우리는 하이난성 자연과학재단(보조금 번호 323QN262), 중국 국립자연과학재단(보조금 번호 31701843 및 32172483), 장쑤 농업 과학 기술 혁신 기금(보조금 번호. CX(22)3012 및 CX(21)3008), 장쑤성 "Shuangchuang Doctor" 재단(보조금 번호 202030472) 및 난징 농업 대학 창업 기금(보조금 번호 804018).

1. 곤충 사육
<ol><li> Corcyra cephalonica를 옥수수 가루에 26 ± 1°C의 온도와 40% ± 10%의 상대 습도에서 먹이십시오.</li>
	<li>길림성 곤충의 T. dendrolimi 균주를 숙주로 삼아 길림성 곤충을 실내에서 번식시킨다. 말벌 성인 10 % 자당 물 초파리 튜브의 온도에서 26 ± 1 °C, 상대 습도 70 % ± 10 %, 빛 (L) : 어두운 (D) 기간 14 시간 : 10 시간.</li>
</ol>2. 폴리에틸렌 플라스틱 필름 달걀 카드의 준비
<ol><li>길이 16cm, 너비 12cm, 두께 20μm의 폴리에틸렌 플라스틱 필름을 사용합니다. 96개 구멍의 표준 PCR 플레이트 레이아웃에 따라 유리 연삭 막대를 사용하여 직경 2-3mm, 높이 약 3mm의 반원형 돌출부 30개를 압착합니다. 알림: 유리 연삭봉을 사용하여 30개의 반원형 돌출부를 압착하는 과정은 너무 세게 누르면 플라스틱에 구멍이 뚫리고 추출된 독이 없는 연삭봉이 오염되기 때문에 압력에 주의하면서 수행해야 합니다.</li>
	<li>압착된 폴리에틸렌 플라스틱 필름을 양면을 자외선(UV)에 1시간 동안 노출시켜 소독합니다.</li>
	<li>반원형 표면에 소량의 10% 폴리비닐 알코올을 첨가합니다.</li>
</ol>3. 트리코그람마 덴드로리미 기생
<ol><li>CO2 마취 후 T. dendrolimi 암컷 말벌을 수집 상자에 넣고 말벌의 수는 ~ 3000 개였습니다.</li>
	<li>필름 에그 카드의 볼록한 면을 수거 상자 쪽으로 놓고 가장자리를 고무 밴드로 고정합니다.</li>
	<li>각 반원형 돌출부에 4μL의 아미노산 용액(류신 6g/L, 페닐알라닌 4g/L, 히스티딘 4.25g/L)을 추가합니다. 길이 16cm, 너비 12cm의 평평한 폴리에틸렌 플라스틱 필름으로 덮습니다. 고무 밴드를 사용하여 두 장의 플라스틱으로 수거함을 단단히 덮습니다.</li>
	<li>T. dendrolimi 말벌이 4-8 시간 동안 자유롭게 기생하도록하고 젖은면을 통해 10 %의 자당수를 제공합니다.</li>
</ol>4. T. dendrolimi 독 수집
<ol><li>인공 계란 카드의 내부 돌출부에서 기생 아미노산 용액을 얻어 1.5mL 튜브의 캡으로 옮깁니다.</li>
	<li>직경 25mm의 10μm 나일론 그물망으로 튜브 캡을 덮고 나일론 그물망과 원심분리기 튜브를 단단히 고정합니다. 미니 원심분리기(1360 x g)를 사용하여 10초 동안 짧은 원심분리를 위해 원심분리기 튜브를 똑바로 세우고 여과된 용액(~100μL의 T. dendrolimi 독)을 수집합니다.</li>
	<li>Bicinchoninic acid (BCA) assay kit (Table of Materials)를 사용하여 수집 된 T. dendrolimi 독의 농도를 측정합니다.</li>
	<li>추가 분석을 위해 독을 -80 °C에서 보관하십시오.</li>
</ol>5. SDS-PAGE 분석
<ol><li>30 μL의 T. 덴드로리미 독을 10 μL의 4x 소듐 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE) 샘플 로딩 버퍼(재료 표)에 넣고 95°C에서 10분 동안 가열합니다.</li>
	<li>130분 동안 120V에서 SDS-PAGE 겔 실행을 수행합니다.</li>
	<li>단백질 염색 장치(재료 표)를 사용하여 SDS-PAGE 겔을 염색 및 탈색합니다.</li>
</ol>

