Per iniziare, rimuovere dal congelatore il crioviale contenente le cellule CD34+ del sangue del cordone ombelicale. Scongelare le cellule a bagnomaria prima di trasferirle in una provetta da 50 millilitri. Mentre si agita la provetta goccia a goccia, aggiungere alla provetta 10 volte il volume delle cellule di IMDM preriscaldato contenente il 50% di FBS e 0,1 milligrammi per millilitro di DNasi.
Centrifugare la sospensione cellulare a 500 G per cinque minuti. Risospendere il pellet in 20-40 microlitri di PBS contenente penicillina e streptomicina. Conservare le celle sul ghiaccio fino al momento dell'uso.
Preparare una siringa da tre millilitri con un ago da mezzo pollice calibro 27. Preparare una siringa da insulina da 0,5 millilitri con un ago da 29 gauge da 12,7 millimetri contenente la sospensione cellulare CD34+ del sangue del cordone ombelicale. Quindi, prepara una siringa da insulina da un millilitro con un ago da 29 pollici calibro 0,5 con 100 microlitri di buprenorfina.
Trasferire il topo anestetizzato su un cono nasale ed eseguire un pizzicamento delle dita dei piedi per confermare la sua prontezza per l'iniezione. Appoggia il topo sulla schiena e fletti le zampe posteriori. Per fissare le zampe posteriori, posizionare il pollice della mano non dominante sul piede, il medio sull'anca e l'indice all'esterno del femore.
Strappare delicatamente i peli intorno alla rotula e pulire l'area con un tampone imbevuto di alcol. Ora usando una siringa da tre millilitri con un ago da mezzo pollice calibro 27, praticare delicatamente un foro attraverso la pelle verso il femore. Una volta che l'ago è nell'osso, ruotalo in senso orario fino a quando l'intero ago non è nell'osso.
Rimuovere l'ago ruotandolo in senso antiorario fino a metà corsa. Strofinare l'ago intorno all'ago con un tampone imbevuto di alcol e continuare a ruotare l'ago in senso antiorario per una rimozione completa. Quindi, inserire la siringa da insulina da 0,5 millilitri contenente sospensione cellulare nello sfizio femorale.
Una volta che l'ago è nell'osso, rilasciare la presa sulla gamba e iniettare delicatamente 25 microlitri di sospensione nel femore. Infine, iniettare la buprenorfina per via sottocutanea e riportare il topo nella sua gabbia di casa, permettendogli di riprendersi dall'anestesia.
