まず、長さ16センチ、幅12センチ、厚さ20マイクロメートルのポリエチレンプラスチックフィルムを用意します。ガラス研削工具を使用して、標準的な96ウェルPCRレイアウトで30個の半円形の突起を押し出します。プレスしたポリエチレンプラスチックフィルムの両面に1時間UVライトを当てて消毒します。
半円形の表面に少量の10%ポリビニルアルコールを追加します。次に、麻酔をかけた雌のトリコグラマ・デンドロリミ・スズメバチを約3, 000匹回収箱に入れます。フィルムエッグカードの凸面をコレクションボックスに向けて置き、端を輪ゴムで固定します。
次に、各突起に4マイクロリットルのアミノ酸溶液を追加します。次に、別のポリエチレンプラスチックフィルムで覆います。輪ゴムを使用して、回収ボックスを2枚のプラスチックでしっかりと覆います。
スズメバチが自由に寄生するのを4〜8時間待ちます。寄生中に湿った綿を通して10%のスクロース水を提供します。次に、人工卵カードの内側の突起から寄生アミノ酸溶液を得て、1.45ミリリットルチューブのキャップに移します。
チューブキャップを直径25ミリメートルの10マイクロメートルのナイロンネットで覆います。次に、ナイロンネットをチューブに軽く固定します。右上のチューブを1, 360gで10秒間遠心分離します。
毒液を含むろ過した溶液を採取します。さらなる分析のために、毒液を摂氏マイナス80度で保管してください。毒液サンプルのBCA分析では、毒液タンパク質の濃度はマイクロリットルあたり0.35〜0.46マイクログラムの範囲であることが示されました。
アミノ酸溶液のネガティブコントロールは、タンパク質濃度が0.03〜0.05マイクログラム/マイクロリットルしかなかった。毒液のSDS-PAGE分析では、10キロダルトン未満から130キロダルトンを超えるサイズまでのタンパク質範囲が示されました。
