Fonti di finanziamento: Questo lavoro, sostenuto dal National Institutes of borse di studio, i sanitari HL067177 HL096845 e P01AI084853 alla DSW

1. Procedura di donatori <ol><li> Tutte le procedure chirurgiche sono stati eseguiti utilizzando una tecnica sterile. Non sono indicati gli antibiotici al donatore e topi riceventi. </li><li> Induzione dell&#39;anestesia del topo donatore è iniziata con il 5% isoflurano. </li><li> Il topo è orotracheally intubati con un 20-calibro catetere endovenoso e poi posto su un ventilatore roditore, utilizzando ossigeno al 100% ad una velocità di 125 respiri al minuto e circa 0,5 ml di volume di marea (2% del suo peso corporeo). </li><li> Anestesia per via inalatoria viene mantenuto con isoflurano 1-2%. </li><li> Il topo donatore viene collocato in posizione supina, preparata con 70% di alcol. </li><li> Laparosternotomy viene eseguita come una linea mediana combinato e incisione trasversale. </li><li> Eparina a 100 u / kg è iniettato nella vena cava inferiore (IVC), da sotto il fegato. </li><li> La membrana viene tagliata lungo la attacco ventrale costale verso la colonna vertebrale, e la cavità toracica è esposto tagliando entrambi i lati del toracemurare al collo. </li><li> Dopo l&#39;incisione della IVC a livello del diaframma, della appendice atriale destra viene tagliato ed i polmoni lavato con 2 ml di raffreddamento (4 ° C) Ringer lattato di iniezione e 0,1 ml di eparina attraverso una incisione trasversale alla radice dell&#39;arteria polmonare ( PA) tronco. </li><li> L&#39;arresto di ventilazione a due terzi di fine espirazione l&#39;inflazione, il cuore-polmone blocco viene asportato e conservato su ghiaccio (4 ° C). </li><li> Il polmone sinistro del donatore viene preparato per il destinatario dal sequestro di bracciali. Il legamento polmonare è inciso fino alla vena polmonare (PV). L&#39;ilo è portato togliendo esofago e aorta. </li><li> Identificare la PA, situato l&#39;aspetto più craniale del ilo, nonché le bronco allegate principali (Br). Con attenzione sezionare il PA dai bronchi. </li><li> Bracciale PA è fatto da un 24-gauge endovenosa (IV) catetere e tagliato a 0,5 mm di lunghezza con una estensione di 0,7 mm. </li><li> L&#39;intera superficie del manicotto viene poi abrasa per facilitare anastomosi. </li><li> Il manicotto per la bronco è derivato da un calibro del catetere 20-IV, e tagliato in lunghezza di 1,0 mm con una estensione di 0,7 mm. </li><li> Utilizzando gli stessi materiali, il bracciale PV varia con il peso del topo donatore. In particolare, per i topi 24-27 grammi la dimensione del bracciale è di 22-gauge, 0,7 mm di lunghezza con una estensione 0,7 mm. Per i topi peso 27-32 grammi, gli studi hanno utilizzato un 20-calibro catetere che è di 0,7 mm di lunghezza con una estensione 0,7 mm. </li><li> I polsini sono inseriti nelle estremità distali delle, PA PV e Br e fissata con una sutura 9-0. </li><li> Il polmone del donatore viene svuotata e lavata con soluzione salina sterile con eparina sterile prima di riporlo. Il polmone donatore viene quindi avvolto con garza sterile imbevuta in soluzione salina sterile su ghiaccio (4 ° C), che mantiene il polmone molto pulito e sterile. </li><li> Un morsetto microvasi è posto sulla bronco per impedire l&#39;entrata Ringer lattato nelle vie aeree. </li></ol> 2. Destinatario Procedura <ol><li> Induzione di anesdell&#39;anestesia e ventilazione meccanica sono gli stessi descritti sopra per il donatore. </li><li> La parete toracica sinistra è rasata e preparata con il 70% di alcol e il campo operatorio è drappeggiato. </li><li> Una incisione toracotomia è fatto a sinistra terzo spazio intercostale, estendendo l&#39;incisione dorsalmente vicino alla colonna vertebrale, e un morsetto microvasi posto sui vasi polmonari sinistra e dei bronchi adiacenti al cuore. Potete vedere PA all&#39;aspetto cranica, PV alla fine caudale ilo e Fr. tra di loro. </li><li> Utilizzando una leggera trazione sul pinza emostatica per provocare una leggera tensione sul, PA Br e PV, il polmone sinistro è tirato fuori dalla cavità toracica, lasciando le strutture ilari centrali bloccato. </li><li> L&#39;, PA e PV Br sono isolati per via smussa seguito mettendo una sutura 9-0 posizionato liberamente in tutto il, PA e PV fr. </li><li> Dopo la dissezione della PA completamente dalla sua guaina avventizia, una piccola incisione trasversale di circa un quarto della circonferenza della nave èfatta nella parete anteriore, lasciando la continuazione della parte dorsale dell&#39;arteria intatto. </li><li> Il polmone donatore, avvolto in freddo, Ringer lattato-impregnato garza di cotone e preparate come sopra descritto, è quindi posizionato nella cavità toracica, e polsini inserito nel PA ricevente, PV e Br e fissato con 9-0 sutura. </li><li> Il morsetto a croce ilo viene rimosso consentendo riperfusione e ventilazione. </li><li> Dopo aver posizionato il polmone trapiantato nuovamente nel torace