אנו מכירים בתמיכה כספית מהקרן למדעי הטבע של מחוז היינאן (מענק מס '323QN262), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס '31701843 ו -32172483), קרן החדשנות המדעית והטכנולוגית של ג'יאנגסו לחקלאות (מענק מס '. CX(22)3012 ו- CX(21)3008), קרן "Shuangchuang Doctor" של מחוז ג'יאנגסו (מענק מס '202030472), וקרן הסטארט-אפים של האוניברסיטה החקלאית נאנג'ינג (מענק מס '804018).

1. גידול חרקים
<ol><li>להאכיל Corcyra cephalonica על קמח תירס בטמפרטורה של 26 ± 1 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 40% ± 10%.</li>
	<li>הזן T. dendrolimi מחרק Jilin בתוך הבית תוך שימוש בביצים של Corcyra cephalonica כפונדקאים. להאכיל צרעות בוגרות 10% מי סוכרוז בצינורות דרוזופילה בטמפרטורה של 26 ± 1 מעלות צלזיוס, לחות יחסית של 70% ± 10%, בהיר (L): כהה (D) תקופה של 14 שעות: 10 שעות.</li>
</ol>2. הכנת כרטיסי ביצה מפלסטיק פוליאתילן
<ol><li>קח סרט פלסטיק פוליאתילן באורך של 16 ס"מ, רוחב של 12 ס"מ, ועובי של 20 מיקרומטר. לחץ החוצה 30 בליטות חצי עגולות בקוטר של 2-3 מ"מ וגובה של כ -3 מ"מ באמצעות מוט השחזה זכוכית על פי פריסת צלחת PCR סטנדרטית של 96 חורים. הערה: תהליך של לחיצה החוצה 30 בליטות חצי עגולות באמצעות מוט השחזה זכוכית צריך להיעשות תוך שימת לב ללחץ מכיוון שלחיצה חזקה מדי תנקב את הפלסטיק ותנהם את מוט השחזה חסר הארס שחולץ.</li>
	<li>יש לחטא את שכבת הפלסטיק הדחוסה מפוליאתילן על ידי חשיפת שני הצדדים לאור אולטרה סגול (UV) למשך שעה אחת.</li>
	<li>הוסיפו כמות קטנה של 10% אלכוהול פוליוויניל למשטח החצי עגול.</li>
</ol>3. טפילות Trichogramma dendrolimi 
<ol><li>לאחר הרדמת CO2 , הכניסו את נקבות הצרעות T. dendrolimi לקופסת איסוף, ומספר הצרעות היה ~3000.</li>
	<li>מניחים את הצד הקמור של כרטיס ביצת הסרט לכיוון קופסת האיסוף ומאבטחים את הקצוות בגומייה.</li>
	<li>הוסף 4 מיקרוליטר של תמיסת חומצות אמינו (6 גרם / ליטר לאוצין, 4 גרם / ליטר פנילאלנין, 4.25 גרם / ליטר היסטידין) לכל בליטה חצי עגולה. מכסים אותו בסרט פלסטיק פוליאתילן שטוח באורך 16 ס"מ וברוחב 12 ס"מ. השתמש בגומייה כדי לכסות היטב את קופסת האיסוף בשתי יריעות פלסטיק.</li>
	<li>תנו לצרעות T. dendrolimi לטפיל בחופשיות במשך 4-8 שעות ולספק 10% מי סוכרוז דרך כותנה רטובה.</li>
</ol>4. איסוף ארס T. dendrolimi 
<ol><li>השג את תמיסת חומצות האמינו הטפיליות מהבליטה הפנימית של כרטיס הביצה המלאכותית והעבר אותה למכסה של צינורות 1.5 מ"ל.</li>
	<li>מכסים את מכסה הצינור ברשת ניילון 10 מיקרומטר בקוטר 25 מ"מ, מהדקים היטב את רשת הניילון וצינור הצנטריפוגה. מניחים את צינור הצנטריפוגה זקוף לצנטריפוגה קצרה באמצעות מיני צנטריפוגה (1360 x גרם) למשך 10 שניות ואוספים את התמיסה המסוננת (~ 100 מיקרוליטר ארס T. dendrolimi ).</li>
	<li>מדוד את ריכוז ארס T. dendrolimi שנאסף באמצעות ערכת בדיקה של חומצה ביצינכונינית (BCA) (טבלה של חומרים).</li>
	<li>אחסנו את הארס בטמפרטורה של -80°C לניתוחים נוספים.</li>
</ol>5. ניתוחי SDS-PAGE
<ol><li>הוסף 30 μL של ארס T. dendrolimi ל 10 μL של 4x סודיום דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד ג'ל אלקטרופורזה (SDS-PAGE) דגימת חיץ טעינה (טבלה של חומרים) וחום ב 95 ° C במשך 10 דקות.</li>
	<li>ביצוע ריצת ג'ל SDS-PAGE במתח של 130 וולט למשך 120 דקות.</li>
	<li>יש לצבוע ולהסיר את הצבע של ג'ל SDS-PAGE באמצעות מנגנון צביעת החלבונים (Table of Materials).</li>
</ol>

