正常なDAKIKI細胞に対するDIOの安全な濃度と効果をスクリーニングするためのアッセイ

まず、96ウェルプレートにDAKIKI細胞をウェルあたり40万個の密度で播種します。さまざまな実験グループを設定し、その後、グループ化方法に基づいて対応する処理を設定します。プレートを摂氏37度と二酸化炭素5%で24時間インキュベートします。

乳酸デヒドロゲナーゼ細胞毒性アッセイでは、高対照群の各ウェルに5マイクロリットルのライセートを添加します。そして、プレートを5%二酸化炭素と摂氏37度で15分間インキュベートします。次に、反応混合物を各ウェルに100マイクロリットル加えます。

反応を急冷するには、ウェルごとに50マイクロリットルの停止反応溶液を追加します。Cell Counting Kit-8(CCK-8)アッセイでは、最初の24時間インキュベーション後、各ウェルに20マイクロリットルのCCK-8試薬を加えます。そして、プレートを5%二酸化炭素と摂氏37度で2時間インキュベーターに戻します。

乳酸デヒドロゲナーゼ細胞毒性アッセイの結果は、0.25〜1.0マイクログラム/ミリリットルの濃度でジオシンによって誘導される有意な細胞毒性を示し、乳酸デヒドロゲナーゼ放出率が10%CCK-8アッセイ未満であったことは、モデル群と比較して、ジオシンがLPS誘導性DAKIKI細胞増殖を濃度依存的に阻害し、0.5マイクログラム/ミリリットルおよび1.0マイクログラムの濃度で有意な阻害を示したことを示しました。