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要約

この競合モデルを使用して、習慣性の薬剤や抑制に影響を及ぼすかもしれない他の要因への暴露後抑制の減損を測定します。性的な刺激と嫌悪障害物を同時に提示、従って雄ラット性的報酬をアプローチする障害物を征服します。

要約

この議定書では、ラットの抑制のモデルとして新規競合タスクについて説明します。このモデルでは価値の高い報酬を表す自然やりがいのある刺激 (性的刺激) と嫌悪刺激 (ピン)、同時に提示します。雄ラットを登るか、アプローチ、性的パートナーを調査しピンの障害物を飛び越える必要があります。嫌悪刺激に関係なく彼らの接近行動動物が解決しない場合は、不適応または危険の報酬追求行動として考慮されます。競合タスク抑制モルヒネなどストレスの多いイベントの乱用薬物への暴露から生じる欠陥の評価が可能です。

このモデルの主な利点はそれがあへん剤は麻薬やその他のストレスの多いイベントへの暴露後抑制の赤字を発見する簡単かつ迅速な方法を提供します。アヘン、に加えてこの行動モデルも他の習慣性薬物による抑制の赤字を迅速に発見するために役に立つでしょう。しかし、制限は雄ラットのパフォーマンスのこの競合タスクの下で試験を繰り返して効果が行使される可能性があります。将来は、1 つは報酬探索行動識別されるあへん剤への暴露後の強迫的な表現型を持つ個人がこの競合モデルの変更に基づいてを望むことができます。

概要

薬物中毒は、衝動的、強迫的な薬物を求めて、1によって特徴付けられる慢性の脳の病気です。中毒のこれらの主要な機能が両方仮定されたすなわち、抑制2,3、障害者の能力に起因する刺激をやりがいと差しこみ不適応の即時の追求を阻害することに失敗しました。行動4パターン。

停止信号および task 行くかどうかは、原型タスクの応答抑制2,5の能力を測定するために使用です。これらの 2 つの実験的パラダイムは、適切ではない行動を抑制、暗黙に対する頻度抑制反応を対比することによってベースライン6,7に行く能力を評価します。これらのタスクに表示される応答抑制は、コカインのユーザー8,9、アヘン中毒者10、およびニコチン ユーザー11に損なわれること示されています。別の 2 つのタスク — 逆転学習や複数選択系列反応時間課題-応答抑制/抑制の測定12,13の統制も提供します。ただし、齧歯動物で実行されるこれらのパラダイムのほとんどだけではなく長期的なトレーニングように必要科目は、別の信号によって表される応答要件を区別できますが、学習速度と学習効果に個人差があります。その後抑制テスト11の結果を妨げます。

習慣性の薬剤への曝露後抑制の減損の測定に使用できる新規競合タスクを提案します。このタスクでは価値の高い報酬14を表す自然やりがいのある刺激 (性的刺激) とラットが征服する嫌悪刺激 (ピン) 同時に発表しました。雄ラットを登るか、アプローチ、性的パートナーを調査しピンの障害物を飛び越える必要があります。嫌悪刺激に関係なくその接近行動の動物が解決しない場合は、不適応または危険の報酬追求行動として考慮されます。このタスクを確立するための理論的根拠の 1 つは、それは概念的には簡単ですし、執行プロセスの重い負荷を配置は他のタスクを行うようです。反応抑制を測定する他のタスクと比較して、この競合タスクは自然な動作で、正常な性的機能を持つラットに基づいてし、学習プロセスなしで直接の性的経験をテストことができます。別の理論的根拠が報酬に近づいていると嫌悪刺激 (または刺しているのリスク) を回避するこのタスクで競合いるより有効それは常習者はしばしば同様の場所自身での動作を模倣するよう競合が実際の生活15で否定的な結果の危険性に関係なく薬剤報酬を永続的に追求。

したがって、この競合モデルのアプリケーションは、中毒性薬物やストレスなどの抑制の能力に影響を与える可能性があります他の要因への暴露後抑制の赤字を検出する迅速かつ敏感な方法です。赤字抑制のメカニズムの調査のための新たな行動戦略を提供します。さらに、変更の選択肢は、このタスクに追加できます。たとえば、社会的刺激で性的な刺激を置き換えてコスト/利点の比率を変更することより多くの行動の意義を明らかにできます。

プロトコル

本研究は心理学研究所、中国科学院国際審査委員会 (IRB) に承認され、すべての実験は、ケアと実験動物の使用 (国立健康研究所 (アメリカ) のガイドに従って実施されます。2011 年)。