טפילות פונדקאית מלאכותית על ידי Trichogramma dendrolimi ומיצוי ארס

<ol>
	<li>Pennacchio, F., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+developmental+strategies+in+parasitic+hymenoptera.">Evolution of developmental strategies in parasitic hymenoptera.</a> Annual Review of Entomology. 51, 233-258 (2006).</li><li>Yan, Z. C., Ye, X. H., Wang, B. B., Fang, Q., Ye, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+advances+on+composition,+function+and+evolution+of+venom+proteins+in+parasitoid+wasps.">Research advances on composition, function and evolution of venom proteins in parasitoid wasps.</a> Chinese Journal of Biological Control. 33 (1), 1-10 (2017).</li><li>Asgari, S., Rivers, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venom+proteins+from+endoparasitoid+wasps+and+their+role+in+host-parasite+interactions.">Venom proteins from endoparasitoid wasps and their role in host-parasite interactions.</a> Annual Review of Entomology. 56, 313-335 (2011).</li><li>Moreau, S. J. M., Guillot, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+and+prospects+on+biosynthesis,+structures,+and+functions+of+venom+proteins+from+parasitic+wasps.">Advances and prospects on biosynthesis, structures, and functions of venom proteins from parasitic wasps.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 35 (11), 1209-1223 (2005).</li><li>Yan, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+venom+serpin+splicing+isoform+of+the+endoparasitoid+wasp+Pteromalus+puparum+suppresses+host+prophenoloxidase+cascade+by+forming+complexes+with+host+hemolymph+proteinases.">A venom serpin splicing isoform of the endoparasitoid wasp Pteromalus puparum suppresses host prophenoloxidase cascade by forming complexes with host hemolymph proteinases.</a> Journal Biological Chemistry. 292 (3), 1038-1051 (2017).</li><li>Woelke, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+and+biology+of+two+new+egg+parasitoid+species+(Hymenoptera:+Trichogrammatidae)+reared+from+eggs+of+Heliconiini+butterflies+(Lepidoptera:+Nymphalidae:+Heliconiinae)+in+Panama.">Description and biology of two new egg parasitoid species (Hymenoptera: Trichogrammatidae) reared from eggs of Heliconiini butterflies (Lepidoptera: Nymphalidae: Heliconiinae) in Panama.</a> Journal of Natural History. 53 (11-12), 639-657 (2019).</li><li>Zang, L. S., Wang, S., Zhang, F., Desneux, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+with+Trichogramma+in+China:+History,+present+status,+and+perspectives.">Biological control with Trichogramma in China: History, present status, and perspectives.</a> Annual Review of Entomology. 66, 463-484 (2021).</li><li>Nettles, W. C. J., Morrison, R. K., Xie, Z. N., Ball, D., Shenkir, C. A., Vinson, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+action+of+potassium+chloride+and+magnesium+sulfate+on+parasitoid+wasp+oviposition.">Synergistic action of potassium chloride and magnesium sulfate on parasitoid wasp oviposition.</a> Science. 218, 4568 (1982).</li><li>Tilden, R. L., Ferkovich, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kairomonal+stimulation+of+oviposition+into+an+artificial+substrate+by+the+endoparasitoid+Microplitis+croceipes+(Hymenoptera)Braconidae).">Kairomonal stimulation of oviposition into an artificial substrate by the endoparasitoid Microplitis croceipes (Hymenoptera)Braconidae).</a> Annals of the Entomological Society of America. 81 (1), 152-156 (1988).</li><li>Xie, Z. N., Li, L., Xie, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+Habrobracon+hebetor.">In vitro culture of Habrobracon hebetor.</a> Chinese Journal of Biological Control. 5 (2), 49-51 (1989).</li><li>Han, S. T., Liu, W. H., Li, L. Y., Chen, Q. X., Zeng, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+Trichogramma+ostriniae+with+artificial+eggs.">Breeding Trichogramma ostriniae with artificial eggs.</a> Journal of Environmental Entomology. 21 (1), 9-12 (1999).</li><li>Li, L. Y., Chen, Q. X., Liu, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oviposition+behavior+of+twelve+species+of+Trichogramma+and+its+influence+on+the+efficiency+of+rearing+them+in+vitro.">Oviposition behavior of twelve species of Trichogramma and its influence on the efficiency of rearing them in vitro.</a> Journal of Environmental Entomology. 11 (1), 31-35 (1989).</li><li>Xing, J. Q., Li, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rearing+of+an+egg+parasite+Anastatus+japonicus+Ashmead+in+vitro.">Rearing of an egg parasite Anastatus japonicus Ashmead in vitro.</a> Acta Entomologica Sinica. 33 (2), 166-173 (1990).</li><li>Moreau, S. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#34;It+stings+a+bit+but+it+cleans+well&#34;:+Venoms+of+Hymenoptera+and+their+antimicrobial+potential.">&#34;It stings a bit but it cleans well&#34;: Venoms of Hymenoptera and their antimicrobial potential.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 186-204 (2013).</li><li>Moreau, S. J. M., Asgari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venom+proteins+from+parasitoid+wasps+and+their+biological+function.">Venom proteins from parasitoid wasps and their biological function.</a> Toxins. 7 (7), 2385-2412 (2015).</li></ol>

