Un modello di osteogenesi di distrazione del topo

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della rigenerazione dei tessuti duri e molli. Il principale vantaggio di questa tecnica è che l'uso di un topo consente un'analisi dettagliata della rigenerazione ossea. Inizia con un topo adulto completamente anestetizzato.

Radere e disinfettare con cura l'area chirurgica con una soluzione di iodio al 10%. Quindi, somministrare lo 0,5% di cloridrato di lidocaina all'arto inferiore destro. Quindi, dopo aver fatto un'incisione longitudinale della pelle di 15 millimetri nella parte inferiore destra della gamba con un bisturi numero 15, separare senza mezzi termini i muscoli sottostanti, facendo attenzione a non rimuovere tutto il periosteo.

Quindi, taglia la fibula con le forbici. Afferrare la caviglia con pini stretti e sottili e utilizzare un ago calibro 27 per fare un buco nell'osso, a circa cinque millimetri dal tallone. L'ago dovrebbe penetrare nella pelle, nell'osso e nella pelle in quell'ordine.

Quando l'ago penetra completamente, tagliare la punta e la radice con un nipper in modo che l'ago sia di circa 15 millimetri. Fai un altro buco allo stesso modo, circa due o tre millimetri prossimali. Quindi, tieniti intorno alla caviglia e passa un ago calibro 25 sotto il ginocchio allo stesso modo.

Dopo che l'ago penetra, tagliare la punta e la radice con un nipper. Fai un altro buco nello stesso modo, circa due o tre millimetri distali. Posizionare il distrattore su misura in modo che sia parallelo alla direzione di estensione.

Fissare gli aghi e il dispositivo con una resina dentale di polimerizzazione sufficiente per riempire le scanalature del dispositivo. Attendere il completamento della polimerizzazione, che dovrebbe richiedere circa cinque minuti. Quindi, pur essendo molto attenti a non danneggiare i tessuti circostanti, tagliare il centro della diafisi della tibia usando un disco di taglio molto sottile mentre si applica una soluzione salina.

Chiudere la ferita con una sutura di nylon 4-0. Soerere iniezioni sottocutanee di buprenorfina per l'analgesia subito dopo l'intervento chirurgico. Ci sono vari rapporti sul periodo di latenza e sul tasso di distrazione, ma qui vengono mostrati protocolli rappresentativi.

Dopo un periodo di latenza di cinque giorni, inizia la procedura di distrazione. Per l'estensione, utilizzare il perno collegato alla vite di rapida espansione. Spostare il perno nella direzione della freccia gialla attaccata alla vite di estensione.

Tenere la coda con il mignolo e il palmo della mano e fissare il dispositivo di estensione con l'indice e il pollice. Eseguire l'estensione spostando il perno nella direzione della freccia gialla di 0,2 millimetri per un quarto di giro. Continuare l'allungamento alla velocità di 0,2 millimetri ogni 12 ore per otto giorni, il che si tradurrà in uno spazio totale di 3,2 millimetri.

Questa immagine mostra i tipici risultati della radiografia a quattro settimane dalla distrazione nel modello. L'osso appena formato è visto nel sito di distrazione. Qui si vedono risultati di colorazione di ematossilina ed eosina.

Fu osservato un ponte osseo di nuova formazione, e l'osso appena formato poteva essere facilmente distinto dall'osso nativo. Abbiamo presentato un modello TIBIAL DO per mouse sviluppato utilizzando un distrattore su misura. L'uso di un modello DO del mouse facilita un'analisi più dettagliata.

È particolarmente adatto per esperimenti che utilizzano topi knockout.