destinatario, l&#39;incisione toracotomia è chiuso con un 5-0 sutura. </li><li> Il topo è consentito di recuperare da anestesia. Buprenorfina (0,05-0,15 mg / kg) è somministrato immediatamente dopo l&#39;intervento chirurgico, e per ogni 8 ore per 2-3 giorni post-operatorie. </li></ol> 3. Risultati rappresentativi La nostra esperienza ci ha insegnato che richiede diversi mesi di pratica ripetuta per diventare esperti nel modello di topo trapianto di polmone. Dopo di abilità è raggiunto, abbiamo unchieved un tasso del 96% (96/100 interventi consecutivi) la sopravvivenza perioperatoria con decessi che si verificano entro sette giorni dopo l&#39;intervento. Due morti erano dovute a sanguinamento durante l&#39;intervento che ha avuto inizio, e pneumothraces sono stati la causa di morte negli altri due topi. Per tutte le procedure, il tempo di ischemia calda era 14,32 ± 3,14 minuti, tempo di ischemia fredda era 58,51 ± 18.06 minuti. Tre ortotopici gruppi di trapianto di polmone sono stati studiati: isograft: C57BL / 6 → C57BL / 6, trapianto: C57BL/10 → C57BL / 6 e C57BL / 6 → C57BL/10. Abbiamo usato solo i topi maschi, ma la nostra tecnica può essere applicato anche a topi di sesso femminile, perché non vi è alcuna significativa differenza anatomica tra i sessi. La classificazione di rigetto patologia è stata condotta in cieco utilizzando criteri standard per polmone clinica trapianto 7 (Tabella 1). Mentre abbiamo osservato il rigetto lieve o assente in isograft (C57BL / 6 → C57BL / 6), entrambe le combinazioni trapianto allogenico sviluppato aziendeconfrontabili rigetto acuto o cronico (Figura 1). Al contrario, OB era significativamente più frequente nel C57BL/10 → C57BL / 6 di C57BL / 6 → C57BL/10 gruppo di day28 (Tabella 1). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> C57BL / 6 → C57BL / 6 </td><td> C57BL/10 → C57BL / 6 </td><td> C57BL / 6 → C57BL/10 </td><td> P-value </td></tr><tr><td> Rifiuto Patologia &quot;A&quot; punteggi a giorno 28 </td><td> 0,67 ± 0,89 </td><td> * 3,33 ± 0,82 </td><td> * 3,29 ± 0,76 </td><td> * P&gt; 0.05 </td></tr><tr><td> OB / mice totali al giorno 21 e 28 </td><td> 0/24 (0%) </td><td> ** 14/34 (42,1%) </td><td> ** 2/16 (12,5%) </td><td> ** P &lt;0,05 </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Punteggi istologiche di rigetto acuto e la prevalenza di trapianto dopo la bronchiolite obliterante. Scoring di rigetto acuto (&quot;a&quot; Scores) dalla norma CRIteri, come descritto nei risultati rappresentativi. I dati rappresenta la media ± SD di &quot;A&quot; punteggi a 28 giorni post-trapianto. I dati rappresenta la quantità e la percentuale di topi in ciascun gruppo che sviluppate OB giorni 21 e 28 trapianto. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3947/3947fig1.jpg" /> Figura 1. Reperti macroscopici e istopatologici a 28 giorni dopo il trapianto di polmone. Pannello di 1A rappresentano risultati macroscopici e H &amp; E polmonari Isograft macchiato del polmone destro e ingenuo. Pannello 1B e 1C rappresenta H &amp; E e di Masson tricromica tinto BL/10 trapianto del polmone trapiantato nel ricevente del mouse BL / 6, che ha sviluppato OB OB e non, rispettivamente. La freccia bianca in 1B individua lesioni OB. 1D pannello mostra polmonare BL / 6 trapiantato trapiantato nel ricevente BL/10 mouse. Guasti principale durante la procedura era la seguente. <ol><li> Disturbi del flusso sanguigno: polmone del donatore fino Flushil colore diventa di colore bianco. L&#39;uso di una pressione eccessiva può indurre edema polmonare. Ma non spingere troppo per evitare che l&#39;edema dopo il trapianto. </li><li> Difficoltà di inserimento nella cuffia del donatore: Accertarsi che la vascolarizzazione è sufficientemente lungo e privo di allegati tessuto adiposo e connettivo. </li><li> Sanguinamento al sito di anastomosi: Usa suggerimenti Q per esercitare una pressione al sito in questione per circa 5 minuti. </li><li> Destinatario ostruzione del flusso di sangue PA: principalmente causata dalla torsione del polso durante l&#39;inserimento. Se l&#39;aria si osserva all&#39;interno della PA poi ri-do della anastomosi è necessario. </li><li> Difficile anastomosi PV: membrana del fotovoltaico è molto sottile e facilmente lacrime. Selezionare corretta dimensione del bracciale ed inserire direttamente PV del destinatario molto delicatamente. </li><li> Destinatario ostruzione del flusso di sangue PV: Assicurarsi che la posizione e la direzione della cuffia. Rilasciare la compressione dal bracciale bronchiale. </li><li> Pneumotorace: Ciò può essere causato da una perforazione bronchiale a causa manipulation delle vie aeree, o perforazione della superficie del polmone a causa di trauma associato con la procedura di trapianto. Il primo è trattata con chiusura chirurgica del foro all&#39;interno della parete delle vie aeree, e quest&#39;ultimo è trattata oversewing la perdita sulla superficie polmonare utilizzando 10-0 sutura di nylon. </li></ol>

