Supportato da NIH R01 HL74082, la Fondazione Hartwell, e la Fondazione Chirurgia Focused Ultrasound.

1. Microbolle di produzione <ol><li> Per preparare microbolle albumina (MB), posto una soluzione 1% di albumina sierica in soluzione fisiologica in un pallone con una coltre di gas (octafluoropropane) sopra la fase acquosa. Sonicare brevemente la soluzione (30 sec), con un disintegratore ultrasuoni dotata di un esteso ½ &quot;sonda al titanio. Questa formulazione è simile a Optison (GE Heathcare), che viene fornito in una vasta concentrazione di 0,5-1,2 x 10 9 MB / ml. Determinare diametro medio MB con un Coulter Multisizer contatore. albumina Il diametro medio MB utilizzati in questo studio è stato 1.93um ± 1.63um. </li><li> Per fabbricare MB lipidi, preparare una dispersione acquosa di 1 mg / ml di polietilenglicole stearato-40 (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) e 2 mg / ml fosfatidilcolina distearoyl (Avanti Polar Lipids, alabastro, AL) e sonciate come precedentemente descritto (1.1) con il gas decafluorobutane. Determinare diametro medio MB con un contatore Multisizer Coulter. Il diametro medio MB lipidi utilizzati in questo studio è stato 2.01um ± 1.29um. </li></ol> 2. Nanoparticelle di fabbricazione <ol><li> Questi metodi sono stati adattati da acqua in olio in acqua tecnica di emulsione evaporazione dei solventi descritto da Davda (2002) e Chappell (2008). </li><li> Preparare un 2% di poli (alcole vinilico) PVA soluzione sciogliendo 20 gr di PVA in 1000 ml di acqua deionizzata (DI). Lasciare la soluzione per sciogliere completamente su un piatto mescolare durante la notte. Soluzione centrifugare a 1000 rpm per 10 minuti e filtrare con un filtro 0.22μm sterile per rimuovere ogni residuo PVA non disciolti. </li><li> Per fabbricare albumina di siero bovino (BSA) caricati poli (lattico-co-glicolico acido) (Plaga) nanoparticelle (NP), sciogliere 180mg di uncapped 85:15 Plaga a 6 ml di cloruro di metilene (MC) in un flaconcino di vetro scintillazione. Vortex MC / Plaga soluzione per 2 minuti. </li><li> Sciogliere payload desiderato (15 mg di BSA) in 1,5 ml di PBS. Aggiungere il PBS / BSA soluzione in due parti per la Plaga / MC soluzione con vortex intermittente. Soluzione posto in ghiaccio per 5 minuti e sonicare a 45W per 120 secondi. </li><li> Aggiungere il MC / Plaga / carico utile / soluzione PBS per 24ml del 2% PVA, in due porzioni con vortex intermedi. </li><li> Ponendo la soluzione in ghiaccio per 5 minuti e sonicare a 45W per 120. </li><li> Mescolare l&#39;emulsione NP per 12 ore su un piatto mescolate in una cappa aspirante per consentire l&#39;evaporazione di MC e NP stabilizzazione. </li><li> Centrifugare la sospensione per 25 minuti a 20.000 rpm a 4 ° C due volte per isolare e rimuovere i residui NP PVA. Risospendere il pellet in 8 ml di acqua deionizzata e centrifugare per 10 minuti a 1000 rmp a 4 ° C per isolare la popolazione di 100 nm di NP. </li><li> Isolare il supernatante e flash congelare a -80 ° C. liofilizzare il campione congelato per 48 ore. Conservare le particelle liofilizzato in un essiccatore a -80 ° C fino al momento dell&#39;utilizzo. </li></ol> 3. Composito di consegna del veicolo di fabbricazione (Protocollo Adattato da VisEn Note Chimica) <ol><li> Conversione di VivoTag680 alle funzionalità di superficie carbossi <ol><li> Combina un flaconcino di VivoTag680 con 50 ml di 1.0 M HEPES, pH 7 e anidride succinico (2,5 mg, 25 ìmol) in 25 microlitri di DMSO. Aggiungere 50 ml di NaOH 1,0 M a questa soluzione, accuratamente mescolato, permettono la soluzione di reagire per 2 ore a temperatura ambiente al riparo dalla luce. Purificare le particelle con Bio-Rad Biogel (P100, medio) ad eluizione con 0,1 M MES tampone, pH 6,0. Raccogliere la fascia verde. </li></ol></li><li> Attivazione di carbossi-modificato VivoTag680 <ol><li> Combina carbossi-modified VivoTag680 ottenuto in 0,1 M MES, pH 6, con 1 mg di 1-etil-3-(3-dimetilamminopropil)-carbodiimmide (EDC) e 2,2 mg di N-hydroxysulfosuccinimide (Sulfo-NHS). Lasciare agire per 2 ore a temperatura ambiente. </li><li> Purificare particelle attivato da agente attivante eccesso (EDC) con gel filtrazione utilizzando Bio-Rad Biogel (P100, medio) ad eluizione con 0,1 M MES, pH 6.0 e raccogliere la fascia verde. Immediatamente coniugato le particelle attivati ​​per ammine contenenti molecole (ad esempio BSA-caricato nanoparticelle). Lasciare che la soluzione di reagire per 2 ore a temperatura ambiente. Amine NP coniugati sono stati purificati da eccesso di EDC per centrifugazione a 20.000 rpm per 60min a 4 ° C, versando il sopranatante dopo centrifugazione e risospensione in 0,1 tampone MES. </li></ol></li><li> Fermo qui per fabbricare VivoTag680 NP tag per gli studi di consegna della droga. </li><li> Coniugazione di carbossi-modificato PLGA-BSA-VivoTag680 nanoparticelle (NP680) per microbolle Albumina <ol><li> Combina NP680 ottenuto in 0,1 M MES, pH 6 con 1 mg di 1-etil-3-(3 dimetilamminopropil)-carbodiimmide (EDC) e 2,2 mg di N-idrossi-sulfosuccinimide (Sulfo-NHS). Lasciare che la soluzione di reagire per 1 ora a temperatura ambiente. </li><li> Purificare nanoparticelle attivato da eccesso di EDC per centrifugazione a 20.000 rpm per 60min a 4 ° C, versando il sopranatante dopo la centrifugazione. Risospendere nanoparticelle di 0,1 tampone MES. </li><li> Lavare MB albumina tre volte in degasato BSA PBS per rimuovere l&#39;eccesso di soluzione. </li><li> Immediatamente coniugato le particelle attivati ​​per ammine contenenti molecole (ad esempio microbolle albumina). Lasciare NP680 soluzione di reagire per 2 ore a temperatura ambiente. Purificare NP680 microbolle coniugati (Monica) dal NP680s non legati mediante lavaggio tre volte con PBS degasato. </li><li> Determinare la concentrazione di MNCAs utilizzando un contatore Coulter. </li></ol></li></ol> 4. Tumore del modello Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati in base ad un