Questo metodo consente di quantificare in modo riproducibile le differenze nei parametri dell'andatura. I parametri dell'andatura possono essere valutati nei roditori che camminano liberamente e la tecnica non si basa su passaggi invasivi come immergere i piedi con l'inchiostro. A dimostrare la procedura sarà Ben Lamberty.
Inizia posizionando una gabbia domestica alla fine della passerella prima dell'inizio di ogni corsa, per servire come spunto positivo per il topo per attraversare la passerella. Spegni le luci della stanza. Accendi la fotocamera e inizia a registrare alcuni secondi prima che il topo venga posizionato sulla piattaforma.
Con il recinto installato, posizionare il topo alla fine della passerella, di fronte alla gabbia domestica, e consentirgli di attraversare la passerella in modo non forzato. Interrompi la registrazione una volta che l'animale raggiunge il capolinea della passerella. Pulire la passerella utilizzando il 70% di etanolo e un asciugamano non abrasivo tra una corsa e l'altra e dopo che un animale urina o defeca.
Quindi, lasciare evaporare l'etanolo prima di introdurre un altro animale. Fai correre i ratti attraverso la passerella per un totale di sette volte durante ogni periodo di osservazione, prendendo le prime tre corse che segnano come passaggio per l'analisi. Segna una corsa come passaggio se l'animale fa quattro o più passi consecutivi in direzione della gabbia domestica senza interruzioni a causa di toelettatura, pause o movimenti erranti.
L'analisi dell'andatura è stata eseguita su ratti maschi wild-type e Parkin DKO a due mesi di età per determinare se l'uso dell'analisi cinematica dell'andatura potesse rivelare sottili menomazioni motorie prima della comparsa di grossolani problemi motori. Nonostante l'aumento di peso dei ratti DKO, la pressione del piede applicata alla superficie di calpestio era inalterata. Dopo la valutazione di diversi parametri dell'andatura in funzione della velocità di camminata, la velocità di camminata e le lunghezze dei passi sono risultate simili tra ratti wild-type e DKO.
La variazione tra ratti wild-type e DKO è diventata evidente nella fase di posizione e nella durata dell'oscillazione a velocità di camminata più lente. La frazione del ciclo di passi in cui la gamba è nella fase di posizione era il fattore di dovere. È stato speso più tempo nella fase di oscillazione che nella fase di posizione poiché il fattore di servizio è diminuito.
Inoltre, mentre le velocità di oscillazione aumentavano con l'aumentare della velocità negli animali selvatici, la correlazione era smussata nei ratti DKO. L'analisi dell'andatura FTIR è stata utilizzata anche per creare grafici di tracce di fase di posizione di ciascuna gamba rispetto al corpo in ratti che camminano liberamente. Dopo aver confrontato il posizionamento della zampa, sono stati osservati cambiamenti significativi in AEP e PEP.
Diversi parametri aggiuntivi sono stati significativamente modificati nei ratti DKO rispetto al wild-type. La velocità di oscillazione di entrambi gli arti posteriori sinistro e destro è aumentata nei ratti DKO, mentre la durata dell'oscillazione di entrambi gli arti posteriori sinistro e destro è diminuita. La configurazione coerente delle apparecchiature, compresa la posizione della telecamera rispetto a RatWalker, è importante per la corretta implementazione di questo protocollo.
Dopo aver eseguito questo protocollo, gli animali sono disponibili per qualsiasi comportamento aggiuntivo o endpoint sperimentale necessari. Ad esempio, i cambiamenti dell'andatura possono essere correlati con alterazioni istologiche. Questa tecnica può essere utilizzata per valutare l'andatura in altri modelli di roditori non PD, come i modelli di ansia e depressione.
