Microscopia a fluorescenza ex vivo di sezioni di tessuto cerebrale murino

Per iniziare, prendi il cervello congelato in un composto a temperatura di taglio ottimale da una conservazione di 80 gradi Celsius e posizionalo all'interno della camera del criostato. Lasciare che i campioni si riscaldino alla temperatura della camera. Usando un rasoio a taglio singolo, tagliare il cervello coronalmente nel sito di iniezione.

Montare il campione sul disco del campione utilizzando una piccola quantità di temperatura di taglio ottimale. Applicare un'ampia pressione con un peso freddo all'interno della camera per un montaggio stabile del campione. Spostare il campione montato e il disco del campione sulla testa del campione.

Taglia il tessuto alla profondità desiderata prelevando sezioni da 20 micrometri. Una volta raggiunta la profondità desiderata, regolare il criostato in modo da prelevare sezioni da cinque a sette micrometri del campione. Quindi montare le sezioni sul vetrino pre-etichettato.

Fissare le sezioni nel 4% di paraformaldeide per 15 minuti. Dopo il fissaggio, sciacquare questo vetrino tre volte con DPBS. Aggiungere una goccia da 40 microlitri di terreno di montaggio contenente DAPI sul vetrino.

Posizionare con cautela un vetrino coprioggetto sopra il supporto. Al microscopio a fluorescenza, visualizzare il tessuto utilizzando DAPI e Cy5.5. Nella microscopia a fluorescenza ex vivo di tessuti tumorali, il segnale fluorescente CY 5.5 osservato ha confermato la consegna di nanoparticelle magnetiche.