protocollo di animali approvati dalla University of Virginia e cura degli animali Comitato Usa. <ol><li> Linea C6 ratto Giloma delle cellule tumorali è stato fornito dal Dr. Jason Sheehan di UVA (Charlottesville, VA). <ol><li> Linea di cellule è stato testato per garantire le cellule sono state micoplasma libero. </li></ol></li><li> Mantenere la linea cellulare in F-12K Miscela di nutrienti integrato con siero di cavallo 16%, 3% di siero fetale bovino (FBS) e 1% Pen-Strep (Gibco, USA) a 37 ° C e 5% di CO 2. </li><li> Inoculare C57BLJ6/Rag1 topi (Jackson) con 3 x 10 6 C6 cellule tumorali Giloma sospesi in 300 ml di PBS per via sottocutanea nella arti posteriori di sinistra. Lasciare tumore di crescere per 12 giorni per raggiungere un diametro massimo di 8-10mm. </li></ol> 5. In applicazione ad ultrasuoni Vivo <ol><li> Anestetizzare i topi con un intraperitoneale (IP) iniezione combinazione di cloridrato di ketamina (60 mg / kg di peso corporeo) e xilazina (0,1 mg / kg di peso corporeo) prima del trattamento. </li><li> Preparare una manutenzione anestetico di cloridrato di ketamina (20 mg / kg di peso corporeo) e xilazina (0,3 mg / kg di peso corporeo). Somministrare, se necessario. </li><li> Cannulate la vena della coda di ogni animale per la via endovenosa (IV) la somministrazione di un MB, MB / NP o soluzione di Monica. </li><li> Misure perfusione del tumore <ol><li> IV infondere una soluzione MB lipidi (1x10 8 MB ​​/ g di peso corporeo in 0,3 ml di soluzione fisiologica 0,9%) ad una velocità di 15μl/min con una pompa di infusione continua (Harvard Apparatus PHD 2000; Harvard Apparatus, Holliston, MA). </li><li> Un Acuson Sequoia 512 ecografia sistema (Siemens Medical Solutions, Mountain View, CA), equipaggiato con un 8 13 MHz lineare 15L8 sonda è stato utilizzato in questo studio per quantificare la perfusione del tumore maggiore contrasto. Coppia la sonda 15L8 al tumore con una base d&#39;acqua gel per ultrasuoni (Parker Laboratori Aquasonic 100; Parker Laboratories, Inc., Fairfield, NJ). Eseguire la scansione del tumore in B-Mode per ottenere il miglior aereo di imaging. </li><li> In contrasto sequenza di impulsi (CPS) modalità, acquisire un video continuo la cattura del segnale microbolle intensità 5 secondi prima e 20 dopo, ad alta ampiezza di impulsi &quot;burst&quot; ad un frame rate di 13Hz. Ripetere le misurazioni in quattro piani d&#39;immagine. </li><li> Attendere dieci minuti per infondere MB albumina e iniziare il trattamento terapeutico a bassa frequenza per permettere MB lipidi per eliminare dalla circolazione. </li></ol></li><li> Ultrasuoni trattamento terapeutico <ol><li> Dieci minuti dopo le misurazioni della perfusione del tumore (5,3) coppia un diametro di 0,75&#39;&#39;1 trasduttore MHz sfocata (A314S; Panametrics, Waltham, MA) per la pelle sopra il tumore fianco. IV infondere un MB albumina (1 x10 5 MB / g di peso corporeo in 0,3 ml di soluzione fisiologica 0,9%), MB / NP (1 x10 5 MB / g e 0,2 NP ug / g di peso corporeo in 0,3 ml di soluzione fisiologica 0,9%) o Monica soluzione (1 x10 5 MNCAs / g di peso corporeo in 0,3 ml di soluzione fisiologica 0,9%). </li><li> Trattamento di consegna della droga <ol><li> Insonate per 60 minuti con la sequenza &quot;1-Burst&quot; impulsi (5.4.2.2), nel corso di una infusione continua di NP, co-iniezione di MB e NP, o MNCAs (5.4.1). </li><li> Il &quot;1-Burst&quot; sequenza di impulsi consiste di 100 consecutivi sinusoidi 1 MHz (duty cycle = 0,00002), ognuno di 1V picco-picco di ampiezza da un generatore di forme d&#39;onda (AFG-310, Tektronix, Inc., Beaverton, OR). Amplificare il segnale della forma d&#39;onda da un 55 dB RF con un amplificatore di potenza (ENI 3100LA; Electronic Industries di navigazione, Richardson, TX). </li></ol></li><li> Il trattamento ablativo <ol><li> Identico al 5.4.2.1, tuttavia insonate con il &quot;5-Burst-medio&quot; o &quot;5-Burst - estesa&quot; sequenza di impulsi </li><li> Il &quot;5-Burst-Media&quot; sequenza di impulsi è costituito da 5000 1 sinusoidi MHz (duty cycle = 0,005) ognuno di 1V picco-picco di ampiezza. Il &quot;5-Burst-Exteneded&quot; sequenza di impulsi è costituito da 10.000 sinusoidi 1 MHz (duty cycle = 0,01) ciascuno di 1V picco-picco di ampiezza. </li><li> Nel corso del tempo di controllo della temperatura esperimento tumore con l&#39;inserimento di un ago sonda termocoppia (Omega di tipo T, HYP1-30-1/2-TG-60-SMPW-M) 2 centimetri nel tumore. Record misure di temperatura ogni cinque minuti. </li></ol></li></ol></li><li> Ripetere le misurazioni perfusione del tumore, come descritto in 5.3 dieci minuti dopo il trattamento terapeutico. </li></ol> 6. Quantificazione perfusione del tumore <ol><li> Utilizzando il programma CPS sulla Sequoia, accedere alla modalità ACQ. Seleziona °regione e di interesse che comprende il volume totale del tumore. Curve di recupero perfusione verrà generato la forma y = A (1 - e-βt) + C (Sadlowski 2002; Chromas 2001; Yeh 2004) che sono adatti ai dati CPS. Valutare β, una misura relativa della velocità dei globuli rossi, pre-trattamento e post-trattamento. </li><li> Esportare file CPS per analisi off-line. Convertire i dati in file avi. Rompere i file avi in ​​frame-by-frame sequenze di immagini. Utilizzando Compaq Visual Fortan, o un pacchetto software simile, generare un tempo media di immagine di tutti i fotogrammi dal impulsi distruttivi a 8 secondi dopo l&#39;impulso distruttivo. </li><li> Per determinare perfusi zona del tumore, utilizzando il software ImageJ, applicare una soglia di 247 a 8-morso di tempo media di immagine CPS e quantificare i pixel percentuale maggiore all&#39;interno del volume del tumore. Sovrapporre la corrispondente immagine B-mode con il tempo di media immagine thresholded di definire con precisione nell&#39;area tumorale. </li><li> Media la percentuale perfuso zona per un minimo di quattro clip CPS di ottenere una superficie finale perfuso in un punto dato momento