海洋試料における総脂質および脂質クラスの決定

要約

このプロトコルは、海水および生物学的標本中の脂質の決定のためのものです。濾液中の脂質は、固形物の場合にはクロロホルムまたはクロロホルムとメタノールの混合物で抽出される。脂質クラスは、炎イオン化検出を用いたロッド薄層クロマトグラフィーで測定され、その合計が総脂質含有量を示します。

要約

脂質は主に炭素と水素で構成されており、海の他の有機高分子よりも大きな特定のエネルギーを提供します。炭素と水素が豊富であることも疎水性であり、有機汚染物質の溶媒および吸収キャリアとして機能し、海洋生態系における汚染物質の生物蓄積の原動力となり得る。その疎水性は海水または生物学的標本からの隔離を促進する:海洋脂質分析は、非極性有機溶媒のサンプリングと抽出から始まり、水生マトリックス内の他の物質から分離するための便利な方法を提供する。

海水がサンプリングされた場合、最初のステップは通常、濾過によって操作的に定義された「溶解」および「粒子状」の派閥への分離を含む。サンプルを収集し、サンプルマトリックスから分離された脂質は、通常、真に溶解した物質とコロイドのためのクロロホルムで、固体および生物学的標本のためのクロロホルムとメタノールの混合物で分離される。このような抽出物は、バイオジェニックおよび人為的な情報源からのいくつかのクラスを含んでいてもよい。このとき、総脂質及び脂質クラスが決定され得る。全脂質は、慣習的にクロマトグラメン的に分離された個別に決定された脂質クラスを合計することによって測定することができる。薄層クロマトグラフィー (TLC) と火イオン化検出 (FID) は、海洋試料からの脂質の定量分析に定期的に使用されています。TLC-FIDは、シノプティック脂質クラス情報を提供し、合計クラスにより、総脂質測定を行います。

脂質クラス情報は、脂質抽出物からの放出後に、個々の成分、例えば脂肪酸および/またはステロールの測定値と組み合わせる場合に特に有用である。脂質の構造と機能の多種多様は、生態系の健康と人類起源の影響による影響度を評価する生態学的および生物地球化学的研究で広く使用されていることを意味します。これらは、海洋動物相(例えば、水飼料および/または獲物)に対する食事価値の物質を測定し、水質(例えば炭化水素)の指標として使用されてきた。

概要

ここで説明する方法は、海洋脂質として運用上定義される物質に関するものです。この定義は、非極性有機溶媒中の液体-液体抽出に対する無邪気さに基づいており、水生マトリックス内の他の物質から分離するための便利な方法を提供します。その疎水性は海水や生物学的標本からの隔離、濃縮、塩やタンパク質の除去を促進します。

海洋生物における脂質含有量の測定と構成は、食品ウェブ生態学、養殖栄養学、食品科学に何十年も関心を集めてきました。脂質は、生体内の普遍的な構成要素であり、細胞膜に不可欠な分子として作用し、生体利用エネルギーの主要な供給源として、断熱性および浮力を提供し、シグナル伝達分子として機能する。他の分野における脂質決定の手順はよく説明されているが、海洋サンプルでのそれらの使用は、一般に、試料タイプ¹だけでなく、フィールド条件に適応するための修飾を必要とする。

海水サンプルの場合、最初のステップは通常、通常、濾過によって、操作的に定義された「溶解」および「微粒子」分数に分離する必要があります(プロトコルステップ1)。粒子状分率は、フィルターによって保持されるものであり、そして、細孔のサイズは、カットオフ²を定義する上で重要である。多くの場合、粒子状物質をサンプリングする際には、脂質濃度を総質量濃度に関連付けたいが、その場合は別の小さなサンプル....