למחבר אין מה לחשוף ואין אינטרסים כלכליים מתחרים.

כאן, אנו מציגים שיטה להפקת ארס מ T. dendrolimi באמצעות פונדקאים מלאכותיים. להלן נקודות המפתח בניסוי איסוף הארס. (1) במהלך ההכנה, T. dendrolimi חייב להיות מורדם במהירות עם ריכוז מתאים של CO2. אם ריכוז CO2 נמוך מדי, זה לא יהיה מספיק כדי להרדים את Trichogramma במהירות. לעומת זאת, אם הריכוז גב...

צרעות טפיליות הן חרקים טפיליים המהווים משאבים חשובים להדברה ביולוגית1. יש מגוון רחב של צרעות טפיליות, עם מעל 600,000 מינים מוערכים2. מגוון הצרעות הטפיליות עולה בהרבה על זה של פרוקי רגליים ארסיים אחרים, כגון נחשים, חלזונות חרוט, עכבישים, עקרבים ודבורים. ארס הוא גורם טפילי חשוב בצרעות טפיליות. לטפילות מוצלחת, הארס מוזרק לפונדקאי, ומווסת את התנהגותו, חסינותו, התפתחותו וחילוף החומרים של הפונדקאי3. יתר על כן, הארס של צרעות טפיליות מציג מגוון יוצא דופן במבנים המולקולריים שלו, במטרות ובתפקודים, ומשקף קו-אבולוציה מורכבת עם המארחים שלהם. לפיכך, ארס טפילי הוא משאב יקר ערך ולא מוערך מספיק של מולקולות פעילות למטרות קוטלי חרקים או רפואיים4. בניגוד לארס של נחשים, חלזונות חרוט, עכבישים, עקרבים ודבורים, ארס צרעה טפילי אינו יכול להיאסף על ידי גירוי ישיר או גירוי חשמלי5. השיטה הנוכחית להפקת ארס צרעה טפילי היא לנתח את מאגר הארס. עם זאת, צרעות טפיליות הן לרוב קטנות, ונתיחת צרעות טפיליות דורשת מיומנויות טכניות גבוהות. לכן, אם נוכל למצוא דרך לאסוף את ארס הצרעות הטפיליות בצורה יעילה ונוחה, זה יעזור מאוד לחקור את הארס של צרעות טפיליות.
טריכוגרמה (שם מדעי: Trichogrammatidae) היא סוג של צרעות טפיליות זעירות (~0.5 מ"מ אורך)6. צרעות אלה הן בין חומרי ההדברה הביולוגית הנפוצים ביותר, במיוחד נגד ביצים של מזיקים לפידופטרנים שונים הן בחקלאות והן ביערות. לדוגמה, T. dendrolimi, אחד ממיני הטריכוגרמה הנפוצים ביותר בסין, יושם באופן נרחב להדברת מגוון מזיקים חקלאיים וייעוריים, כגון Dendrolimus superans, Ostrinia furnacalis, ו Chilo suppressalis. מחקרים קודמים הראו כי צרעות טריכוגרמה יכולות להזריק את ביציהן לפונדקאים מלאכותיים7. ניתן ליצור פונדקאים מלאכותיים באמצעות חומרים כגון שעווה8, אגר9, פרפילם10 ופילם פלסטיק11. התמיסה בפונדקאים מלאכותיים המשרה מספיק אוביפוזיציה עבור טריכוגרמה יכולה להיות פשוטה, כגון חומצות אמינו או מלחים אנאורגניים12. בהתבסס על המאפיין כי T. dendrolimi יכול לטפיל פונדקאים מלאכותיים, מחקר זה מספק שיטה חדשה להפקת ארס מצרעות טפיליות באמצעות פונדקאים מלאכותיים. גישה זו נועדה לטפל בחסרונות של תפוקה נמוכה, טוהר נמוך ורגישות לזיהום בטכניקות מיצוי נוכחיות. באמצעות שיטה זו, כמות גדולה של ארס טוהר גבוה מ T. dendrolimi ניתן לחלץ, אשר עונה על הצרכים של מחקר מדעי וסינון של מולקולות ביו-אקטיביות למטרות קוטלי חרקים או רפואיים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;m Nylon Net</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>NY1002500</td>
			<td>For filtering the eggs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Polyvinyl alcohol</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>P139533</td>