per un tumore particolare. </li><li> Prendere il prodotto della zona perfusi per cento (6,4) e β (.1) per determinare il flusso relativo tumore del sangue. </li></ol> 7. Biodistribuzione nanoparticelle nel tumore <ol><li> Dodici giorni prima del trattamento con fluorescente topi posto NP su una dieta a basso alfasprot (Harlan, Indianapolis IN) per ridurre autofluorescenza causati dalla normale del mouse chow quando imaging. </li><li> Shave il sito di imaging (a fianco del fegato) per rimuovere tutti i capelli. </li><li> Eliminare i peli residui con un agente chimico di rimozione dei capelli, come Nair. <ol><li> Risciacquare rimozione di tutti i residui chimici o capelli una bruciatura chimica si possono verificare. </li></ol></li><li> Topi immagine sul sistema FMT (VisEn Medica) prima del trattamento e le ore 0, 1, 4, e 24 dopo il trattamento, come descritto al punto 5.4.2. </li><li> Prima di immagini topi anestetizzare con un&#39;iniezione combinazione IP di cloridrato di ketamina (60 mg / kg di peso corporeo) e xilazina (0,1 mg / kg di peso corporeo). Del mouse posto sulla cartuccia di imaging. Acquisire immagini di riflettanza in luce bianca e modalità fluorescenti. Effettuare fluorescenti immagini tomografiche nel canale VT680. </li><li> Impiegare la FMT software per generare ricostruzioni in 3D dei dati di immagini utilizzando una equazione normalizzata Nato. Dopo la ricostruzione, selezionare i volumi di interesse (VOI è), disegnando una regione di interesse (ROI) in tutti e 3 i piani d&#39;immagine (X, Y, Z). Un valore medio fluorescenti e il volume totale e la concentrazione VOI fluorocromo, a causa fluorescente tag BSA NP, verrà generato per VOI è che comprende i piedi e il fegato. </li></ol> 8. Tasso di crescita del tumore <ol><li> Valutare il volume del tumore prendendo misurazioni giornaliere con i calibri digitali. Calcolare i volumi del tumore con una approssimazione ellissoide; V = 1 / 6 abc π. Dove a, b, ec sono i diametri massimi del tumore misurati in tre piani ortogonali. </li></ol> 9. Trattamento del tumore e analisi <ol><li> Sette giorni dopo gli animali eutanasia trattamento. Cannulate il ventricolo sinistro e del sangue exsanguinate con 10 ml del 2% eparinizzato CaCl 2 Tris Buffer (0,68 mM) perfusione, seguita da 10ml Tampone Tris CaCl 2 (0,68 mM), ciascuno per 10 minuti a 100 mmHg. </li><li> Perfusione-fix dei tessuti con un infuso di paraformaldeide 4% in PBS (4 ° C) per 10 minuti a 100 mmHg. Lasciare campione per fissare per 60 minuti. </li><li> I campioni d&#39;accisa, incorporare in paraffina, e tagliare in 5 micron sezioni. </li><li> Eseguire serie ematossilina-eosina per valutare alterazioni istologiche che possono essersi verificati a seguito di esposizioni a ultrasuoni. </li><li> Per rilevare cellule apoptotiche, utilizzare un terminale transferasi deoxynucleotidyl deossiuridina mediata etichettatura trifosfato nick fine (TUNEL) saggio (ApoptTag kit, Intergen Co., Norcross, GA, USA). </li></ol> 10. Rappresentante Risultati 1. Nanoparticelle di fabbricazione (2,0) <ol><li> Se questo protocollo è preformato correttamente NP sarà di forma sferica, come determinato dalla scansione elettronica microcopia (SEM), e hanno una distribuzione gaussiana attorno 100nm, come determinato da tecniche di diffusione della luce. Risultati rappresentativi sono mostrati in Figura 1. </li></ol> 2. Consegna farmaci mirati (5.4.1) <ol><li> Sulla base di studi pubblicati effettuati nel nostro laboratorio (Canzone 2002, Chappell 2008) e risultati non pubblicati presenti nella figura 2, ultrasuoni risultati distruzione delle microbolle nella consegna migliorata di nanoparticelle intravascolare al tessuto tumorale. Abbiamo anche dimostrato che la nostra Monica risultati di consegna tecnica nella consegna nanoparticelle accentuata immediatamente dopo il trattamento. </li></ol> 3. Ablazione del tumore (5.4.3) <ol><li> Abbiamo dimostrato che la prolungata distruzione ultrasuoni microbolle, a cicli di lavoro relativamente bassa (0,005-0,01), comporta l&#39;ablazione meccanica delmicrocircolo tumorale e regressione della crescita tumorale. Se questo protocollo è eseguita correttamente si dovrebbe aspettare variazioni di (i) tasso di crescita tumorale (Figura 3), (ii) l&#39;emodinamica del tumore (Figura 4), (iii) zona necrotica e (iv) l&#39;apoptosi. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2145/2145fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Caratterizzazione Figura 1. Plaga di nanoparticelle cuscinetto BSA. (A) Immagine SEM di nanoparticelle opportunamente costruite. (B) Immagine SEM di nanoparticelle impropriamente fabbricato. <img src="/files/ftp_upload/2145/2145fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. (A) Fluorescenza-mediata tomografia (FMT) immagini di ultrasuoni trattati (in alto) e di controllo trattati (in basso) per via sottocutanea gliomi immediatamente dopo il trattamento con un MNCAs, in cui le nanoparticelle (NP) stanno dando i 680 segnali di fluorescenza si sovrappongono in scala di grigi planare eccitazione luminosa immagine. <img src="/files/ftp_upload/2145/2145fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Rappresentante fold change nella crescita dei tumori seguenti insonazione microbolle con i cinque-burst protocollo esteso pulsante. <img src="/files/ftp_upload/2145/2145fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4. B-Mode (A, C) e contrast-enhanced ecografia (B, D) le immagini di un tumore sottocutaneo C6 glioma in un topo. Nell&#39;immagine pretrattamento iniziale (A) il limite di tumore per lo più ipoecogene è stata tracciata in blu. Tempo medio di miglioramento dopo l&#39;iniezione endovenosa di un mezzo di contrasto è mostrata in (B) pretrattamento. Post-trattamento, prima dell&#39;iniezione di contrasto, il tumore è ancora per lo più ipoecogena (D). Dopo l&#39;iniezione di contrasto, non c&#39;è miglioramento significativamente inferiore nel tumore.

