我々は彼らのサポートとこの原稿について有益なコメントをBarresiラボのメンバーに感謝したいと思います。私たちは、スミスカレッジゼブラフィッシュのコロニーを維持する上で彼らの助けのための彼の一定の技術支援だけでなく、動物のケアスタッフのためのアレクサンダーワークマンに感謝。我々はまた、このプロトコルのfilminためのいくつかの顕微鏡の機器を貸与するためのマイクのHallacy、ルディRottenfusser、そしてカールツァイスマイクロイメージングに感謝。この作品は、NSFの資金による研究助成金、0615594によってサポートされていました。

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	<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio.">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio.</a> The Zebrafish Book. , (2007).</li><li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+A+Practical+Approach.">Zebrafish A Practical Approach.</a> , (2002).</li><li>Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+the+zebrafish+embryonic+brain+by+confocal+microscopy.">Live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy.</a> J Vis Exp. (26), (2009).</li><li>Gilmour, D. T., Jessen, J. R., Lin, S., N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish,+a+practical+approach.">Zebrafish, a practical approach.</a> 1, 121-121 (2002).</li><li>Woo, K., Shih, J., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+maps+of+the+zebrafish+embryo.">Fate maps of the zebrafish embryo.</a> Curr Opin Genet Dev. 5 (4), 439-439 (1995).</li><li>Barresi, M. J., Hutson, L. D., Chien, C. B., Karlstrom, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+regulated+Slit+expression+determines+commissure+and+glial+cell+position+in+the+zebrafish+forebrain.">Hedgehog regulated Slit expression determines commissure and glial cell position in the zebrafish forebrain.</a> Development. 132 (16), 3643-3643 (2005).</li><li>Kozlowski, D. J., Murakami, T., Ho, R. K., Weinberg, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+cell+movement+and+tissue+patterning+in+the+zebrafish+embryo+revealed+by+fate+mapping+with+caged+fluorescein.">Regional cell movement and tissue patterning in the zebrafish embryo revealed by fate mapping with caged fluorescein.</a> Biochem Cell Biol. 75 (5), 551-551 (1997).</li><li>Halloran, M. C., Murakami, T., Ho, R. K., Weinberg, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+gene+expression+in+specific+cells+of+transgenic+zebrafish.">Laser-induced gene expression in specific cells of transgenic zebrafish.</a> Development. 127 (9), 1953-1953 (2000).</li><li>Hardy, M. E., Ross, L. V., Chien, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+gene+misexpression+in+zebrafish+embryos+induced+by+local+heat+shock+using+a+modified+soldering+iron.">Focal gene misexpression in zebrafish embryos induced by local heat shock using a modified soldering iron.</a> Dev Dyn. 236 (11), 3071-3071 (2007).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