1. 材料との競合モデルのセットアップ

  1. ケージごとラットの家 4 (50 cm × 高さ 22.5 cm 幅 x 30 cm) (22-25 ° C) 温度制御のコロニー部屋と、少なくとも 10 日間逆 12 h/12 h ダーク/ライト サイクル (21:00 で点灯)。
    注:男性と女性の Sprague-dawley ラットの実験の先頭に 330-400 と 230 〜 250 グラムの重量を量るそれぞれ使用されました。
  2. 暗い段階で薄暗い照明の下でのすべてのテストを実行します。
  3. 不透明なカートンを使用 (37 cm × 高さ 26 cm 幅 x 18 cm) パイン材木製シェービング寝具を輸送するラット試験室にホーム ケージから。
  4. ラットの実験を開始する前に 5 日間 1 日あたり 3 分を処理します。
  5. 全体の実験のためモルヒネの 120 mL を準備します。溶解 0.9% の塩酸モルヒネ 20 mg/mL の最終濃度の NaCl (生理食塩水)。常温 (RT) を格納します。
  6. 手術ペントバルビ タール ナトリウム溶液 10 mL を準備します。0.9% にペントバルビ タール ナトリウムを溶かす塩化ナトリウム 1 グラム/mL の濃度で。4 ° C でのストア
  7. 発情の誘導を 10 mL エストラジ オール安息香酸 (EB) とプロゲステロンの 10 mL を準備します。安息香酸エストラジ オールとプロゲステロンの 0.125 mg/mL と 5 mg/mL の濃度でごま油をそれぞれ解散します。
    注:EB または水浴 (55-60 ° C) 少なくとも 1 時間のためのプロゲステロンの油懸濁液をインキュベートし、徹底的に振る。EB またはプロゲステロンが完全に解散したことを確認します。室温ストア
  8. 危険な報酬を求める動作テスト、黒のアクリル ガラス製オープン フィールド報酬近接部屋を使用します。野外アリーナの端 (85 cm 長さ x 高さ 35 cm 幅 x 50 cm) 金網刺激ケージをマウント (15 cm × 高さ 25 cm 幅 x 25 cm)。床刺激檻の前に約 20 cm のピンで、基板を取り付けます。
    注:ピンが 34.5 cm で固定される x 13 cm 広いボード (図 1)。ピンの 3 タイプのボードは、(表 2) のテスト中に順番に使用されます。

2 女性と男性でスクリーニング交尾発情誘導

  1. 雌ラットの両側卵巣摘出術
    注: 手術器具や手術で使用されるその他のアイテムは、滅菌です。手術は無菌技術を使用して実行されます。
    1. 準備手術器具やメス、外科ブレード、止血鉗子、ピンセット、眼科用はさみ、ガーゼ、綿棒、縫合針、前もって、シルク縫合糸など材料 75% アルコール、ヨウ素、ナトリウム ペントバルビ タール、0.9% 塩化ナトリウム、ペニシリン ナトリウム。
    2. 腹腔内注入ペントバルビ タール ナトリウム 55 mg/kg、雌ラットの完全な麻酔を待っています。ラットはスムーズにかかったし、ピンチを尻尾に反応しません。
      注:雌ラットの体重は少なくとも 240 g に達するときにだけ、卵巣が実行されます。
    3. 腹臥位で雌ラットを置き、背中の毛を剃り落とすし、iodophor で露出した皮膚を消毒します。メスを使用して、背中 (下胸部の端 1 cm) に中間縦切開 (約 2 cm 長い) を作る。
    4. 左の側に皮膚を引っ張るし、ブラントは、腰の筋肉を公開する止血鉗子で皮下組織を解剖します。脂肪組織に達するまでは、腹腔内に筋層 (1 cm の切開) をカットします。
    5. 曲がったピンセットで脂肪組織を抜くし、肉ピンク組織である卵巣を検索 (約 0.5 cm × 0.4 × 0.3 cm) 表面に巻きつきの卵管の脂肪組織に囲まれています。
    6. 卵管を鉗子でクランプし、それを縛る、周囲の脂肪組織とともに卵巣を断ちます。
    7. 残留卵管と脂肪組織に戻す腹腔内出血、なしを確認した後、筋層を縫合します。
    8. 同じプロシージャによって反対側の卵巣を削除し、皮膚切開部を縫合します。
    9. 覚醒まで温水毛布の上ラットを置き、それをホームのケージに戻って入れ。
    10. 回復の少なくとも 2 週間後交配のスクリーニングおよび行動テストのためのツールとして雌ラットを使用します。
      注:手術後、雌ラットの状態に注意を払うし、十分な水や食料を供給します。卵巣摘出ラットの単一 1 週間の収容を維持し、家の 4 つのケージあたり。
  2. 卵巣摘出雌ラットの発情の誘導
    1. (3 分/日) 回交配のスクリーニングのためにそれらを使用する前に 3 つすべて卵巣摘出雌ラットを処理します。
      1. そっと左手で輸送ボックスからラットをピックアップし、数秒間の腕の中でそれを保持します。ラットをボックスに戻すし、3 分に対してこれらの操作を繰り返します。
    2. エストラジ オール安息香酸 (25 μ g/ラット) を皮下注入スクリーニングまたはコンフリクト試験交配前に約 48-52 時間。
    3. プロゲステロン (1 mg/ラット) を皮下注入スクリーニングまたはコンフリクト試験交配前に約 4-6 時間。
      注:エストロゲン ホルモンは、首の後ろの皮下注入されます。発情周期は ~4\u20125 日間続きます、雌ラットが週に 1 回使用されます。
  3. パフォーマンスを交配用雄ラットをスクリーニング
    注:スクリーニングは明暗サイクルの暗い段階ハウジング ルーム薄明かりの下で実施します。
    1. 雄ラットをカートンに個別に配置 (60 cm 高さ 50 cm 幅 x 40 cm x 長さ) 松シェービング寝具を木し、5 分かんらしておきます。
    2. (経験者) カートンとモニター男性交尾行動に発情期の雌ラットをご紹介します。
    3. ホーム ケージに戻ってラットを置く完了後、雄ラットの最初射精 30 分以内またはあたって 15 分以内または 30 分以内の射精は表示されません。
    4. (生理食塩液モルヒネ投与グループ) などの別のグループに (3 日連続成功射精) 選考会で合格雄ラットをランダムに割り当てます。