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Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Passaggi critici Cannulazione della vena del mouse coda: L&#39;iniezione endovenosa nella vena della coda del mouse può essere una procedura impegnativa. Tuttavia, un catetere venoso coda può migliorare notevolmente la probabilità di una iniezione di successo. Per rendere il catetere, piegare ripetutamente avanti e indietro da 25 gauge finché non si rompe dal mozzo. Inserire l&#39;estremità smussata nella parte finale del PE 20 tubi e sigillare la connessione con...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>ApoptTag kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Intergen Co.</td>
<td>S7110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>un-capped 85:15 poly(lactic-co-glycolic acid) (PLAGA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lakeshore Biomaterials</td>
<td>Custom</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vivo Tag 680</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VisEn Medical</td>
<td>10120</td>
<td>Used to Tag BSA</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly(vinyl alcohol)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>363136</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MicroTip Sonicator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Misonix</td>
<td>S-4000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sequoia</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Simons Medical</td>
<td>P.O.A</td>
<td>Equipped with CPS </td>
</tr>
<tr>
<td>FreeZone 2.5</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Labconco</td>
<td>7670020</td>
<td>Equipped with Nitrogen Trap</td>
</tr>
<tr>
<td>Methylene chloride (CH2Cl2)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>D37-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FMT 250</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VisEn Medical</td>
<td>P.O.A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>F-12K Nutrient Mixture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>21127-022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>polyethyleneglycol-40 stearate </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Chemical </td>
<td>9004-99-3</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>distearoyl phosphatidylcholine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Avanti Polar Lipids</td>
<td>770365</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multisizer Coulter Counter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman Coulter </td>
<td>P.O.A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waveform Generator </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tektronix, Inc.</td>
<td>AFG-310</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>water-based ultrasound gel </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Parker Laboratories</td>
<td>Aquasonic 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Infusion pump </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>Harvard Apparatus PHD 2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide (EDC) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce Biotechnology</td>
<td>25952-53-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N-hydroxysulfosuccinimide (Sulfo-NHS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce Biotechnology</td>
<td>106627-54-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Succinic anhydride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>603902</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Power Amplifier </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electronic Navigation Industries</td>
<td>ENI 3100LA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Thermocouple Probe </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Omega</td>
<td>HYP1-30-1/2-T-G-60-SMPW-M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BioGel (P100, medium)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>150-4170</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>.75&#x2019;&#x2019; diameter 1 MHz unfocused transducer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Panametrics</td>
<td>A314S </td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