Trichogramma dendrolimi 및 Venom Extraction에 의한 인공 숙주 기생

<ol>
	<li>Pennacchio, F., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+developmental+strategies+in+parasitic+hymenoptera.">Evolution of developmental strategies in parasitic hymenoptera.</a> Annual Review of Entomology. 51, 233-258 (2006).</li><li>Yan, Z. C., Ye, X. H., Wang, B. B., Fang, Q., Ye, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+advances+on+composition,+function+and+evolution+of+venom+proteins+in+parasitoid+wasps.">Research advances on composition, function and evolution of venom proteins in parasitoid wasps.</a> Chinese Journal of Biological Control. 33 (1), 1-10 (2017).</li><li>Asgari, S., Rivers, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venom+proteins+from+endoparasitoid+wasps+and+their+role+in+host-parasite+interactions.">Venom proteins from endoparasitoid wasps and their role in host-parasite interactions.</a> Annual Review of Entomology. 56, 313-335 (2011).</li><li>Moreau, S. J. M., Guillot, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+and+prospects+on+biosynthesis,+structures,+and+functions+of+venom+proteins+from+parasitic+wasps.">Advances and prospects on biosynthesis, structures, and functions of venom proteins from parasitic wasps.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 35 (11), 1209-1223 (2005).</li><li>Yan, Z. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+venom+serpin+splicing+isoform+of+the+endoparasitoid+wasp+Pteromalus+puparum+suppresses+host+prophenoloxidase+cascade+by+forming+complexes+with+host+hemolymph+proteinases.">A venom serpin splicing isoform of the endoparasitoid wasp Pteromalus puparum suppresses host prophenoloxidase cascade by forming complexes with host hemolymph proteinases.</a> Journal Biological Chemistry. 292 (3), 1038-1051 (2017).</li><li>Woelke, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+and+biology+of+two+new+egg+parasitoid+species+(Hymenoptera:+Trichogrammatidae)+reared+from+eggs+of+Heliconiini+butterflies+(Lepidoptera:+Nymphalidae:+Heliconiinae)+in+Panama.">Description and biology of two new egg parasitoid species (Hymenoptera: Trichogrammatidae) reared from eggs of Heliconiini butterflies (Lepidoptera: Nymphalidae: Heliconiinae) in Panama.</a> Journal of Natural History. 53 (11-12), 639-657 (2019).</li><li>Zang, L. S., Wang, S., Zhang, F., Desneux, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+with+Trichogramma+in+China:+History,+present+status,+and+perspectives.">Biological control with Trichogramma in China: History, present status, and perspectives.</a> Annual Review of Entomology. 66, 463-484 (2021).</li><li>Nettles, W. C. J., Morrison, R. K., Xie, Z. N., Ball, D., Shenkir, C. A., Vinson, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+action+of+potassium+chloride+and+magnesium+sulfate+on+parasitoid+wasp+oviposition.">Synergistic action of potassium chloride and magnesium sulfate on parasitoid wasp oviposition.</a> Science. 218, 4568 (1982).</li><li>Tilden, R. L., Ferkovich, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kairomonal+stimulation+of+oviposition+into+an+artificial+substrate+by+the+endoparasitoid+Microplitis+croceipes+(Hymenoptera)Braconidae).">Kairomonal stimulation of oviposition into an artificial substrate by the endoparasitoid Microplitis croceipes (Hymenoptera)Braconidae).</a> Annals of the Entomological Society of America. 81 (1), 152-156 (1988).</li><li>Xie, Z. N., Li, L., Xie, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+Habrobracon+hebetor.">In vitro culture of Habrobracon hebetor.</a> Chinese Journal of Biological Control. 5 (2), 49-51 (1989).</li><li>Han, S. T., Liu, W. H., Li, L. Y., Chen, Q. X., Zeng, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+Trichogramma+ostriniae+with+artificial+eggs.">Breeding Trichogramma ostriniae with artificial eggs.</a> Journal of Environmental Entomology. 21 (1), 9-12 (1999).</li><li>Li, L. Y., Chen, Q. X., Liu, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oviposition+behavior+of+twelve+species+of+Trichogramma+and+its+influence+on+the+efficiency+of+rearing+them+in+vitro.">Oviposition behavior of twelve species of Trichogramma and its influence on the efficiency of rearing them in vitro.</a> Journal of Environmental Entomology. 11 (1), 31-35 (1989).</li><li>Xing, J. Q., Li, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rearing+of+an+egg+parasite+Anastatus+japonicus+Ashmead+in+vitro.">Rearing of an egg parasite Anastatus japonicus Ashmead in vitro.</a> Acta Entomologica Sinica. 33 (2), 166-173 (1990).</li><li>Moreau, S. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#34;It+stings+a+bit+but+it+cleans+well&#34;:+Venoms+of+Hymenoptera+and+their+antimicrobial+potential.">&#34;It stings a bit but it cleans well&#34;: Venoms of Hymenoptera and their antimicrobial potential.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 186-204 (2013).</li><li>Moreau, S. J. M., Asgari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venom+proteins+from+parasitoid+wasps+and+their+biological+function.">Venom proteins from parasitoid wasps and their biological function.</a> Toxins. 7 (7), 2385-2412 (2015).</li></ol>