キメラ胚を生成すると、いくつかのモデル系、すなわちミバエ（D.melanogaster）、ワーム（ 虫）、ゼブラフィッシュ（D.rerio）とマウス（M.musculus）内の多くの研究課題に対応する強力なツールです。我々は、ゼブラフィッシュのモデルシステムを一意に比較的容易、迅速かつ汎用性の高い方法でキメラを生成するために適していると主張している。ゼブラフィッシュはマウスモデルと比較して、それはかなり利用しやすく、母親の外側に開発脊椎動物です。ゼブラフィッシュはまた、細胞移植などの発生学的操作を簡素化するハエやワーム、よりもはるかに大きいです。さらに、トランスジェニック技術と細胞移植の手順を結合する機能は、ローカライズされた組織特異的に操作できるようにする遺伝子の機能で可能な実験の大規模な配列が可能になります。例えば、GFP +またはローダミン標識された細胞の小さなクローンはしばしばホモ接合トランスジェニックドナーに失われるか、または一般的な抗体を用いた差動細胞内標識による可視化することは不可能であるしている完全な細胞の形態の特性評価を可能にします。さらに、トランスジェニックタグ付きまたは蛍光充填されたセルを使用することによって、我々は時間をかけてライブゼブラフィッシュ胚にドナー細胞を追跡することができます。個々の細胞のタイムラプスイメージングは​​生物全体の文脈における細胞挙動の小説の分析を提供します。 私たちの研究室はまた、熱ショックを組み合わせて使用​​、特定の軸索ガイダンスの手がかりは、培養温度の上昇（データは表示されません）以下のドナーの細胞でmisexpressedすることができるように細胞移植によるトランスジェニック系統を誘導性。この手法は、局所的に私たちは特定のタンパク質が開発にどのように影響するかを見ることができる時間的空間的固有の方法で目的のタンパク質をmisexpressすることは非常に強力で直接的なアプローチです。私たちのケースでは、この手法は、正中線5の交連とグリア細胞の位置におけるスリットロボの指導の手がかりの機能の背後にある我々の知識を拡張することができます。 このような焦点UVアンケージングとローカライズされたヒートショックのツール（レーザーやはんだごてなど）などのローカルmisexpressingの遺伝子に他のアプローチは、遺伝子や細胞7-9の小さなクラスタ内のマーカーの発現を操作するための代替方法を提供するかが、細胞移植は確立細胞移植より制御された実験的なアプローチを作る紫外線、レーザーまたは熱によって誘発されるあらゆる外傷のない分析の最終的な環境。結論として、我々は神経生物学研究の重要な一部となる細胞移植の手順を発見した。異なる特性を持つ細胞のクローンを生成すると、細胞の挙動、遺伝子機能、および細胞の自律性の基本的な問題に対処するための発生生物学者のための重要なツールです。

<table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> の名前 </td><td> タイプ </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 具体的な </td></tr><tr><td>ペトリ皿</td><td>ツール</td><td> Fisherbrand </td><td> 08-757-13 </td><td> 100 × 15ミリメートル</td></tr><tr><td>グラスの底培養プレート</td><td>ツール</td><td>マテック</td><td> P35G - 1.5 - 2.0 - C </td><td> 35 × 15ミリメートル、なし1.5、コーティングされていない、ガンマ線照射</td></tr><tr><td>ワイドボアガラスパスツールピペット</td><td>ツール</td><td> Fisherbrand </td><td> 63A - 53 - WT </td><td></td></tr><tr><td>トラフモールド用ガラスフィラメント毛細血管（糸なし）と注射針（フィラメント付き） </td><td>ツール</td><td>世界の精密機器</td><td> 1B150F - 4 </td><td> 4インチ（100mm）を、1.5 / 0.84外径/内径（mm） </td></tr><tr><td>移植キャピラリー（TransferTip） </td><td>ツール</td><td>エッペンドルフ</td><td> 83000122から8 </td><td>タイプIV、滅菌は、Int。 15μmの、20度曲げ</td></tr><tr><td>移植の鋳型</td><td>ツール</td><td>適応科学ツール</td><td> PT - 1 </td><td>個々の胚を保持するために150三角divots </td></tr><tr><td>アガロースは、タイプI </td><td>試薬</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> A6013 - 250G </td><td> 1.5％アガロースは、EMで行わ</td></tr><tr><td> （抗生物質）胚のミディアム</td><td>試薬</td><td></td><td></td><td>ウェスター、2007を参照してください。 </td></tr><tr><td>リン酸塩緩衝液</td><td>試薬</td><td></td><td></td><td>ウェスター、2007を参照してください。 </td></tr><tr><td>ウォッチマン鉗子</td><td>ツール</td><td>ファイン科学ツール</td><td></td><td> 100 +ミリメートルチップ（鈍い）、50ミリメートルのヒント</td></tr><tr><td>ローダミンBデキストラン</td><td>リネージュトレーサー色素</td><td>分子プローブ、インビトロジェン</td><td> D1824 </td><td> MW万ダ、リジン - 修正可能、赤（590nm）、緑色（570nm）の光で励起された蛍光色素</td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> SZX7 </td><td></td></tr><tr><td>蛍光実体顕微鏡</td><td>顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td> Lumar </td><td>完全に自動化されたジョイスティック制御（Sycop） </td></tr><tr><td>移植装置</td><td>ツール</td><td>エッペンドルフ（株） </td><td> AirTram </td><td></td></tr><tr><td>自動化されたマイクロ</td><td>ツール</td><td>エッペンドルフ（株） </td><td> TransferMan NK2 </td><td>ジョイスティック制御</td></tr><tr><td>マニピュレーター</td><td>ツール</td><td>アプライドサイエンティフィックインスツルメンツ株式会社</td><td> 00-42-101-0000 </td><td>右MM33 </td></tr><tr><td>バックプレッシャーユニットとマイクロインジェクター</td><td>ツール</td><td>アプライドサイエンティフィックインスツルメンツ株式会社</td><td> MPPI - 2 BPU </td><td></td></tr><tr><td> Flamming /ブラウンマイクロピペットプラー</td><td>ツール</td><td>サター器械公司</td><td>モデルP97 </td><td>プログラム：ヒート550; 速度200; 時間/ディレイ200; 力120を引き出します。 </td></tr></tbody></table>

