サインイン

光学・共焦点顕微鏡による生体試料のイメージング

概要

出典:ペイマン・シャーベイギ・ルードポシュティとシナ・シャーバズモハマディ、バイオメディカル工学部、コネチカット大学、ストールズ、コネチカット州

光学顕微鏡は何世紀にもわたって行われており、数十年前に解像度の理論的限界に達する一方で、共焦点画像処理やデジタル画像処理などの新しい機器や技術は、光学の分野で新しいニッチを生み出しました。イメージング。最高の光学顕微鏡は、通常、理想的な条件で200 nmまでの分解能を有する。しかしながら、光学顕微鏡は波の回折によって制限され、波長の関数であり、可視光に対しては約500nmである。光学顕微鏡の分解能は電子顕微鏡の分解能には達しないが、生物学的大構造のイメージングにおいて最も貴重なツールであり、あらゆる生物学的実験室の定番である。

従来の光顕微鏡では、画像化された物体から生成される信号は、検体の全厚さからであり、そのほとんどが観察者に焦点を合わせることは許されない。これにより、画像に "フォーカスがぼやけていない" 可能性が高くなります。一方、共焦点顕微鏡はピンホールを通してサンプルを照らし、物体の焦点の上下から焦点外の光を除去することができる。

このデモでは、光学顕微鏡法と共焦点顕微鏡法を用いた画像集録の概要を説明します。ここでは、マウスの脳の切り離された部分を研究します。 地形図や合成画像を生成するツールなど、画像の取得と解析について説明します。解像度、焦点深度、サンプルタイプに関連するさまざまなイメージング方法の長所と短所についても説明します。このデモンストレーションの目的は、光学顕微鏡および共焦点顕微鏡に関するより多くの情報を提供し、これらの顕微鏡検査モジュールが生物学的サンプルの一種に最も適しているかどうかを判断することです。

手順

1. 共焦点イメージング

  1. サンプルをステージにロードします。レンズの下の中央に配置します。これは、この場合は5キロである段階の重量制限を超えてはなりません。サンプルは100mm以下の厚さでなければなりません。
  2. イメージングソフトウェアを開き、「ジョブの作成」を選択します。
  3. [地形] 列で、アシスタント ボタンを選択します。
  4. 最も低い倍率 2.5X で概要イメージを作成します。倍率を切り替える前に、鮮明な画像が表示されるまで Z 位置を変更して、サンプルにフォーカスがあることを確認します。これは、3D顕微鏡マニピュレータを押し下げたり引き上げたりすることで行うことができます。細かいZモーションは、エッジの周りに青色の光を引き起こす側面のボタンを係動することによって達成されます。
  5. ゆっくりとレンズの倍率を上げ、光の強度と焦点で連続的に再生し、所望の倍率になるまで。必要に応じて、マニピュレータを使用してステージを x 方向と y 方向に移動して、別の対象領域を選択します。
  6. 低倍率で概要画像を撮影したら、次の

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

結果

以下の画像は、共焦点顕微鏡を用いてマウス脳から得られる結果の概要を示す。さまざまなレベルの情報を取得する方法と、結果の地形図がサンプルの高さを明らかにする方法を示します。

Figure 5
図5:切り離されたマウ?...

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

申請書と概要

このデモンストレーションでは、光学顕微鏡と共焦点顕微鏡の焦点深度、視野、最大解像度と倍率を最適化し、生体試料を見た。このデモンストレーションは、特定のアプリケーションに最適な顕微鏡モジュールを参加者が判断できるように設計されています。顕微鏡検査の両方のモードは、調製の容易さと高解像度の合成画像のための生物学的サンプルを分析する利点があります。

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

タグ
MicroscopyOptical MicroscopyConfocal MicroscopyBiological SamplesImagingDetailed StructureSamplesLensesMagnifyCompound MicroscopeAntonie Van LeeuwenhoekBacteriaYeastRed Blood CellsCirculationCapillary VesselsScientific ContributionsMicroscopic AdvancementsResearchClinical SettingsMedical DiagnosisPinholeOptical ResolutionContrastOperating PrinciplesHigh Resolution ImagesAnalysisApplicationsBiomedical Engineering

スキップ先...

0:07

Overview

1:26

Principles of Confocal Microscopy

3:37

Confocal Imaging

6:09

Digital Optical Microscope

7:56

Results

9:05

Applications

10:16

Summary

このコレクションのビデオ:

article

Now Playing

光学・共焦点顕微鏡による生体試料のイメージング

Biomedical Engineering

35.5K 閲覧数

article

生体試料のSEMイメージング

Biomedical Engineering

23.3K 閲覧数

article

ナノドラッグキャリアのバイオディストリビューション:SEMの応用

Biomedical Engineering

9.2K 閲覧数

article

腹部大オルタの高周波超音波イメージング

Biomedical Engineering

14.2K 閲覧数

article

腹部大動脈瘤の定量的ひずみマッピング

Biomedical Engineering

4.6K 閲覧数

article

インフラレナル大オルタにおける血液と脂質を画像化する光音響断層撮影

Biomedical Engineering

5.6K 閲覧数

article

心臓磁気共鳴イメージング

Biomedical Engineering

14.5K 閲覧数

article

脳動脈瘤における血流の計算流体力学シミュレーション

Biomedical Engineering

11.6K 閲覧数

article

腹部大動脈瘤の近赤外蛍光イメージング

Biomedical Engineering

8.2K 閲覧数

article

非侵襲的な血圧測定技術

Biomedical Engineering

11.7K 閲覧数

article

心電図(心電図)信号の獲得と解析

Biomedical Engineering

102.1K 閲覧数

article

リバーブルバイオマテリアルの引張強度

Biomedical Engineering

7.4K 閲覧数

article

マウス脊髄のマイクロCTイメージング

Biomedical Engineering

7.9K 閲覧数

article

ラットにおける非侵襲的ACL損傷後の膝関節変性の可視化

Biomedical Engineering

8.1K 閲覧数

article

SPECTとCTイメージングを組み合わせて心臓機能を可視化

Biomedical Engineering

10.9K 閲覧数

JoVE Logo

個人情報保護方針

利用規約

一般データ保護規則

研究

教育

JoVEについて

Copyright © 2023 MyJoVE Corporation. All rights reserved