저자는 공개할 것이 없으며 경쟁하는 재정적 이익도 없습니다.

여기에서는 인공 숙주를 사용하여 T. dendrolimi 에서 독을 추출하는 방법을 제시합니다. 독 채취 실험의 핵심은 다음과 같습니다. (1) 준비하는 동안 T. dendrollimi 는 적절한 농도의CO2로 신속하게 마취되어야 합니다. CO2 농도가 너무 낮으면 Trichogramma 를 빠르게 마취하기에 충분하지 않습니다. 반대로, 농도가 너무 높으면 Trichogramma 가 죽어 인공 숙주에 기생하?...

기생 말벌은 생물학적 방제에 중요한 자원인 기생 hymenopteran 곤충입니다1. 다양한 기생 말벌이 있으며 600,000 종 이상의 추정 종2. 기생 말벌의 다양성은 뱀, 원뿔 달팽이, 거미, 전갈 및 꿀벌과 같은 다른 독이 있는 절지동물의 다양성을 훨씬 능가합니다. 독은 기생 말벌의 중요한 기생 인자입니다. 성공적인 기생을 위해 숙주에 독을 주입하여 숙주의 행동, 면역, 발달 및 신진대사를 조절한다3. 더욱이, 기생 말벌의 독은 분자 구조, 표적 및 기능에서 놀라운 다양성을 나타내며 숙주와의 복잡한 공진화를 반영합니다. 따라서 기생충 독은 살충 또는 의료 목적을 위한 활성 분자의 귀중하고 과소평가된 자원이다4. 뱀, 원뿔 달팽이, 거미, 전갈, 꿀벌의 독과 달리 기생 말벌 독은 직접적인 자극이나 전기 자극으로 채취할 수 없다5. 기생 말벌 독을 추출하는 현재 방법은 독 저장소를 해부하는 것입니다. 그러나 기생 말벌은 종종 작으며 기생 말벌의 해부는 높은 기술이 필요합니다. 따라서 기생 말벌의 독을 효율적이고 편리하게 채취 할 수있는 방법을 찾을 수 있다면 기생 말벌의 독을 연구하는 데 큰 도움이 될 것입니다.
트리코그람마(Hymenoptera: Trichogrammatidae)는 작은(~0.5mm 길이) 기생 말벌속이다 6. 이 말벌은 가장 널리 사용되는 생물 방제제 중 하나이며, 특히 농업과 산림 모두에서 다양한 나비목 해충의 알을 표적으로 삼습니다. 예를 들어, 중국에서 가장 널리 사용되는 Trichogramma 종 중 하나인 T. dendrolimi는 Dendrolimus superans, Ostrinia furnacalis 및 Chilo suppressalis와 같은 다양한 농업 및 임업 해충을 방제하는 데 광범위하게 적용되었습니다. 이전 연구에서는 Trichogramma 말벌이 인공 숙주에 알을 주입할 수 있음을 보여주었다7. 인공 호스트는 왁스8, 한천9, 파라막10 및 플라스틱 필름11과 같은 재료를 사용하여 만들 수 있습니다. 트리코그람마(Trichogramma)에 대한 충분한 산란을 유도하는 인공 숙주에서의 용액은 아미노산 또는 무기염과 같이 간단할 수 있다12. 본 연구는 T. dendrolimi가 인공 숙주에 기생할 수 있다는 특성을 바탕으로 인공 숙주를 사용하여 기생 말벌에서 독을 추출하는 새로운 방법을 제공합니다. 이 접근 방식은 현재 추출 기술에서 낮은 수율, 낮은 순도 및 오염에 대한 민감성의 단점을 해결하는 것을 목표로 합니다. 이 방법을 사용하면 T. dendrolimi에서 다량의 고순도 독을 추출할 수 있으며, 이는 살충 또는 의료 목적을 위한 생체 활성 분자의 과학적 연구 및 스크리닝의 요구를 충족합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;m Nylon Net</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>NY1002500</td>
			<td>For filtering the eggs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Polyvinyl alcohol</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>P139533</td>
			<td>For attractting&#160; T. dendrolimi&#160; to lay eggs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Sucrose water</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent&#160;</td>
			<td>10021463</td>
			<td>Feed Trichogramma dendrolimi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x LDS loading buffer</td>
			<td>Ace Hardware</td>
			<td>B23010301</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection box</td>
			<td>Deli</td>
			<td>8555</td>
