero. T75 fiaschi seminato con 2-3 milioni di cellule crescono confluenza a 80% in 4 settimane. Espanse cellule primarie umane epiteliali possono essere coltivate e ha permesso di differenziare in aria-liquido. Metodi descritti qui fornire una fonte abbondante di cellule epiteliali bronchiali umane isolate da tessuti freschi e permettono di studiare queste cellule come modelli di malattie e per la farmacologia e lo screening tossicologico.

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Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Qui si descrive un metodo dettagliato per la coltivazione primaria cellule epiteliali bronchiali umane da espianti di tessuti umani delle vie aeree bronchiali tra cui la crescita differenziati su un aria-liquido. Questo metodo fornisce una fonte abbondante di cellule primarie per indagare il ruolo dell&#39;epitelio delle vie aeree dei polmoni umani nella salute e nella malattia.

Primario cellule epiteliali bronchiali umane Grown da espianti

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

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23.9K Views.  McMaster University. Qui si descrive un metodo dettagliato per la coltivazione primaria cellule epiteliali bronchiali umane da espianti di tessuti umani delle vie aeree bronchiali tra cui la crescita differenziati su un aria-liquido. Questo metodo fornisce una fonte abbondante di cellule primarie per indagare il ruolo dell'epitelio delle vie aeree dei polmoni umani nella salute e nella malattia.