<ol>
	<li>Asimacopoulos, P. J., Molokhia, F. A., Pegg, C. A., Norman, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+transplantation+in+the+rat.">Lung transplantation in the rat.</a> Transplant Proc. 3, 583-585 (1971).</li><li>Yoshida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+technique+of+experimental+lung+transplantation+in+rabbits.">Surgical technique of experimental lung transplantation in rabbits.</a> Ann. Thorac. Cardiovasc. Surg. 11, 7-11 (2005).</li><li>McDyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant.">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proc. Am. Thorac. Soc. 4, 37-43 (2007).</li><li>Sato, M., Keshavjee, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+research:+animal+models+of+obliterative+bronchiolitis+after+lung+transplantation.">Translational research: animal models of obliterative bronchiolitis after lung transplantation.</a> Am. J. Transplant. 9, 1981-1987 (2009).</li><li>Okazaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am. J. Transplant. 7, 1672-1679 (2007).</li><li>Fan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+IL-17+Prevents+Obliterative+Bronchiolitis+in+Murine+Orthotopic+Lung+Transplantation.">Neutralizing IL-17 Prevents Obliterative Bronchiolitis in Murine Orthotopic Lung Transplantation.</a> Am. J. Transplant. 11, 911-922 (2011).</li><li>Stewart, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revision+of+the+1996+working+formulation+for+the+standardization+of+nomenclature+in+the+diagnosis+of+lung+rejection.">Revision of the 1996 working formulation for the standardization of nomenclature in the diagnosis of lung rejection.</a> J. Heart Lung Transplant. 26, 1229-1242 (2007).</li><li>Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a cuff technique.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 97, 578-581 (1989).</li><li>Jungraithmayr, W. M., Korom, S., Hillinger, S., Weder, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic,+single-lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic, single-lung transplantation.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 137, 486-491 (2009).</li><li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+vascularized+right+lung+transplantation+in+the+mouse.">Orthotopic vascularized right lung transplantation in the mouse.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. , (2010).</li></ol>