			<td>For attractting&#160; T. dendrolimi&#160; to lay eggs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Sucrose water</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent&#160;</td>
			<td>10021463</td>
			<td>Feed Trichogramma dendrolimi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x LDS loading buffer</td>
			<td>Ace Hardware</td>
			<td>B23010301</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection box</td>
			<td>Deli</td>
			<td>8555</td>
			<td>Container for T. dendrolimi parasitism</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Future PAGE&#160; 4&#8211;12% (12 wells)</td>
			<td>Ace Hardware</td>
			<td>J70236502X</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenScript eStain L1 protein staining apparatus</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>L00753</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass grinding rod&#160;&#160;</td>
			<td>Applygen</td>
			<td>tb6268</td>
			<td>Semicircular protrudations&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L- Leucine</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>L0011</td>
			<td>Artificial host components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>A2219458</td>
			<td>Artificial host components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P0010</td>
			<td>Artificial host components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Centrifuges</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>D1008</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOPS-SDS running buffer</td>
			<td>Ace Hardware</td>
			<td>B23021</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omni-Easy Instant BCA protein assay kit</td>
			<td>Shanghai Yamay Biomedical Technology&#160;</td>
			<td>ZJ102</td>
			<td>For esimation of venom protein concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR plate layout of 96 holes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AB1400L</td>
			<td>Semicircular protrudations&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene plastic film</td>
			<td>Suzhou Aopang Trading &#160;</td>
			<td>001c5427</td>
			<td>Artificial egg card</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prestained color protein marker(10&#8211;180 kDa)</td>
			<td>YiFeiXue Biotech</td>
			<td>YWB007</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber band</td>
			<td>Guangzhou qianrui biology science and technology</td>
			<td>009</td>
			<td>Tighten the plastic film and the collection box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone rubber septa mat, 96-well, round hole</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F504416-0001</td>
			<td>Semicircular protrudations&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extracting venom from the parasitoid wasp trichogramma dendrolimi using an artificial host