			<td>Container for T. dendrolimi parasitism</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Future PAGE&#160; 4&#8211;12% (12 wells)</td>
			<td>Ace Hardware</td>
			<td>J70236502X</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenScript eStain L1 protein staining apparatus</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>L00753</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass grinding rod&#160;&#160;</td>
			<td>Applygen</td>
			<td>tb6268</td>
			<td>Semicircular protrudations&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L- Leucine</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>L0011</td>
			<td>Artificial host components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>A2219458</td>
			<td>Artificial host components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P0010</td>
			<td>Artificial host components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Centrifuges</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>D1008</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOPS-SDS running buffer</td>
			<td>Ace Hardware</td>
			<td>B23021</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omni-Easy Instant BCA protein assay kit</td>
			<td>Shanghai Yamay Biomedical Technology&#160;</td>
			<td>ZJ102</td>
			<td>For esimation of venom protein concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR plate layout of 96 holes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AB1400L</td>
			<td>Semicircular protrudations&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene plastic film</td>
			<td>Suzhou Aopang Trading &#160;</td>
			<td>001c5427</td>
			<td>Artificial egg card</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prestained color protein marker(10&#8211;180 kDa)</td>
			<td>YiFeiXue Biotech</td>
			<td>YWB007</td>
			<td>SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber band</td>
			<td>Guangzhou qianrui biology science and technology</td>
			<td>009</td>
			<td>Tighten the plastic film and the collection box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone rubber septa mat, 96-well, round hole</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F504416-0001</td>
			<td>Semicircular protrudations&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extracting venom from the parasitoid wasp trichogramma dendrolimi using an artificial host