contrast ultrasound targeted treatment of gliomas in mice via drug-bearing nanoparticle delivery and microvascular ablation

Stiamo sviluppando mini-invasiva delle microbolle di contrasto agente approcci terapeutici in cui si controllava la permeabilizzazione e / o ablazione del microcircolo variando parametri ecografici impulsi. In particolare, stiamo verificando se tali approcci possono essere utilizzati per il trattamento di tumori maligni al cervello attraverso la somministrazione di farmaci e l&#39;ablazione microvascolare. Gli studi preliminari sono stati condotti per determinare se mirati droga cuscinetto consegna delle nanoparticelle può essere facilitato dalla distruzione mediata ecografia di &quot;composite&quot; agenti di consegna composta da 100nm poli (lattide-co-glicolico) (Plaga) nanoparticelle che vengano rispettati albumina microbolle sgusciate . Indichiamo questi agenti come microbolle-nanoparticelle agenti composito (MNCAs). Quando mirati per via sottocutanea C6 gliomi con gli ultrasuoni, abbiamo osservato un immediato 4,6 volte più elevata di consegna delle nanoparticelle nei tumori Monica trattati per tumori trattati con microbolle co-somministrato con nanoparticelle e un aumento di 8,5 volte rispetto non trattati tumori. Inoltre, in molte applicazioni di cancro, crediamo possa essere auspicabile per effettuare la consegna farmaci mirati in collaborazione con ablazione del microcircolo tumorale, che porterà ad ipossia tumorale e l&#39;apoptosi. A tal fine, abbiamo testato l&#39;efficacia della non theramal cavitazione indotta ablazione microvascolare, dimostrando che questo approccio provoca una riduzione del tumore perfusione, l&#39;apoptosi, inibizione della crescita significativa, e necrosi. Presi insieme, questi risultati indicano che i nostri ultrasuoni mirati approccio ha il potenziale per aumentare l&#39;efficacia terapeutica con la creazione di necrosi tumorale attraverso l&#39;ablazione microvascolari e / o contemporaneamente migliorare il carico di droga in gliomi.

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Contrast Ultrasound Targeted Treatment of Gliomas in Mice via Drug-Bearing Nanoparticle Delivery and Microvascular Ablation

Insonazione di microbolle è una strategia promettente per l&#39;ablazione del tumore al ridotto potere acustico medie nel tempo, così come per la somministrazione mirata di terapie. Lo scopo del presente studio è quello di sviluppare strategie di ultrasuoni a bassa dovere ciclo pulsante e nanovettori per massimizzare non ablazione termica microvascolare e la consegna a carico sottocutaneo C6 gliomi.

Mezzo di contrasto ecografico mirato trattamento dei gliomi nei topi tramite Drug-Bearing consegna delle nanoparticelle e ablazione microvascolari

We are developing minimally-invasive contrast agent microbubble based therapeutic approaches in which the permeabilization and/or ablation of the ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

15.8K Views.  University of Virginia. Insonazione di microbolle è una strategia promettente per l'ablazione del tumore al ridotto potere acustico medie nel tempo, così come per la somministrazione mirata di terapie. Lo scopo del presente studio è quello di sviluppare strategie di ultrasuoni a bassa dovere ciclo pulsante e nanovettori per massimizzare non ablazione termica microvascolare e la consegna a carico sottocutaneo C6 gliomi.

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Introduction to the Ultrasound Targeted Microbubble Destruction Technique

In UTMD, bioactive molecules, such as negatively charged plasmid DNA vectors encoding a gene of interest, are added to the cationic shells of lipid microbubble contrast agents7-9. In mice these vector-carrying microbubbles can be administered intravenously or directly to the left ventricle of the heart. In larger animals they can also be infused through an intracoronary catheter. The subsequent delivery from the circulation to a target organ occurs by acoustic cavitation at a resonant frequency of the microbubbles. It seems likely that the mechanical energy generated by the microbubble destruction results in transient pore formation in or between the endothelial cells of the microvasculature of the targeted region10. As a result of this sonoporation effect, the transfection efficiency into and across the endothelial cells is enhanced, and transgene-encoding vectors are deposited into the surrounding tissue. Plasmid DNA remaining in the circulation is rapidly degraded by nucleases in the blood, which further reduces the likelihood of delivery to non-sonicated tissues and leads to highly specific target-organ transfection.

Ultrasound Targeted Microbubble Destruction (UTMD) can be used to direct site-specific delivery of bioactive molecules, including therapeutic genes, to target organs accessible to ultrasound, such as the heart and liver1-6.

Introduzione alla tecnica di distruzione mirata ad ultrasuoni microbolle

In UTMD, bioactive molecules, such as negatively charged plasmid DNA vectors encoding a gene of interest, are added to the cationic shells of lipid ...