プロトコル

注:脂質分析用のガラス製品、器具、フィルターを洗浄するには、メタノールで3回洗浄し、クロロホルムで3回洗浄するか、少なくとも8時間450°Cに加熱します。

1. 海水溶解・粒子状脂質の濾過手順

注: 関心のある特定の部分は、操作上、ろ過手順によって定義されます。この場合、細孔のサイズは1.2 μmです。

1. ろ過マニホールドをフィルターなしで設定し、ろ過された海水でセットアップをすすいします。
2. クリーンな鉗子を使用して、洗浄された47mmガラス繊維(GF/C)フィルターをクリーン濾過システムに配置します。
3. サンプルを取り、回収容器の底に落ち着いた可能性のある材料を再中断するためにそっと旋回します。既知のボリューム(この場合は1 L)を正確に測定し、これをフィルタでフィルタリングします。
   注:体積はサンプル中の粒子状物質の量に依存します:通常、季節や場所に応じて250 mLと5 Lの間です。
4. サンプルを測定したら、ろ過された海水でフィルターを静かに濡らします。サンプル全体をろ過システムにゆっくりと加え、水浸しの海水で段階的なシリンダーをすすいで、すべての粒子がフィルターに追加されるようにします。側面にろ過された海水でセットアップをすすいで、すべての粒子がフィルターの上にすすい込まれるようにします。
   <....

結果

最も急成長している食品生産部門として、養殖は技術革新と適応の面で進化し、変化する要件を満たしています。その一つは、多くの養殖種に飼料成分を提供する野生産魚粉や魚油への依存を減らすことです。陸上植物油は、水飼料中の魚油の持続可能で経済的な代替品として調査されており、肝臓は脂質代謝^の主要部位であるため分析の標的組織である。 .......

ディスカッション

TLC-FIDシステムが小さいサンプルからのシノプティック脂質クラス情報を提供する速度は、TLC-FIDを海洋サンプルをスクリーニングするためのより複雑な分析手順を行う前に可能なツールにする。このような分析は、通常、ガスクロマトグラフィーの場合の揮発性を高めるために脂質抽出物および誘導体化からの成分化合物の放出を必要とする。GC-FIDと組み合わせたTLC-FIDは、魚介類および他の?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
15 ml vials	VWR	66009-560
1-hexadecanol	Sigma	258741-1G
1-Monopalmitoyl-rac-glycerol	Sigma	M1640-1g
2 ml vials	VWR	46610-722
25 mm glass fibre filters	Fisher	09 874 32A
2ml pipet bulbs	VWR	82024-554
47 mm glass fibre filters	Fisher	09 874 32
5 3/4" pipets	Fisher	1367820A
9" pipets	Fisher	1367820C
Acetone	VWR	CAAX0116-1
Agilent GC-FID 6890	Agilent
Calcium Chloride ANHS 500gm	VWR	CACX0160-1
Caps for 2 ml vials	VWR	46610-712
chloroform	VWR	CACX1054-1
Cholesteryl palmitate	Sigma	C6072-1G
Chromarod S5	Shell USA	3252
Dichloromethane	VWR	CADX0831-1
DL-a-phosphatidylcholine, dipalmotoyl	Sigma	P5911-1g
Ethyl Ether, ACS grade anhydr 4L	VWR	CAEX0190-4
Glyceryl tripalmitate	Sigma	T5888-100MG
Hamilton Syringe 702SNR 25µl	Sigma	58381
Helium	Air Liquide	A0492781
Hexane	VWR	CAHX0296-1
Hydrogen regulator	VWR	55850-484
Iatroscan MK6	Shell USA
Kimwipes	Fisher	066662
Medical Air	Air Liquide	A0464563
Medium nitrile gloves	Fisher	191301597C
Nitrile gloves L	VWR	CA82013-782
Nitrogen	Air Liquide	A0464775
Nitrogen Regulator	VWR	55850-474
Nonadecane	Sigma	74158-1G
Palmitic acid	Sigma	P0500-10G
Repeating dispenser	Sigma	20943
Sodium Bicarbonate 1kg	VWR	CA97062-460
Sodium Sulfate Anhy ACS 500gr	VWR	CA71008-804
Sulfuric acid	VWR	CASX1244-5
Teflon tape	Fisher	14610120
tissue master 125 115V w/7mm homogenator	OMNI International	TM125-115
TLC development tank	Shell USA	3201
UHP hydrogen	Air Liquide	A0492788
VWR solvent repippetter	VWR	82017-766
VWR timer Flashing LED 2 channel	VWR	89140-196
Zebron ZB-Wax GC column	Phenomenex	7HM-G013-11