tissue targeted embryonic chimeras: zebrafish gastrula cell transplantation

細胞が新たな環境に置かれているか、より大きな文脈の中の細胞の小さなグループが変更されているときに時発生生物学の分野で一定の基本的な質問にだけ答えることができます。一つのセルが相互作用し、ユニークな環境の中でどのように動作するかを見ることは細胞機能を特徴づけるために不可欠です。どのように細胞を取り巻く特定のタンパク質の影響のローカライズmisexpressionを決定することはタンパク質は発生過程の様々で果たす役割についての洞察力に富んだ情報を提供します。私たちの研究室では独自に遺伝子型または表現型のキメラを生成するために古典的な移植技術と遺伝的アプローチを組み合わせることがゼブラフィッシュのモデルシステムを使用しています。我々は、ゼブラフィッシュにおける前脳の交​​連を形成する際にニューロングリア細胞の相互作用を研究する。このビデオは私たちの研究室は、アストログリア間脳の集団と彼らは正中線を横切るように軸索を投射に影響を与える特定の指導の手がかりの役割の役割を調査するための方法を説明します。その透明度のゼブラフィッシュ胚に起因する異所性細胞の配置またはローカライズされた遺伝子のmisexpressionのこのタイプの理想的なモデルです。追跡移植された細胞は生体染色色素や蛍光タンパク質を発現するトランスジェニック魚のラインを使用して行うことができます。我々は、移植のための重要な色素トレーサーとドナー胚を準備する方法ここで示すだけでなく、1つ原腸胚から細胞を抽出して移植する方法を別の胚を上演。我々は、ゼブラフィッシュ胚の前脳内に異所性GFP +トランスジェニック細胞を示すデータを提示し、交連を前脳に関して、これらの細胞の位置を特徴づける。さらに、我々はGFP +トランスジェニック宿主胚に移植アレクサ594ラベルされた細胞のレーザー走査型共焦点タイムラプス顕微鏡を示しています。これらのデータは、原腸胚段階移植は、発生生物学のさまざまな質問に対処するために異所性細胞の標的位置決めを可能にするという証拠を提供する。

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Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

ゼブラフィッシュ細胞移植は、組織特異的キメラを生成するために遺伝学と発生学の組み合わせを可能にします。このビデオでは、原腸胚の研究室では前脳の交連形成時のアストログリア集団と特定の指導の手がかりの役割を調査することを許可している細胞移植を段階を示しています。

組織標的胚キメラ：ゼブラフィッシュの原腸胚細胞移植

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

tissue-targeted-embryonic-chimeras-zebrafish-gastrula-cell

Research

JoVE Journal

Biology

19.1K ビュー.  Smith College. ゼブラフィッシュ細胞移植は、組織特異的キメラを生成するために遺伝学と発生学の組み合わせを可能にします。このビデオでは、原腸胚の研究室では前脳の交連形成時のアストログリア集団と特定の指導の手がかりの役割を調査することを許可している細胞移植を段階を示しています。