기생 말벌은 해충 생물 방제에 귀중한 자원 역할을하는 다양한 hymenopteran 곤충 그룹입니다. 성공적인 기생을 위해 기생 말벌은 숙주에 독을 주입하여 숙주의 면역력을 억제하고 숙주의 발달, 신진 대사 및 행동을 조절합니다. 600,000 종 이상의 추정 종으로 기생 말벌의 다양성은 뱀, 원뿔 달팽이 및 거미와 같은 다른 독이 있는 동물의 다양성을 능가합니다. 기생 말벌 독은 해충 방제 및 의학에 잠재적으로 응용 할 수있는 생체 활성 분자의 미개척 된 공급원입니다. 그러나 기생충 독을 채취하는 것은 직접적인 자극이나 전기적 자극을 사용할 수 없고 크기가 작아 해부가 어렵기 때문에 어렵습니다. Trichogramma 는 농업과 산림 모두에서 나비목 해충의 생물학적 방제에 널리 사용되는 작은(~0.5mm) 알 기생 말벌의 속입니다. 여기에서, 우리는 인공 숙주를 사용하여 T. dendrolimi 에서 독을 추출하는 방법을보고합니다. 이 인공 숙주는 폴리에틸렌 필름과 아미노산 용액으로 만든 다음 기생충을 위해 Trichogramma 말벌을 접종합니다. 그 후 독을 채취하여 농축하였다. 이 방법을 사용하면 독 저장소 해부 프로토콜의 일반적인 문제인 해부로 인한 다른 조직의 오염을 방지하면서 다량의 Trichogramma 독을 추출할 수 있습니다. 이 혁신적인 접근 방식은 Trichogramma 독 연구를 촉진하여 새로운 연구 및 잠재적 응용 분야를 위한 길을 열어줍니다.

Parasitoid wasps are parasitic hymenopteran insects that are important resources for biological control1. There is a wide variety of parasitoid wasps, with over 600,000 estimated species2. The diversity of parasitoid wasps far exceeds that of other venomous arthropods, such as snakes, cone snails, spiders, scorpions, and bees. Venom is an important parasitic factor in parasitoid wasps. For successful parasitism, venom is injected into the host, modulating the host&#39;s behavior, immunity, development, and metabolism3. Moreover, the venom of parasitoid wasps displays remarkable diversity in its molecular structures, targets, and functions, reflecting complex coevolution with their hosts. Thus, parasitoid venom is a valuable and underappreciated resource of active molecules for insecticidal or medical purposes4. Unlike the venom of snakes, cone snails, spiders, scorpions, and bees, parasitoid wasp venom cannot be collected by direct stimulation or electrical stimulation5. The current method of extraction of parasitoid wasp venom is to dissect the venom reservoir. However, parasitoid wasps are often small, and dissection of parasitoid wasps requires high technical skills. Therefore, if we can find a way to collect the venom of parasitoid wasps efficiently and conveniently, it will be of great help to research the venom of parasitoid wasps.
Trichogramma (Hymenoptera: Trichogrammatidae) is a genus of tiny (~0.5 mm long) parasitoid wasps6. These wasps are among the most widely used biocontrol agents, particularly targeting eggs of various lepidopteran pests in both agriculture and forests. For example, T. dendrolimi, one of the most widely used Trichogramma species in China, has been extensively applied to control a variety of agricultural and forestry pests, such as Dendrolimus superans, Ostrinia furnacalis, and Chilo suppressalis. Previous studies showed that Trichogramma wasps could inject their eggs into artificial hosts7. Artificial hosts can be created using materials such as wax8, agar9, Parafilm10, and plastic film11. The solution in artificial hosts that induces sufficient oviposition for Trichogramma can be simple, such as amino acids or inorganic salts12. Based on the characteristic that T. dendrolimi can parasitize artificial hosts, this study provides a new method for extracting venom from parasitoid wasps using artificial hosts. This approach aims to address the shortcomings of low yield, low purity, and susceptibility to contamination in current extraction techniques. By using this method, a large amount of high-purity venom from T. dendrolimi can be extracted, which meets the needs of scientific research and screening of bioactive molecules for insecticidal or medical purposes.