Ricerca

Bioingegneria

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including numerous stereoisomers1,2. These metabolites can be formed from free or esterified fatty acids. Many of these oxidized metabolites have biological activity and have been implicated in various diseases including cardiovascular and neurodegenerative diseases, asthma, and cancer3-7. Oxidized bioactive lipids can be formed enzymatically or by reactive oxygen species (ROS). Enzymes that metabolize fatty acids include cyclooxygenase (COX), lipoxygenase (LO), and cytochromes P450 (CYPs)1,8. Enzymatic metabolism results in enantioselective formation whereas ROS oxidation results in the racemic formation of products.
While this protocol focuses primarily on the analysis of AA- and some LA-derived bioactive metabolites; it could be easily applied to metabolites of other fatty acids. Bioactive lipids are extracted from cell lysate or media using liquid-liquid (l-l) extraction. At the beginning of the l-l extraction process, stable isotope internal standards are added to account for errors during sample preparation. Stable isotope dilution (SID) also accounts for any differences, such as ion suppression, that metabolites may experience during the mass spectrometry (MS) analysis9. After the extraction, derivatization with an electron capture (EC) reagent, pentafluorylbenzyl bromide (PFB) is employed to increase detection sensitivity10,11. Multiple reaction monitoring (MRM) is used to increase the selectivity of the MS analysis. Before MS analysis, lipids are separated using chiral normal phase high performance liquid chromatography (HPLC). The HPLC conditions are optimized to separate the enantiomers and various stereoisomers of the monitored lipids12. This specific LC-MS method monitors prostaglandins (PGs), isoprostanes (isoPs), hydroxyeicosatetraenoic acids (HETEs), hydroxyoctadecadienoic acids (HODEs), oxoeicosatetraenoic acids (oxoETEs) and oxooctadecadienoic acids (oxoODEs); however, the HPLC and MS parameters can be optimized to include any fatty acid metabolites13.
Most of the currently available bioanalytical methods do not take into account the separate quantification of enantiomers. This is extremely important when trying to deduce whether or not the metabolites were formed enzymatically or by ROS. Additionally, the ratios of the enantiomers may provide evidence for a specific enzymatic pathway of formation. The use of SID allows for accurate quantification of metabolites and accounts for any sample loss during preparation as well as the differences experienced during ionization. Using the PFB electron capture reagent increases the sensitivity of detection by two orders of magnitude over conventional APCI methods. Overall, this method, SID-LC-EC-atmospheric pressure chemical ionization APCI-MRM/MS, is one of the most sensitive, selective, and accurate methods of quantification for bioactive lipids.

This protocol will demonstrate the extraction and analysis of free and esterified bioactive fatty acids from cells. Fatty acids are accurately quantified using stable isotope dilution, chiral liquid chromatography, electron capture atmospheric chemical ionization multiple reaction monitoring mass spectrometry (SID-LC-ECAPCI-MRM/MS).

Estrazione dei lipidi cellulari per analisi mirate Stabile diluizione isotopica cromatografia liquida-spettrometria di massa

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including ...

Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. Urgent need exists to develop novel clinically-translatable therapeutic strategies that can improve on the dismal survival statistics of pancreatic cancer patients. Although gene therapy in cancer has shown a tremendous promise, the major challenge is in the development of safe and effective delivery system, which can lead to sustained transgene expression. 
Gelatin is one of the most versatile natural biopolymer, widely used in food and pharmaceutical products. Previous studies from our laboratory have shown that type B gelatin could physical encapsulate DNA, which preserved the supercoiled structure of the plasmid and improved transfection efficiency upon intracellular delivery. By thiolation of gelatin, the sulfhydryl groups could be introduced into the polymer and would form disulfide bond within nanoparticles, which stabilizes the whole complex and once disulfide bond is broken due to the presence of glutathione in cytosol, payload would be released 2-5. Poly(ethylene glycol) (PEG)-modified GENS, when administered into the systemic circulation, provides long-circulation times and preferentially targets to the tumor mass due to the hyper-permeability of the neovasculature by the enhanced permeability and retention effect 6. Studies have shown over-expression of the epidermal growth factor receptor (EGFR) on Panc-1 human pancreatic adenocarcinoma cells 7. In order to actively target pancreatic cancer cell line, EGFR specific peptide was conjugated on the particle surface through a PEG spacer.8
Most anti-tumor gene therapies are focused on administration of the tumor suppressor genes, such as wild-type p53 (wt-p53), to restore the pro-apoptotic function in the cells 9. The p53 mechanism functions as a critical signaling pathway in cell growth, which regulates apoptosis, cell cycle arrest, metabolism and other processes 10. In pancreatic cancer, most cells have mutations in p53 protein, causing the loss of apoptotic activity. With the introduction of wt-p53, the apoptosis could be repaired and further triggers cell death in cancer cells 11. 
Based on the above rationale, we have designed EGFR targeting peptide-modified thiolated gelatin nanoparticles for wt-p53 gene delivery and evaluated delivery efficiency and transfection in Panc-1 cells.

Type B gelatin-based engineered nanovectors system (GENS) was developed for systemic gene delivery and transfection in the treatment of pancreatic cancer. By modification with epidermal growth factor receptor (EGFR) specific peptide on the surface of nanparticles, they could target on EGFR receptor and release plasmid under reducing environment, such as high intracellular glutathione concentrations.

Consegna dei geni e trasfezione in cellule umane di cancro al pancreas con Epidermal Growth Factor Receptor mirati Nanovectors Progettato a base di gelatina

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Endothelialized Microfluidics for Studying Microvascular Interactions in Hematologic Diseases

Advances in microfabrication techniques have enabled the production of inexpensive and reproducible microfluidic systems for conducting biological and biochemical experiments at the micro- and nanoscales 1,2. In addition, microfluidics have also been specifically used to quantitatively analyze hematologic and microvascular processes, because of their ability to easily control the dynamic fluidic environment and biological conditions3-6. As such, researchers have more recently used microfluidic systems to study blood cell deformability, blood cell aggregation, microvascular blood flow, and blood cell-endothelial cell interactions6-13.However, these microfluidic systems either did not include cultured endothelial cells or were larger than the sizescale relevant to microvascular pathologic processes. A microfluidic platform with cultured endothelial cells that accurately recapitulates the cellular, physical, and hemodynamic environment of the microcirculation is needed to further our understanding of the underlying biophysical pathophysiology of hematologic diseases that involve the microvasculature.
Here, we report a method to create an "endothelialized" in vitro model of the microvasculature, using a simple, single mask microfabrication process in conjunction with standard endothelial cell culture techniques, to study pathologic biophysical microvascular interactions that occur in hematologic disease. This "microvasculature-on-a-chip" provides the researcher with a robust assay that tightly controls biological as well as biophysical conditions and is operated using a standard syringe pump and brightfield/fluorescence microscopy. Parameters such as microcirculatory hemodynamic conditions, endothelial cell type, blood cell type(s) and concentration(s), drug/inhibitory concentration etc., can all be easily controlled. As such, our microsystem provides a method to quantitatively investigate disease processes in which microvascular flow is impaired due to alterations in cell adhesion, aggregation, and deformability, a capability unavailable with existing assays.

