Per iniziare, mescola la quantità calcolata di ciascun ceppo batterico per un totale di circa 5 milioni di unità formanti colonie per millilitro. Centrifugare la miscela a 7.000 g per sette minuti a quattro gradi Celsius. Quindi, pipettare con cura il surnatante.
Risospendere il pellet nella soluzione salina bilanciata di Hank con bassa capacità tampone e glucosio. Ora, stacca i chip di organi contenenti le cellule epiteliali vaginali umane differenziate dai baccelli. Collegare l'uscita del canale basale del chip con un puntale per pipetta.
Aggiungere 200 microlitri di terreno di differenziazione privo di antibiotici all'ingresso del canale basale senza spingere verso il basso lo stantuffo della pipetta. Rilasciare il puntale della pipetta dalla pipetta, consentendo al fluido di fluire liberamente attraverso il canale. Quindi, pipettare 37 microlitri di inoculo batterico all'ingresso del canale apicale del chip durante l'aspirazione dall'uscita.
Tirare la punta. Quindi, tappare sia l'ingresso che l'uscita del canale apicale con i puntali delle pipette. Per i chip di controllo, pipettare 37 microlitri di soluzione salina bilanciata di Hank con bassa capacità tampone e glucosio nell'ingresso del canale apicale.
Dopo aver aspirato qualsiasi mezzo sulla superficie del chip, posizionare i chip in una capsula di Petri da 150 millimetri. Colonie di L. crispatus e G. vaginalis sono state rilevate entro 48 ore dalla placcatura, confermando che sia i batteri sani che quelli disbiotici si sono innestati nei chip vaginali. Il pH dei chip vaginali inoculati con L. crispatus era simile a quello dei chip di controllo non inoculati e, quando co-coltivati con G.vaginalis, hanno sperimentato un aumento significativo del pH.