저자 스포트라이트: Trichogramma Parasitoid Wasps의 효율적인 독 추출 방법 

인공 숙주를 사용하여 기생 말벌 Trichogramma dendrolimi 에서 독 추출

The lack of efficient venom extraction methods often limits the research on the venom of parasitoid wasps, especially in tiny parasitoid wasps. This study provides an efficient method to extract the venom of Trichogramma with follow up post study of Trichogramma venom, such as the protein compensation and the venom function analysis. Previously, no methods of exchanging of parasitoid wasp venom requires the distinguishing of venom reserve.However, parasitoid wasps are tiny. Not only are the technical requirements of distinguishing venom was high, but continuation of other tissues during dissection is also common. Our normal method uses artificial host, thus avoiding such problems.In the future, we will focus on the agriculture and the medical applications of Trichogramma venom. We aim to utilize specific insecticidal venom genes for pest control. Meanwhile, we plan to investigate the untapped potential of Trichogramma venom in methodology, particularly its prospective utility in enhancing immunotherapy techniques, and in the discovery of novel antibiotic molecules.

대표적인 독 샘플의 단백질 농도는 단백질 분석 키트를 사용하여 측정하였으며, 그 결과는 표 1에 제시하였다. 그 결과, 이 방법으로 채취한 독 단백질의 농도는 0.35μg/μL에서 0.46μg/μL 사이인 반면, 아미노산 용액의 음성 대조군은 0.03μg/μL에서 0.05μg/μL의 단백질 농도에 불과했습니다. 이 방법으로 채취한 독 단백질의 농도는 음성 대조군보다 훨씬 높기 때문에 이 방법이 기생 말벌의 ...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient Venom Extraction Method from Trichogramma Parasitoid Wasps at JoVE.com

여기에서는 폴리에틸렌 필름과 아미노산 용액으로 만든 인공 숙주를 사용하여 Trichogramma dendrollimi 에서 독을 추출하는 프로토콜을 제시합니다.

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, ...

효율적인 독 추출 방법의 부족은 특히 작은 기생 말벌에서 기생 말벌의 독에 대한 연구를 제한하는 경우가 많습니다. 이 연구는 단백질 보상 및 독 기능 분석과 같은 Trichogramma 독에 대한 후속 사후 연구를 통해 Trichogramma의 독을 추출하는 효율적인 방법을 제공합니다. 이전에는 기생 말벌 독을 교환하는 방법이 독 예비량을 구별 할 필요가 없었습니다.그러나 기생 말벌은 작습니다. 독을 구별하기 위한 기술적 요구 사항이 높을 뿐만 아니라 해부 중에 다른 조직이 계속되는 것도 일반적입니다. 우리의 일반적인 방법은 인공 호스트를 사용하므로 이러한 문제를 피할 수 있습니다.앞으로 우리는 Trichogramma 독의 농업 및 의료 응용 분야에 중점을 둘 것입니다. 우리는 해충 방제를 위해 특정 살충 독 유전자를 활용하는 것을 목표로 합니다. 한편, 우리는 방법론에서 트리코그람마 독의 미개척 잠재력, 특히 면역 요법 기술 향상 및 새로운 항생제 분자 발견에 대한 잠재적 유용성을 조사할 계획입니다.

