1. セットアップと材料の準備

1. 総脂質抽出物 (TLE) を溶媒抽出法 (超音波、ソックスレー、または加速溶媒抽出 (ASE)) を使用してを取得します。
2. 5% H₂O メタノール 2 N koh 溶液を調製します。
   1. 島とメタノールは化学の小売店から購入できます。これらの化学物質は、純粋で炭化水素の自由にする必要があります。
      1. 島のモル質量は島の各モルのためのオハイオ州^-の 1 mol を降伏 〜 56 amu です。したがって、2 N 濃度を達成するために 0.95 L の純粋な水とメタノールの 0.05 L コの 112 g を溶解します。
      2. 水の島の分解は発熱し、大量の熱に注意してください。暴力的な反応を避けるためにゆっくりと水を KOH ペレットを追加する注意してください。
   2. 自動攪拌プレート上の純粋な水の 0.95 L KOH ペレットの 112 g 溶解します。
   3. KOH のすべてが水溶液に有機バイオ マーカーの溶解のため解散した後は、メタノールの 0.05 L を追加します。
3. 6 N 塩酸 (HCl) H₂o. でのソリューションを準備します。
   1. HCl は、化学の小売店から購入できます。この化学物質が純粋な炭化水素の無料必要があります。
   2. HCl は、通常 13 (名) として集中はしたがって、HCl と純粋な水の 1:1 の混合物は、この実験のために 6 N に十分近いである HCl の 6.5 N の混合物を生成します。
      1. 水に、塩酸を追加してください、ない他のやり方、濃塩酸に水を加えて発熱は、熱を生成します。これは、スプラッシュに HCl を引き起こす可能性があります。
   3. 静かにゆっくりと 100 mL 塩酸 100 mL を含むビーカーに純粋な水、HCl の間に混合物を注ぐ。
4. 5% の溶液を調製塩化ナトリウム (食塩) H₂o.
   1. 塩化ナトリウムは、化学の小売店から購入できます。この化学物質が純粋な炭化水素の無料必要があります。
   2. 計算して 5% 溶液 (w/w) ~ 1 L を作るために必要な塩の質量をはかります。水 1 リットル 〜 1 kg または 1,000 g の重量を量る。したがって、950 mL に溶解した塩化ナトリウム 50 g 50 g + 950 = 1,000 g; 50 g/1,000 g = 0.05 (5%) の 5% 溶液を与えます。
   3. 優しく自動攪拌プレートに純粋な水に塩化ナトリウム 50 g を追加し、解散を待ちます。
5. 次の資料の入手: 2 クリーンと PTFE ライニング キャップ; 燃焼 (6 時間 550 ° C) 40 mL ホウケイ酸ガラス瓶地球温暖化のオーブンか熱するブロック;燃焼 (6 時間 550 ° C) ホウケイ酸ガラス ピペットおよび球根;テープ pH (酸性の範囲);ヘキサン (ヘキサンは化学の小売店から購入できます。この化学物質べきオプティマ グレードまたはそれと同等)。

2. 方法

1. (エステルを含む) 乾燥 tle 40 mL ホウケイ酸ガラス瓶のいずれかで開始します。
2. TLE とキャップに 2 N 島の約 10 mL を追加します。
3. 熱オーブンやエステル結合 (図 3) を切断する 2.5 h の 60 ° C に加熱ブロックを。
4. 暑さからサンプルを取り出し、室温に冷却します。
5. 5% 塩化ナトリウム溶液約 10 mL を TLE (図 3) に追加します。これは、泡から (追加) に水溶液と有機相界面を保つことができます。キャップと簡単に振る。
6. O^-にある pH 2 に到達するまで滴下塩漬け TLE に 6 N 塩酸を追加し、最終製品、安定したカルボン酸 (図 3; 使用 ph 試験紙をテストする) を形成します。TLE が着色された場合、pH 2 に合わせ色に変化があるかもしれません。
7. 約 20 mL のヘキサンをエステル無料今は酸性のソリューションに追加します。キャップ、積極的に 5 振る s 水から有機物を抽出します。
8. 完全に独立した水溶液および有機性段階まで設定できるようにします。塩、イオン、水、および未反応の塩酸は、水相に残ります。有機化合物がヘキサンになります。
9. ピペットを使用して培養上清中のヘキサンの約 75% を削除し、他の 40 mL ホウケイ酸塩からすのバイアルに分注します。
10. 2.7-2.9 倍、たびに約 10 mL のヘキサンを追加するを繰り返します。
11. 適切な廃棄容器に残った水の混合を破棄します。
12. 「TLE - 鹸化させた「」ヘキサンとエステル無料有機物を含むバイアルにラベルを付ける