Saggio su sangue intero con doppia co-stimolazione per l'analisi antigene-specifica dell'immunità dell'ospite a patogeni fungini e virali

La nostra ricerca si concentra sul monitoraggio immunitario dei pazienti nell'unità di terapia intensiva. Alcuni pazienti sviluppano una grave polmonite virale durante la ventilazione meccanica. Isoliamo la causa dei virus, ma caratterizziamo anche la risposta immunitaria locale e sistemica utilizzando il protocollo presentato in questo video per identificare i fattori di rischio immunologici.

I saggi tradizionali su cellule T antigene-specifiche basati su cellule mononucleate isolate sono altamente suscettibili ai fattori confondenti pre-analitici, richiedono tempo e risorse e grandi quantità di sangue. Ciò pone gravi limitazioni all'implementazione di saggi antigene-specifici sulle cellule T nella ricerca clinica o nell'uso clinico di routine come biomarcatori prognostici o diagnostici. Presentiamo un protocollo di dosaggio immunologico versatile, che consente varie letture a valle a partire da un minimo di 250 micros di sangue per stimolo.

Ciò consente di effettuare le applicazioni, anche quando il volume è limitato o è necessario eseguire lo screening di diversi antigeni. Inoltre, il nostro test è facile da eseguire e suscettibile a diversi agenti patogeni. Oltre alla sua versatilità e al basso volume di sangue richiesto, il nostro protocollo è stato utilizzato come ambiente di stimolazione completamente e specificamente ottimizzato per le risposte delle cellule T-helper indotte dall'antigene.

Ciò è stato ottenuto attraverso la stimolazione dual core, che rende anche il protocollo più robusto nei confronti di fattori confondenti, come la farmacoterapia immunosoppressiva o i ritardi pre-analitici. Stiamo utilizzando questo protocollo per il monitoraggio immunitario dei pazienti con polmonite virale associata alla ventilazione. I nostri collaboratori a Wuerzburg e Houston stanno lavorando a una traduzione clinica di saggi immunologici specifici per il citomegalovirus.

Inoltre, stanno utilizzando questo protocollo per studi sull'immunopatogenesi fungina e studi di immunoterapia preclinica in modelli murini per infezioni opportunistiche.