צרעות טפיליות הן קבוצה מגוונת של חרקים הימנופטריים המשמשים כמשאבים יקרי ערך להדברה ביולוגית של מזיקים. כדי להבטיח טפילות מוצלחת, צרעות טפיליות מזריקות ארס לפונדקאים שלהן כדי לדכא את חסינות המארחים שלהן, לווסת את התפתחות הפונדקאים, חילוף החומרים ואפילו ההתנהגות שלהם. עם יותר מ-600,000 מינים מוערך, מגוון הצרעות הטפיליות עולה על זה של בעלי חיים ארסיים אחרים, כגון נחשים, חלזונות חרוט ועכבישים. ארס צרעה טפילי הוא מקור לא נחקר מספיק של מולקולות ביו-אקטיביות עם יישומים פוטנציאליים בהדברה וברפואה. עם זאת, איסוף ארס הטפילים מאתגר בשל חוסר היכולת להשתמש בגירוי ישיר או חשמלי והקושי בדיסקציה בגלל גודלם הקטן. טריכוגרמה (שם מדעי: Trichogramma ) הוא סוג של צרעות טפיליות ביצים זעירות (~0.5 מ"מ) הנמצאות בשימוש נרחב להדברה ביולוגית של מזיקים לפידופטרניים הן בחקלאות והן ביערות. כאן, אנו מדווחים על שיטה להפקת ארס מ T. dendrolimi באמצעות פונדקאים מלאכותיים. פונדקאים מלאכותיים אלה נוצרים עם סרט פוליאתילן ותמיסות חומצות אמינו ולאחר מכן מחוסנים בצרעות טריכוגרמה לטיפול בטפילות. לאחר מכן נאסף הארס ורוכז. שיטה זו מאפשרת מיצוי כמויות גדולות של ארס טריכוגרמה תוך הימנעות מזיהום מרקמות אחרות הנגרמות כתוצאה מדיסקציה, בעיה נפוצה בפרוטוקולי דיסקציה של מאגרי ארס. גישה חדשנית זו מאפשרת את המחקר של ארס טריכוגרמה , וסוללת את הדרך למחקר חדש וליישומים פוטנציאליים.

Parasitoid wasps are parasitic hymenopteran insects that are important resources for biological control1. There is a wide variety of parasitoid wasps, with over 600,000 estimated species2. The diversity of parasitoid wasps far exceeds that of other venomous arthropods, such as snakes, cone snails, spiders, scorpions, and bees. Venom is an important parasitic factor in parasitoid wasps. For successful parasitism, venom is injected into the host, modulating the host&#39;s behavior, immunity, development, and metabolism3. Moreover, the venom of parasitoid wasps displays remarkable diversity in its molecular structures, targets, and functions, reflecting complex coevolution with their hosts. Thus, parasitoid venom is a valuable and underappreciated resource of active molecules for insecticidal or medical purposes4. Unlike the venom of snakes, cone snails, spiders, scorpions, and bees, parasitoid wasp venom cannot be collected by direct stimulation or electrical stimulation5. The current method of extraction of parasitoid wasp venom is to dissect the venom reservoir. However, parasitoid wasps are often small, and dissection of parasitoid wasps requires high technical skills. Therefore, if we can find a way to collect the venom of parasitoid wasps efficiently and conveniently, it will be of great help to research the venom of parasitoid wasps.
Trichogramma (Hymenoptera: Trichogrammatidae) is a genus of tiny (~0.5 mm long) parasitoid wasps6. These wasps are among the most widely used biocontrol agents, particularly targeting eggs of various lepidopteran pests in both agriculture and forests. For example, T. dendrolimi, one of the most widely used Trichogramma species in China, has been extensively applied to control a variety of agricultural and forestry pests, such as Dendrolimus superans, Ostrinia furnacalis, and Chilo suppressalis. Previous studies showed that Trichogramma wasps could inject their eggs into artificial hosts7. Artificial hosts can be created using materials such as wax8, agar9, Parafilm10, and plastic film11. The solution in artificial hosts that induces sufficient oviposition for Trichogramma can be simple, such as amino acids or inorganic salts12. Based on the characteristic that T. dendrolimi can parasitize artificial hosts, this study provides a new method for extracting venom from parasitoid wasps using artificial hosts. This approach aims to address the shortcomings of low yield, low purity, and susceptibility to contamination in current extraction techniques. By using this method, a large amount of high-purity venom from T. dendrolimi can be extracted, which meets the needs of scientific research and screening of bioactive molecules for insecticidal or medical purposes.

