Ottenere frazioni vascolari stromali, o SVF, dai lipoaspirati richiede digestione con collagenasi, che aumenta il rischio di contaminazione biologica. Dovrebbe essere sviluppato un modo migliore per ottenere SVF senza collagenasi. Queste tecniche ci consentono di ottenere la SVF nella sua matrice extracellulare nativa attraverso un semplice processo meccanico.
A dimostrare la procedura sarà Xihang Chen, uno studente laureato del nostro laboratorio. Dopo aver ottenuto i campioni di grasso, trasferire i lipoaspirati in un tubo da 50 millilitri e lasciare che il grasso raccolto equilibra per 10 minuti. Successivamente, utilizzare un'ampia pipetta a punta per estrarre il grasso dallo strato superiore del tubo in un nuovo tubo da 50 millilitri e far girare il grasso per centrifugazione.
Lo strato superiore nel tubo è la frazione grassa di Coleman. Trasferire la parte superiore 2/3 del grasso Coleman in un nuovo tubo da 15 millilitri. Questa porzione è considerata il grasso a bassa densità.
Trasferire il terzo inferiore del grasso di Coleman in un secondo tubo da 15 millilitri. Questa porzione è considerata il grasso ad alta densità. Per produrre un gel di frazione vascolare vascolare a matrice extracellulare dal grasso a bassa densità, utilizzare due siringhe da 20 millilitri collegate da un connettore di blocco luer femmina a femmina per interrompi 10 millilitri del grasso a bassa densità.
Questo è il passo chiave per distruggere gli adipociti. La velocità e il tempo di esecuzione del cambio intersyringe contribuiscono alla qualità del prodotto finale. Dopo l'ultima sessione intershift, raccogliere il grasso per centrifugazione e trasferire lo strato superiore di olio su un tubo da 15 millilitri.
Quindi trasferire lo strato di gel della frazione vascolare centrale appiccicosa centrale in un nuovo tubo conico da 15 millilitri. Per produrre un gel di frazione vascolare extracellulare dal grasso ad alta densità, aggiungere due millilitri della frazione dell'olio a bassa densità a cinque millilitri del campione di grasso ad alta densità. Intershift il grasso misto come dimostrato fino a quando non si osserva un flocculato all'interno dell'emulsione.
Raccogliere il flocculato per centrifugazione e scartare lo strato superiore di olio. Quindi raccogliere lo strato medio appiccicoso e mescolare questa frazione con il campione di gel per frazioni vascolari vascolari stromali a bassa densità. Dopo aver elaborato il grasso di Coleman in gel di frazione vascolare stromale a matrice extracellulare, il volume dell'olio scartato occupa l'80% del volume finale e solo il 20% del tessuto adiposo conservato sotto lo strato di olio è considerato come gel di frazione vascolare a matrice extracellulare.
Il gel di frazione vascolare a matrice extracellulare ha una consistenza liscia simile a un liquido che gli consente di passare attraverso un ago fine calibro 27. Tuttavia, il grasso di Coleman è costituito da una struttura adiposa integrale con grandi fibre che possono passare solo attraverso una cannula calibro 18. Il terzo giorno dopo il trapianto, compaiono un gran numero di pre-adipociti di piccole dimensioni con più goccioline lipidiche intracellulari, ampio tessuto connettivo ben vascolarizzato e cellule infiammatorie infiltrate.
A partire dal giorno 15, il numero di cellule infiammatorie inizia a ridursi gradualmente e gli adipociti iniziano a maturare. Al giorno 90, la maggior parte del tessuto connettivo vascolarizzato negli innesti è stato sostituito da adipociti maturi. Gli innesti di gel della frazione vascolare extracellulare contengono anche alcuni adipociti positivi alla perilipina tre giorni dopo il trapianto, con pre-adipociti di piccole dimensioni, con più goccioline lipidiche intracellulari che iniziano ad apparire il giorno 15.
Ogni campo del giorno 90 sezioni di innesto di gel vascolare extracellulare della matrice extracellulare mostrano numerosi adipociti positivi perilipin e vasi sanguigni appena formati. La citometria del flusso può essere eseguita per determinare la popolazione cellulare nel prodotto. E la microscopia elettronica a scansione può essere eseguita per visualizzare la microstruttura del prodotto.
Questa tecnica fornisce un metodo semplice per chirurghi e ricercatori per ottenere un prodotto ad alta concentrazione di cellule SVF con fibre native a matrice extracellulare dal tessuto adiposo.