3. 競合テスト前に雄ラットにおける前処理

  1. どんちゃん騒ぎのようなモルヒネの治療
    注:雄ラットは生理食塩水を腹腔投与やモルヒネ配信でどんちゃん騒ぎのような養生法14 (表 1)。
    1. 雄ラットの重さし、体重に基づいて各ラットのための注入量を計算する (表 1参照)。
    2. モルヒネまたは生理食塩水のソリューションと注射器を準備します。
    3. 腹腔内では一度に 1 匹のラットを注入、すぐにホーム ケージ (4 ラット/檻) にそっと置きます。
    4. 少なくとも 6 時間後と同じ方法で第 2 注入雄ラットを与えます。
  2. 急性ストレス
    注:フット ショック 4 ショック発生器の組み立てし、専門的なソフトウェアをコンピューターにインストールすることによって 4 つの同じ部屋で各コンフリクト試験前に配信されます。
    1. 衝突テストの日、競合試験室とは異なる別の部屋に雄ラットを取る。
    2. 雄ラットを入れ部屋 (30.5 cm 高さ 30.5 cm x 幅 25.4 cm x) 1 分の習慣に。
    3. 事前にソフトウェア プログラムを設定します。プログラムには 10 分以内にお届けする間欠的足ショックが含まれます (0.5 x の最小値 s x 10 0.5 mA; 平均間間隔 40 s に衝撃を与える、範囲は 10-70 s)。
    4. 動物 Id を入力し、(衝撃グループとコントロール グループ) のグループによるとショック発生器をオンにするかどうかを選択します。[スタート] ボタンを押します。
    5. ストレス プロシージャが終了するとき、トランスポートのボックスに競合試験室にすぐにラットを持ってボックスにつき 1 匹のラット。