מחבר זרקור: שיטת מיצוי ארס יעילה מצרעות טפיליות טריכוגרמה 

הפקת ארס מהצרעה הטפילית Trichogramma dendrolimi באמצעות פונדקאי מלאכותי

The lack of efficient venom extraction methods often limits the research on the venom of parasitoid wasps, especially in tiny parasitoid wasps. This study provides an efficient method to extract the venom of Trichogramma with follow up post study of Trichogramma venom, such as the protein compensation and the venom function analysis. Previously, no methods of exchanging of parasitoid wasp venom requires the distinguishing of venom reserve.However, parasitoid wasps are tiny. Not only are the technical requirements of distinguishing venom was high, but continuation of other tissues during dissection is also common. Our normal method uses artificial host, thus avoiding such problems.In the future, we will focus on the agriculture and the medical applications of Trichogramma venom. We aim to utilize specific insecticidal venom genes for pest control. Meanwhile, we plan to investigate the untapped potential of Trichogramma venom in methodology, particularly its prospective utility in enhancing immunotherapy techniques, and in the discovery of novel antibiotic molecules.

ריכוז החלבונים של דגימות ארס מייצגות נמדד באמצעות ערכת בדיקת החלבון, והתוצאות מוצגות בטבלה 1. התוצאות הראו כי ריכוז חלבון הארס שנאסף בשיטה זו נע בין 0.35 מיקרוגרם/מיקרוליטר ל-0.46 מק"ג/מיקרוליטר, בעוד שבבקרה השלילית של תמיסת חומצות אמינו היה ריכוז חלבון של 0.03 מק"ג/μL עד 0.05 מיקרוגרם/μL. ר?...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient Venom Extraction Method from Trichogramma Parasitoid Wasps at JoVE.com

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להפקת ארס מ Trichogramma dendrolimi באמצעות מארח מלאכותי שנוצר עם סרט פוליאתילן ותמיסת חומצות אמינו.

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, ...

היעדר שיטות יעילות למיצוי ארס מגביל לעתים קרובות את המחקר על ארס של צרעות טפיליות, במיוחד בצרעות טפיליות זעירות. מחקר זה מספק שיטה יעילה להפקת הארס של טריכוגרמה עם מעקב לאחר מחקר של ארס טריכוגרמה, כגון פיצוי החלבונים וניתוח תפקוד הארס. בעבר, לא היו שיטות להחלפת ארס צרעה טפילי הדורשות הבחנה בין מאגרי ארס.עם זאת, צרעות טפיליות הן זעירות. לא רק שהדרישות הטכניות להבחנה בין ארס היו גבוהות, אלא שגם המשך של רקמות אחרות במהלך הדיסקציה נפוץ. השיטה הרגילה שלנו משתמשת מארח מלאכותי, ובכך למנוע בעיות כאלה.בעתיד נתמקד בחקלאות וביישומים הרפואיים של ארס טריכוגרמה. אנו שואפים להשתמש בגנים ספציפיים של ארס קוטלי חרקים להדברה. בינתיים, אנו מתכננים לחקור את הפוטנציאל הבלתי מנוצל של ארס טריכוגרמה במתודולוגיה, במיוחד את התועלת הפוטנציאלית שלו בשיפור טכניקות אימונותרפיה, ובגילוי מולקולות אנטיביוטיות חדשות.

