まず、事前に調製したフォーミュラと、固定およびパラフィン包埋肺がん組織サンプルスライドを入手します。摂氏65度で5分間インキュベートします。スライドをキシレンに浸し、続いて濃度を下げたエタノール溶液に浸して脱水を行います。
次に、スライドを滅菌水に1分間ずつ3回浸します。抗原賦活化のために、スライドを染色および修復ボックスに入れます。pH 6または9の免疫組織化学的抗原修復緩衝液を充填します。
箱に蓋をして、電子レンジで100%の電力で8分間加熱します。次に、スライドを室温まで冷却します。組織をブロッキング溶液で覆い、加湿チャンバー内で室温で10分間インキュベートします。
ブロッキング溶液を除去した後、スライドを一次抗体ワーキング溶液で覆い、加湿チャンバーに入れます。次に、このチャンバーを摂氏37度で1時間インキュベートします。次に、スライドを洗浄緩衝液で2分間洗浄します。
ポリマー西洋ワサビペルオキシダーゼをスライドに直接滴下し、室温で15分間インキュベートします。スライドを洗浄した後、フルオロフォア作業溶液をスライドに直接滴下し、室温で10分間インキュベートします。スライドを洗浄したら、前述のようにマイクロ波処理を行います。
スライドが室温まで冷えたら、2回蒸留水で1分間ずつ3回洗浄します。次に、スライドを洗浄バッファー作業溶液に2分間浸漬し、抗体のインキュベーション、西洋ワサビペルオキシダーゼ、および蛍光色素の添加を図示に従って行います。細胞核染色の場合は、スライドをDAPIワーキング溶液で覆い、加湿チャンバー内で室温で5分間インキュベートします。
次に、スライドを二重蒸留水で3回、それぞれ1分間洗浄します。スライドから水滴を取り除きます。スライドに10〜20マイクロリットルの蛍光消光剤を加え、顕微鏡のカバーガラスで密封します。
