1 Per iniziare, prelevare il tessuto tumorale2 dai pazienti e lavorarlo con un tritatutto. 3 Inclinare la capsula di Petri contenente il tumore tritato 4 verso l'alto fino a 45 gradi e rimuovere con cura 2,5 millilitri 5 del terreno H-GPSA. 6 Per lavare i pezzi di tumore, aggiungere due millilitri 7 di tampone di lisi dei globuli rossi e incubare in un agitatore orbitale 8 a bassa velocità.
9 Quindi, eliminare completamente il tampone di lisi. 10 Successivamente, aggiungere quattro millilitri di terreno organoide 11 derivato dal paziente ai pezzi di tessuto, 12 e trasferire i pezzi di tessuto in una piastra a sei pozzetti con attacco ultra basso. 14 Incubare la piastra in un agitatore orbitale 15 per due-quattro settimane.
16 Ogni due giorni, sostituire metà del terreno di coltura 17 con un terreno organoide fresco preriscaldato di derivazione dal paziente. 18 Per prevenire l'ipossia tissutale, 19 trasferire gli organoidi derivati dal paziente 20 in una piastra di Petri di vetro sterile 21 e osservare la morfologia dei tessuti al microscopio. 22 Quindi, utilizzando un bisturi, tagliare il fazzoletto adesivo.
23 Organoidi derivati da pazienti ottenuti con il metodo chopper, 24 hanno raggiunto la forma arrotondata desiderata entro una settimana 25 rispetto a quelli tritati manualmente. 26 E il numero di organoidi formati 27 era significativamente più alto utilizzando questo metodo.