extracting-venom-from-parasitoid-wasp-trichogramma-dendrolimi-using

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Extracting Venom from the Parasitoid Wasp Trichogramma dendrolimi Using an Artificial Host

933 Views.  Nanjing Agricultural University. היעדר שיטות יעילות למיצוי ארס מגביל לעתים קרובות את המחקר על ארס של צרעות טפיליות, במיוחד בצרעות טפיליות זעירות. מחקר זה מספק שיטה יעילה להפקת הארס של טריכוגרמה עם מעקב לאחר מחקר של ארס טריכוגרמה, כגון פיצוי החלבונים וניתוח תפקוד הארס. בעבר, לא היו שיטות להחלפת ארס צרעה טפיל...

Video: מחבר זרקור: שיטת מיצוי ארס יעילה מצרעות טפיליות טריכוגרמה 

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, parasitoid wasps inject venom into their hosts to suppress their hosts&#39; immunity, modulate hosts&#39; development, metabolism, and even behavior. With over 600,000 estimated species, the diversity of parasitoid wasps surpasses that of other venomous animals, such as snakes, cone snails, and spiders. Parasitoid wasp venom is an underexplored source of bioactive molecules with potential applications in pest control and medicine. However, collecting parasitoid venom is challenging due to the inability to use direct or electrical stimulation and the difficulty in dissection because of their small size. Trichogramma is a genus of tiny (~0.5 mm) egg parasitoid wasps that are widely used for the biological control of lepidopteran pests in both agriculture and forests. Here, we report a method for extracting venom from T. dendrolimi using artificial hosts. These artificial hosts are created with polyethylene film and amino acid solutions and then inoculated with Trichogramma wasps for parasitism. The venom was subsequently collected and concentrated. This method enables the extraction of large amounts of Trichogramma venom while avoiding contamination from other tissues caused by dissection, a common issue in venom reservoir dissection protocols. This innovative approach facilitates the study of Trichogramma venom, paving the way for new research and potential applications.

Here, we present a protocol for extracting venom from Trichogramma dendrolimi using an artificial host created with polyethylene film and amino acid solution.

Trichogramma dendrolimi Artificial Host Interaction and Venom Extraction

Trichogramma dendrolimi  Artificial Host Interaction and Venom Extraction  

To begin, take a polyethylene plastic film 16 centimeters long, 12 centimeters wide, and 20 micrometers thick. Use a glass grinding tool to press out 30 semi-circular protrusions in a standard 96-well PCR layout. Expose both sides of the pressed polyethylene plastic film to UV light for one hour to disinfect it.Add a small amount of 10%polyvinyl alcohol to the semi-circular surface. Next, place about 3, 000 anesthetized female trichogramma dendrolimi wasps into a collection box. Place the convex side of the film egg card towards the collection box and secure the edges with a rubber band.Now add four microliters of amino-acid solution to each protrusion. Then cover it with another piece of polyethylene plastic film. Use a rubber band to tightly cover the collection box with two sheets of plastic.Allow the wasps to parasitize freely for four to eight hours. Provide 10%sucrose water through wet cotton during parasitization. Next, obtain the parasitized amino-acid solution from the inner protrusion of the artificial egg card and transfer it to the cap of 1.45 milliliter tubes.Cover the tube cap with a 10-micrometer nylon net, having a diameter of 25 millimeters. Then fasten the nylon net in the tube lightly. Centrifuge the upper right tube at 1, 360 g for 10 seconds.Collect the filtered solution containing the venom. Store the venom at minus 80 degrees Celsius for further analyses. BCA analysis of the venom samples showed that the concentration of venom protein ranged from 0.35 to 0.46 micrograms per microliter.The negative control of amino-acid solution only had a protein concentration of 0.03 to 0.05 micrograms per microliter. SDS-PAGE analysis of the venom showed a protein range spanning from under 10 kilodaltons to over 130 kilodaltons in size.