A method to culture an endothelial cell monolayer throughout the entire inner 3D surface of a microfluidic device with microvascular-sized channels (&lt;30 &mu;m) is described. This in vitro microvasculature model enables the study of biophysical interactions between blood cells, endothelial cells, and soluble factors in hematologic diseases.

Microfluidica Endothelialized per lo studio delle interazioni microvascolari nelle patologie ematologiche

Advances in  microfabrication techniques have enabled the production of inexpensive and  reproducible microfluidic systems for conducting biological and ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a technology for regenerative medicine2. Unlike viruses, which have significant safety issues, polymeric nanoparticles can be designed to be non-toxic, non-immunogenic, non-mutagenic, easier to synthesize, chemically versatile, capable of carrying larger nucleic acid cargo and biodegradable and/or environmentally responsive. Cationic polymers self-assemble with negatively charged DNA via electrostatic interaction to form complexes on the order of 100 nm that are commonly termed polymeric nanoparticles. Examples of biomaterials used to form nanoscale polycationic gene delivery nanoparticles include polylysine, polyphosphoesters, poly(amidoamines)s and polyethylenimine (PEI), which is a non-degradable off-the-shelf cationic polymer commonly used for nucleic acid delivery1,3 . Poly(beta-amino ester)s (PBAEs) are a newer class of cationic polymers4 that are hydrolytically degradable5,6 and have been shown to be effective at gene delivery to hard-to-transfect cell types such as human retinal endothelial cells (HRECs)7, mouse mammary epithelial cells8, human brain cancer cells9 and macrovascular (human umbilical vein, HUVECs) endothelial cells10.
A new protocol to characterize polymeric nanoparticles utilizing nanoparticle tracking analysis (NTA) is described. In this approach, both the particle size distribution and the distribution of the number of plasmids per particle are obtained11. In addition, a high-throughput 96-well plate transfection assay for rapid screening of the transfection efficacy of polymeric nanoparticles is presented. In this protocol, poly(beta-amino ester)s (PBAEs) are used as model polymers and human retinal endothelial cells (HRECs) are used as model human cells. This protocol can be easily adapted to evaluate any polymeric nanoparticle and any cell type of interest in a multi-well plate format.

A protocol for nanoparticle tracking analysis (NTA) and high-throughput flow cytometry to evaluate polymeric gene delivery nanoparticles is described. NTA is utilized to characterize the nanoparticle particle size distribution and the plasmid per particle distribution. High-throughput flow cytometry enables quantitative transfection efficacy evaluation for a library of gene delivery biomaterials.

Valutazione della consegna del gene polimerici Nanoparticelle per l&#39;analisi delle nanoparticelle Monitoraggio e High-throughput Citometria a Flusso

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Real-time Monitoring of High Intensity Focused Ultrasound (HIFU) Ablation of In Vitro Canine Livers Using Harmonic Motion Imaging for Focused Ultrasound (HMIFU)

Harmonic Motion Imaging for Focused Ultrasound (HMIFU) is a technique that can perform and monitor high-intensity focused ultrasound (HIFU) ablation. An oscillatory motion is generated at the focus of a 93-element and 4.5 MHz center frequency HIFU transducer by applying a 25 Hz amplitude-modulated signal using a function generator. A 64-element and 2.5 MHz imaging transducer with 68kPa peak pressure is confocally placed at the center of the HIFU transducer to acquire the radio-frequency (RF) channel data. In this protocol, real-time monitoring of thermal ablation using HIFU with an acoustic power of 7 W on canine livers in vitro is described. HIFU treatment is applied on the tissue during 2 min and the ablated region is imaged in real-time using diverging or plane wave imaging up to 1,000 frames/second. The matrix of RF channel data is multiplied by a sparse matrix for image reconstruction. The reconstructed field of view is of 90&#176; for diverging wave and 20 mm for plane wave imaging and the data are sampled at 80 MHz. The reconstruction is performed on a Graphical Processing Unit (GPU) in order to image in real-time at a 4.5 display frame rate. 1-D normalized cross-correlation of the reconstructed RF data is used to estimate axial displacements in the focal region. The magnitude of the peak-to-peak displacement at the focal depth decreases during the thermal ablation which denotes stiffening of the tissue due to the formation of a lesion. The displacement signal-to-noise ratio (SNRd) at the focal area for plane wave was 1.4 times higher than for diverging wave showing that plane wave imaging appears to produce better displacement maps quality for HMIFU than diverging wave imaging.

Real-time Monitoring of High Intensity Focused Ultrasound HIFU Ablation of In Vitro Canine Livers Using Harmonic Motion Imaging for Focused Ultrasound HMIFU

This article describes real-time monitoring of HIFU ablation in canine liver with high frame rate ultrasound imaging using diverging and plane wave imaging. Harmonic Motion Imaging for Focused Ultrasound is used to image the decrease of acoustic radiation force induced displacement in the ablated region.

Monitoraggio in tempo reale di alta intensità ultrasuoni focalizzati (HIFU) Ablazione<em&gt; In Vitro</em&gt; Canine Livers Uso Harmonic Imaging Movimento per Focused Ultrasound (HMIFU)

Harmonic Motion Imaging for Focused Ultrasound (HMIFU) is a technique that can perform and monitor high-intensity focused ultrasound (HIFU) ablation. An ...