4. 競合のテスト

注:競合試験室で明暗サイクルの暗期中に薄明かりの下でテストを行います。

  1. テスト前日に競合試験室にすべてのラットをもたらす、(なしで任意の障害物、図 1) 15 分のためにオープン フィールドの報酬-近接部屋に慣らすことができます。
  2. テストの日に商工会議所 (試験前日と同じ状態) の下で 10 分間無料の探査を可能にラットを配置します。
  3. インセンティブとして刺激ケージに発情雌ラットを置き自由にアプローチの対象となる男性を許可して 5 分のインセンティブのラットを調査します。
    注: 雄ラットはランダムに発情雌にさらされて、この女性は身近なラットではないです。
  4. 5 分無料のアプローチの後刺激ケージから男性の主題をアリーナのもう一方の端に移動 (14 cm wide ボード ピンと厚い)、障害物を配置し、テストの最初の試験を開始します。
    注:ピンのタイプとボードの高さに基づいて試行間の障害の難しさのレベルは様々 です。グレーディング システムを表 2に示します。
  5. 刺激檻からラットを動き回るたびにそれの後に 15-20 s が障害物を乗り越えます。
  6. 最後男性の主題を登るまたは 4 分以内、すぐに、3 回障害物を飛び越える場合トライアル障害物の難易度が高く、次の試行を開始します。
  7. 男性の主題は、4 分以内で 3 回未満の場合障害物を乗り越える、テストを終了し、それは障害物を乗り越える回を記録します。
  8. ホームのケージに戻って雄ラットをもたらす、オープン フィールド チャンバー内に 0.05% 氷酢酸をスクラブします。
  9. 各スコアを乗り越える (近づいて)表 2に従って。この競合のテストで男性の主題の合計スコアとして、surmountings のすべてのためのスコアの合計を使用します。

5. 統計解析

  1. 平均 ± SEM または単一のデータ ポイントのデータを表示します。その均一分散性またはデータセットの正規分布が試され、場合に対数変換データ セット。
  2. 7 日目と撤退 (Wd7 と Wd17) の 17 日目で表示される報酬探索行動におけるモルヒネ前処理の効果を分析被験者間因子 (生理食塩水、図 2対モルヒネ) として「前処理」t-テストを使用します。
  3. 報酬探索行動"撤退 time"で繰り返されるメジャーの分散分析 (ANOVA) を使用してのテストを繰り返した後にモルヒネ前処理の効果の分析 (Wd14 対 Wd7) 被験者内要因と「前処理」(対モルヒネ生理食塩水) 被験者間因子として。
  4. さらに、その男性の被験者 (Wd7 と Wd14、図 3) 禁断の 7, 14 日に取得したスコアとの相関関係を分析するのにピアソンの相関を使用します。
    注:元のデータの対数変換、統計解析が実行されます。
  5. 急性ストレスの被験者間因子 (コントロール、図 4対衝撃) としてストレスに t 検定を用いて、薬物純真なラットの報酬探索行動に及ぼす影響を分析します。

結果

この競合モデルことができますアヘンによる不適応/危険な報酬探索行動を明らかにするかどうかを調べるには、生理食塩水とモルヒネ前処理グループによって表示される報酬探索行動比較した t-検定によって短期 (Wd7) 後、モルヒネ長期 (Wd17) 撤退それぞれ (図 2)。7 日目および脱退の 17 日の両方でモルヒネ前処理ラットが生理食塩水前処理ラッ?...

ディスカッション

薬物乱用18による抑制財政赤字は、強迫的な薬物を求めて/撮影行動を促進する上で重要な役割を果たすし、19,20を再発します。ここで紹介する競合モデルは、習慣性の薬剤にさらされる個人の抑制制御の変更を検討する新しいアプローチを提供します。

プロトコルのいくつかの重要な手順があります。まず、?...

開示事項

著者が明らかに何もありません。

謝辞

本稿は 6.8百万ストレス患者人口 (JCYJ20170413170301569) の CA キー研究所の精神保健、心理学研究所 (KLMH2016K01) と評価と介入研究によって支えられました。

資料

NameCompanyCatalog NumberComments
Acetic acidBeijing Tongguangjingxi Chemical companyCN No.81601CH3COOH
Benzypenicillin sodium for InjectionHuabei PharmaceuticalF7072109C16H17N2NaO4S
Cotton swabsWan Xin, Shandong, China8 cm
β-estradiol benzoate SIGMA-ALDRICHE8515-200MGestradiol benzoate 
GauzeWan Xin, Shandong, China21s × 21s 110×100
Hemostatic forcepsBeijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd.
Morphine hydrochlorideQinghai Pharmaceutical Co. Ltd20100105Morphine hydrochloride
Ophthalmic scissorsBeijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd.
Pentobarbital SodiumSigmaC11H17O3N2Na
Precision animal shockerCoulbourn
ProgesteroneSIGMA-ALDRICHV900699-5Gprogesterone
Sesama oilFengyi trading company ltd.Sesama oil
Sodium chloride injectionHuaLu PharmaceuticalH17092107NaCl
ScalpelsGillette96797241
Surgical bladesShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd
Suture needlesHan Qin, Shanghai, ChinaΔ1/2 6×14
Silk suturesShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd
Sprague-Dawley ratsVital River Animal Center, Beijing, ChinaSprague-Dawleyanimal strain
SyringeWeiGao Group Medical Polymer Co.Ltd1ml, 2ml
TweezersBeijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd.

参考文献

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