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Trapianto di polmone nei topi ortotopica è una sfida a causa di richieste di microchirurgia e la fragilità estrema dei tessuti. Introduzione della tecnica bracciale è consentito per l&#39;uso diffuso del trapianto polmone ortotopico in ratti 8. Questa divenne la base per lo sviluppo del modello ortotopica trapianto di polmone nei topi nel nostro laboratorio. Nei topi e ratti, a differenza dell&#39;uomo, il polmone sinistro contiene un solo lobo e costituisce solo il 25% della massa polmonare totale. Questo rende sinistra-singolo trapianto polmonare fattibile nel modello murino, senza la necessità di un sistema di supporto circolatorio. Le operazioni preliminari hanno rivelato che la ventilazione e la perfusione del polmone trapiantato era fortemente dipendente dalla dimensione del PV anastomosi. Specifico PV dimensioni del bracciale anastomotica sono stati utilizzati per abbinare dei donatori e dei destinatari come riportato 9. Inappropriato bracciale dimensionamento portato in entrambi i atelettasia del polmone trapiantato o deiscenza della Anast PVomosis. Okazaki et al ha riferito l&#39;uso combinato di legatura nave e il ritaglio del bronco 5. In questo studio si usa un clip da aneurisma per tutte le strutture ilari, che suggeriamo può abbreviare il tempo caldo ischemico. Una limitazione del trapianto ortotopico polmone sinistro nel modello murino è che gli animali destinatario può sopravvivere dopo alloimmune-mediata necrosi delle loro alloinnesti 5. Pertanto, gli studi di sopravvivenza non sono fattibili e la valutazione del trapianto dipende dall&#39;esame istologico del polmone trapiantato 10. Utilizzando questa tecnica, abbiamo sviluppato un modello preclinico bronchiolite obliterante nei topi. In particolare, il topo è C57BL/10 donatore e il ricevente è C57BL / 6. Questo suggerisce il ruolo di minore, e non maggiori, antigeni di istocompatibilità nella patogenesi della bronchiolite obliterante 6. Inoltre, abbiamo riportato neutralizzando IL-17 impedisce bronchiolite obliterante nel modello murino. Questa modalitàl rappresenta un nuovo strumento di ricerca per l&#39;esame del trapianto polmonare e il progresso dei trapianti polmonari clinici.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome dell&#39;apparecchiatura </td><td> Azienda </td><td> Catalogo numero </td></tr><tr><td> Zeiss OPMI 6SFC-1880 </td><td> Prescott Inc </td><td> PMZ014 </td></tr><tr><td> Harvard roditori Ventilatore </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 55-7058 </td></tr><tr><td> 20-gauge catetere IV </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 100510D </td></tr><tr><td> 22-IV calibro catetere </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 081015S </td></tr><tr><td> 24-gauge IV catetere </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 100522A </td></tr><tr><td> 9/0 Meth Virgin Blue Silk </td><td> Ashaway Line &amp; Twine Mfg. CO </td><td> MBVS-90 </td></tr><tr><td> 10-0 Alcon sutura chirurgica </td><td> Alcon Laboratories, Inc </td><td> 8065-192101 </td></tr><tr><td> Black 5-0/18inches seta intrecciata </td><td> Henry Schein </td><td> M652630 </td></tr><tr><td> Sodio Eparina 1000 unità / ml </td><td> APP Pharmaceuticals </td><td> 407156 </td></tr><tr><td> Soluzione Betadine </td><td> Purdue prodotto </td><td> 67618-150 </td></tr><tr><td> Iniezione di Ringer lattato </td><td> Hospira </td><td> NDC 0409-7953-03 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> Ceppo dei topi </td><td> Venditore </td><td> Età, peso </td><td> Di genere, commenti </td></tr><tr><td> C57BL/10 </td><td> Harlan Sprague-Dawley </td><td> 8-12 settimane, 25-30g </td><td> Maschio, donatori </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> Harlan Sprague-Dawley </td><td> 8-12 settimane, 25-30g </td><td> Maschio, donatore o del ricevente </td></tr></tbody></table> Tabella 2. Tabella di topi, specific reagenti e attrezzature.

development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation

Trapianto di polmone ortotopica nei ratti è stata riportata da Asimacopoulos e colleghi nel 1971 1. Attualmente, questo metodo è ben accettato e standardizzato non solo per lo studio delle allo-rigetto ma anche tra ceppi singenici per l&#39;esame di meccanismi di ischemia-riperfusione dopo trapianto. Anche se l&#39;applicazione del ratto e di altri modelli animali di grandi dimensioni 2 contribuito in modo significativo alla spiegazione di questi studi, la portata di tali indagini è limitata dalla scarsità di topi knockout e transgenici. A causa esistono terapie efficaci per la bronchiolite obliterante, la principale causa di morte nei pazienti sottoposti a trapianto del polmone, c&#39;è stata una ricerca intensiva per modelli pre-clinici che replicano bronchiolite obliterante. Il modello di trapianto della trachea è il più utilizzato e può riprodurre alcune delle caratteristiche istopatologiche di bronchiolite obliterante 3. Tuttavia, la mancanza di un vasculat intattaure senza alcun legame con vie aeree di conduzione del destinatario, e incompleti caratteristiche patologiche di bronchiolite obliterante limitano l&#39;utilità di questo modello 4. A differenza di trapianto di altri organi solidi, vascolarizzati trapianti di polmone di topo solo di recente sono stati riportati da Okazaki e colleghi per la prima volta nel 2007 5. Applicando i principi di base del trapianto di polmone del ratto, il nostro laboratorio ha avviato il modello di bronchiolite obliterante con minori histoincompatible antigene murino ortotopici single-sinistra trapianti di polmone che permette lo studio ulteriore immunopatogenesi bronchiolite obliterante 6.