Targeted Plasma Membrane Delivery of a Hydrophobic Cargo Encapsulated in a Liquid Crystal Nanoparticle Carrier

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. Recently, nanoparticles (NPs) have shown significant promise in the development of such delivery systems. Here, a liquid crystal NP (LCNP)-based delivery system has been employed for the controlled delivery of a water-insoluble dye, 3,3&#8242;-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (DiO), from within the NP core to the hydrophobic region of a plasma membrane bilayer. During the synthesis of the NPs, the dye was efficiently incorporated into the hydrophobic LCNP core, as confirmed by multiple spectroscopic analyses. Conjugation of a PEGylated cholesterol derivative to the NP surface (DiO-LCNP-PEG-Chol) enabled the binding of the dye-loaded NPs to the plasma membrane in HEK 293T/17 cells. Time-resolved laser scanning confocal microscopy and F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) imaging confirmed the passive efflux of DiO from the LCNP core and its insertion into the plasma membrane bilayer. Finally, the delivery of DiO as a LCNP-PEG-Chol attenuated the cytotoxicity of DiO; the NP form of DiO exhibited ~30-40% less toxicity compared to DiOfree delivered from bulk solution. This approach demonstrates the utility of the LCNP platform as an efficient modality for the membrane-specific delivery and modulation of hydrophobic molecular cargos.

A liquid crystal nanoparticle (LCNP) nanocarrier is exploited as a vehicle for the controlled delivery of a hydrophobic cargo to the plasma membrane of living cells.

Targeted membrana plasmatica di consegna di un idrofobo Cargo incapsulato in un cristallo nanoparticelle Carrier Liquid

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. ...

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to the placenta while minimizing fetal and maternal side effects remains challenging. Targeted nanoparticle carriers provide new opportunities to treat placental disorders. We recently demonstrated that a synthetic placental chondroitin sulfate A binding peptide (plCSA-BP) could be used to guide nanoparticles to deliver drugs to the placenta. In this protocol, we describe in detail a system for assessing the efficiency of drug delivery to the placenta by plCSA-BP that employs three separate methods used in combination: in vivo imaging, high-frequency ultrasound (HFUS), and high-performance liquid chromatography (HPLC). Using in vivo imaging, plCSA-BP-guided nanoparticles were visualized in the placentas of live animals, while HFUS and HPLC demonstrated that plCSA-BP-conjugated nanoparticles efficiently and specifically delivered methotrexate to the placenta. Thus, a combination of these methods can be used as an effective tool for the targeted delivery of drugs to the placenta and development of new treatment strategies for several pregnancy complications.

We describe a system that utilizes three methods to evaluate the safety and effectiveness of placenta-targeted drug delivery: in vivo imaging to monitor nanoparticle accumulation, high-frequency ultrasound to monitor placental and fetal development, and HPLC to quantify drug delivery to tissue.

Valutazione globale dell'efficacia e della sicurezza di Placenta-Targeted Drug Delivery utilizzando tre metodi complementari

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell mimicking environment. Furthermore, the development of cell-free expression systems has demonstrated the ability to reconstitute the protein production, transcription and translation processes (DNA&#8594;RNA&#8594;protein) in a controlled manner, harnessing synthetic biology. Here we describe a protocol for preparing a cell-free expression system, including the production of a potent bacterial lysate and encapsulating this lysate inside cholesterol-rich lipid-based giant unilamellar vesicles (GUVs) (i.e., stable liposomes), to form synthetic cells. The protocol describes the methods for preparing the components of the synthetic cells including the production of active bacterial lysates, followed by a detailed step-by-step preparation of the synthetic cells based on a water-in-oil emulsion transfer method. These facilitate the production of millions of synthetic cells in a simple and affordable manner with a high versatility for producing different types of proteins. The obtained synthetic cells can be used to investigate protein/RNA production and activity in an isolated environment, in directed evolution, and also as a controlled drug delivery platform for on-demand production of therapeutic proteins inside the body.

This protocol describes the method, materials, equipment and steps for bottom-up preparation of RNA and protein producing synthetic cells. The inner aqueous compartment of the synthetic cells contained the S30 bacterial lysate encapsulated within a lipid bilayer (i.e., stable liposomes), using a water-in-oil emulsion transfer method.

Preparazione di proteine che producono cellule sintetiche utilizzando estratti batterici cell free, liposomi e trasferimento di emulsione

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...

Patient-Specific Polyvinyl Alcohol Phantom Fabrication with Ultrasound and X-Ray Contrast for Brain Tumor Surgery Planning

Phantoms are essential tools for clinical training, surgical planning and the development of novel medical devices. However, it is challenging to create anatomically accurate head phantoms with realistic brain imaging properties because standard fabrication methods are not optimized to replicate any patient-specific anatomical detail and 3D printing materials are not optimized for imaging properties. In order to test and validate a novel navigation system for use during brain tumor surgery, an anatomically accurate phantom with realistic imaging and mechanical properties was required. Therefore, a phantom was developed using real patient data as input and 3D printing of molds to fabricate a patient-specific head phantom comprising the skull, brain and tumor with both ultrasound and X-ray contrast. The phantom also had mechanical properties that allowed the phantom tissue to be manipulated in a similar manner to how human brain tissue is handled during surgery. The phantom was successfully tested during a surgical simulation in a virtual operating room.
The phantom fabrication method uses commercially available materials and is easy to reproduce. The 3D printing files can be readily shared, and the technique can be adapted to encompass many different types of tumor.

This protocol describes the fabrication of a patient specific skull, brain and tumor phantom. It uses 3D printing to create molds, and polyvinyl alcohol (PVA-c) is used as the tissue mimicking material.

Fabbricazione fantasma di alcol polivinile specifico per il paziente con ultrasuoni e contrasto a raggi X per la pianificazione della chirurgia del tumore al cervello

Phantoms are essential tools for clinical training, surgical planning and the development of novel medical devices. However, it is challenging to create ...