Inizia configurando la workstation di automazione. Incorpora un dispositivo di illuminazione per micropiastre, come un optoPlate, che consente un comodo accesso al braccio di presa del robot. Successivamente, elabora un foglio di calcolo con lo script MATLAB disponibile per programmare optoPlate.
Eseguire il programma di stimolazione della luce lampeggiando sull'optoPlate. Per programmare il robot, risolvere eventuali errori potenziali per garantire il corretto funzionamento del supporto e delle definizioni di LabWare. Eseguire più volte una piastra vuota attraverso il ciclo di script per verificare la capacità del braccio di presa del robot di prelevare e posizionare la piastra in modo accurato.
Quindi, selezionare le colonie dalle piastre per impostare la piastra campione. Quindi inocularli in tre millilitri di terreno sintetico completo in provette di coltura di vetro. Incubare queste colture per una notte a 30 gradi Celsius su un tamburo a rulli al buio.
In cuvetta, diluire 200 microlitri di coltura in un millilitro di terreno sintetico completo. Registrare la sua densità ottica utilizzando uno spettrofotometro. Successivamente, diluire ogni coltura durante la notte a una densità ottica di 0,1 in provette di coltura di vetro.
Pipettare le colture diluite in una piastra da 96 pozzetti. Includere pozzetti con terreni vuoti e cellule non fluorescenti come controlli negativi. Incubare la piastra del campione in un incubatore shaker a 30 gradi Celsius per cinque ore.
A questo punto, posizionare la piastra del campione sull'agitatore riscaldatore. Avviare lo script di automazione facendo clic su Esegui. Una volta che la misurazione iniziale è stata registrata sul lettore di piastre, avviare il programma di stimolazione della luce accendendo la ciabatta del dispositivo di illuminazione.
I valori di fluorescenza nel tempo per un ceppo optogenetico hanno mostrato che il livello di fluorescenza complessivo era proporzionale al ciclo di lavoro della stimolazione luminosa. I corrispondenti valori di densità ottica erano coerenti, suggerendo che la crescita non è stata influenzata dalle variazioni delle condizioni di luce. Diversi ceppi optogenetici hanno impiegato risposte diverse all'intensità dell'impulso luminoso, al periodo e alle variazioni del ciclo di lavoro.