extracting-venom-from-parasitoid-wasp-trichogramma-dendrolimi-using

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Extracting Venom from the Parasitoid Wasp Trichogramma dendrolimi Using an Artificial Host

932 조회수.  Nanjing Agricultural University. 효율적인 독 추출 방법의 부족은 특히 작은 기생 말벌에서 기생 말벌의 독에 대한 연구를 제한하는 경우가 많습니다. 이 연구는 단백질 보상 및 독 기능 분석과 같은 Trichogramma 독에 대한 후속 사후 연구를 통해 Trichogramma의 독을 추출하는 효율적인 방법을 제공합니다. 이전에는 기생 말벌 독을 교환하는 방법이 독 예비량을 구별 할 필요가 없었습니다.그러나 기생 말벌은...

비디오: 저자 스포트라이트: Trichogramma Parasitoid Wasps의 효율적인 독 추출 방법 

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, parasitoid wasps inject venom into their hosts to suppress their hosts&#39; immunity, modulate hosts&#39; development, metabolism, and even behavior. With over 600,000 estimated species, the diversity of parasitoid wasps surpasses that of other venomous animals, such as snakes, cone snails, and spiders. Parasitoid wasp venom is an underexplored source of bioactive molecules with potential applications in pest control and medicine. However, collecting parasitoid venom is challenging due to the inability to use direct or electrical stimulation and the difficulty in dissection because of their small size. Trichogramma is a genus of tiny (~0.5 mm) egg parasitoid wasps that are widely used for the biological control of lepidopteran pests in both agriculture and forests. Here, we report a method for extracting venom from T. dendrolimi using artificial hosts. These artificial hosts are created with polyethylene film and amino acid solutions and then inoculated with Trichogramma wasps for parasitism. The venom was subsequently collected and concentrated. This method enables the extraction of large amounts of Trichogramma venom while avoiding contamination from other tissues caused by dissection, a common issue in venom reservoir dissection protocols. This innovative approach facilitates the study of Trichogramma venom, paving the way for new research and potential applications.

Here, we present a protocol for extracting venom from Trichogramma dendrolimi using an artificial host created with polyethylene film and amino acid solution.

연구

생화학

Trichogramma dendrolimi Artificial Host Interaction and Venom Extraction

Trichogramma dendrolimi  Artificial Host Interaction and Venom Extraction  

To begin, take a polyethylene plastic film 16 centimeters long, 12 centimeters wide, and 20 micrometers thick. Use a glass grinding tool to press out 30 semi-circular protrusions in a standard 96-well PCR layout. Expose both sides of the pressed polyethylene plastic film to UV light for one hour to disinfect it.Add a small amount of 10%polyvinyl alcohol to the semi-circular surface. Next, place about 3, 000 anesthetized female trichogramma dendrolimi wasps into a collection box. Place the convex side of the film egg card towards the collection box and secure the edges with a rubber band.Now add four microliters of amino-acid solution to each protrusion. Then cover it with another piece of polyethylene plastic film. Use a rubber band to tightly cover the collection box with two sheets of plastic.Allow the wasps to parasitize freely for four to eight hours. Provide 10%sucrose water through wet cotton during parasitization. Next, obtain the parasitized amino-acid solution from the inner protrusion of the artificial egg card and transfer it to the cap of 1.45 milliliter tubes.Cover the tube cap with a 10-micrometer nylon net, having a diameter of 25 millimeters. Then fasten the nylon net in the tube lightly. Centrifuge the upper right tube at 1, 360 g for 10 seconds.Collect the filtered solution containing the venom. Store the venom at minus 80 degrees Celsius for further analyses. BCA analysis of the venom samples showed that the concentration of venom protein ranged from 0.35 to 0.46 micrograms per microliter.The negative control of amino-acid solution only had a protein concentration of 0.03 to 0.05 micrograms per microliter. SDS-PAGE analysis of the venom showed a protein range spanning from under 10 kilodaltons to over 130 kilodaltons in size.