Per iniziare, rilasciare il topo iniettato con colorante blu bromofenolo dal telaio stereotassico. Dopo l'anestesia, fissare il mouse su una tavola di gommapiuma con del nastro adesivo. Praticare un'incisione da uno a due millimetri nell'appendice atriale destra.
Inserire un ago per infusione nel ventricolo sinistro. Infusi 20 millilitri di soluzione salina pre-raffreddata, seguiti da 20 millilitri di soluzione ghiacciata di paraformaldeide al 4%. Ora fai un'incisione lungo la linea mediana dal collo al naso per rimuovere la pelle ed esporre il cranio.
Usa una pinza o delle forbici per eliminare i muscoli residui sul cranio. Posizionare la punta di una lama delle forbici sottili tra il forame magno e il cervello con un bordo affilato rivolto verso l'osso all'estremità rostrale della sutura sagittale mediana. Far scorrere delicatamente e tagliare il cranio lungo la sutura sagittale mediana.
Usa il forcipe per rimuovere il cranio, esponendo il cervello. Dopo aver acceso il criostato a microtomo rotante, impostare la temperatura della camera a meno 20 gradi Celsius. Versare un po' di temperatura di taglio ottico, o composto OCT, per coprire uniformemente la superficie del disco del campione.
Posizionare il disco del campione nella camera criogenica e lasciare che l'OCT si solidifichi. Fissare il disco alla testa del campione. Quindi, avvicinare la lama al blocco e rifilare il blocco OCT per creare un piano piatto parallelo al disco.
Usando una lama da barba, tagliare il cervello in direzione coronale lontano dal sito di iniezione, in uno stampo a fetta di cervello. Posizionare il tessuto cerebrale contenente il sito di iniezione, con il lato tagliato rivolto verso il basso, sul piano piatto dell'OCT. Versare l'OCT sul cervello e posizionare il disco nella camera criogenica, consentendo al blocco del campione di solidificarsi.
Tagliare il blocco del campione fino a quando la regione target non si avvicina e fare diverse sezioni dal livello del sito di iniezione. Usa un piccolo pennello da scrittura freddo per raccogliere le fette di cervello coronale in una piastra a sei pozzetti contenente PBS a temperatura ambiente. Usando un pennello, raccogli le sezioni del cervello dalla piastra a sei pozzetti e posizionale su un vetrino.
Dopo l'essiccazione, osservare visivamente la regione iniettata nelle sezioni cerebrali.