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Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Bronchiolite obliterante è l&#39;ostacolo chiave per la sopravvivenza a lungo termine del trapianto di polmone e la mancanza di un robusto modello preclinico preclude l&#39;esame di immunopatogenesi bronchiolite obliterante. A differenza di altri trapianti di organi solidi, vascolarizzato del mouse trapianto di polmone solo di recente è stato sviluppato. Qui vi mostriamo il nostro modello sviluppato in modo indipendente bronchiolite obliterante dopo murino ortotopico single-trapianto di polmone.

Sviluppo di bronchiolite obliterante in un modello murino di trapianto polmonare ortotopico

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

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Research

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Medicine

20.2K Views.  Indiana University School of Medicine. Bronchiolite obliterante è l'ostacolo chiave per la sopravvivenza a lungo termine del trapianto di polmone e la mancanza di un robusto modello preclinico preclude l'esame di immunopatogenesi bronchiolite obliterante. A differenza di altri trapianti di organi solidi, vascolarizzato del mouse trapianto di polmone solo di recente è stato sviluppato. Qui vi mostriamo il nostro modello sviluppato in modo indipendente bronchiolite obliterante dopo murino ortotopico si...

Video: Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Trapianto ortotopico aortica: un modello di ratto per studiare lo sviluppo di vasculopatia cronica

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

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Medicina

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Un modello ortotopico di cancro alla vescica Murine

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

Ortotopico di intestino tenue di ratti

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

Trapianto di fegato in ratti

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as studies on graft preservation and ischemia-reperfusion injury 1,2, immunological responses 3,4, hemodynamics 5,6, and small-for-size syndrome 7. The rat OLT is among the most difficult animal models in experimental surgery and demands advanced microsurgical skills that take a long time to learn. Consequently, the use of this model has been limited. Since the reliability and reproducibility of results are key components of the experiments in which such complex animal models are used, it is essential for surgeons who are involved in rat OLT to be trained in well-standardized and sophisticated procedures for this model.
While various techniques and modifications of OLT in rats have been reported 8 since the first model was described by Lee et al. 9 in 1973, the elimination of the hepatic arterial reconstruction 10 and the introduction of the cuff anastomosis technique by Kamada et al. 11 were a major advancement in this model, because they simplified the reconstruction procedures to a great degree. In the model by Kamada et al., the hepatic rearterialization was also eliminated. Since rats could survive without hepatic arterial flow after liver transplantation, there was considerable controversy over the value of hepatic arterialization. However, the physiological superiority of the arterialized model has been increasingly acknowledged, especially in terms of preserving the bile duct system 8,12 and the liver integrity 8,13,14.
In this article, we present detailed surgical procedures for a rat model of OLT with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft after ex vivo liver resection. The reconstruction procedures for each vessel and the bile duct are performed by the following methods: a 7-0 polypropylene continuous suture for the supra- and infrahepatic vena cava; a cuff technique for the portal vein; and a stent technique for the hepatic artery and the bile duct.

Orthotopic liver transplantation in rats is an indispensable experimental model for biomedical research. Here we present our surgical procedures for orthotopic rat liver transplantation with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft.

Procedure chirurgiche per un modello di Rat parziale trapianto di fegato con la ricostruzione arteriosa epatica

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Murini trapianto di cornea: Un modello per studiare la forma più comune di trapianto di organi solidi

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

Metodo di isolato<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Lung Perfusion in un modello di ratto: Lezioni apprese da Sviluppo di un programma EVLP Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Pre-clinica ortotopico Modello murino di Human cancro alla prostata

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

Aprire tracheostomia gastrico acido aspirazione Modello murino di lesioni polmonari acute Risultati in massima acuta non letale Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

Un modello pre-clinico di trapianto di cuore ortotopico

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Methods Article

Sviluppo di bronchiolite obliterante in un modello murino di trapianto polmonare ortotopico