生細胞における小胞体-ミトコンドリア接触を測定するためのスプリットルシフェラーゼ再構成アッセイ

私の研究室では、膜接触の形をとる有機間コミュニケーションと、細胞の健康維持や疾患の発症原因におけるそれらの役割について研究しています。私たちは特に、ミトコンドリアと小胞体の間の膜接触に関心があり、それらがどのように制御され、その調節不全がどのように神経変性につながるかを理解しようとしています。小胞体ミトコンドリアとの接触が細胞の健康にとって重要であり、その調節不全が多くの疾患と関連していることはわかっていますが、そのレベルがどのように調節されているかについてはあまりわかっていません。

これに対処するための最初のステップは、細胞内のERミトコンドリア接触のレベルを測定するためのシンプルで信頼性の高いプロトコルを確立することです。当社のスプリットルシフェラーゼアッセイは、ほとんどのアッセイと比較して、生細胞内のERミトコンドリアの接触を定量するためのより簡単で迅速な方法を提供します。私たちは、レニージャ・ルシフェラーゼの2つの分割された半分を利用し、半分はERを対象とし、もう半分はミトコンドリアを対象としています。

これらは、ER膜とミトコンドリア膜が密接に接触している場合にのみ一緒に再組み立てすることができ、その結果、完全な酵素活性を持つ再構成されたルシフェラーゼが得られます。この分析法はシンプルで、ハイスループットスクリーニングに適しており、多くのラボで簡単にアクセスできます。ERミトコンドリア接触の分子的および遺伝的調節因子を特定し、さらに治療薬に発展させることで、神経変性疾患の分野を前進させることを期待しています。

私たちの結果は、さまざまな薬物や薬物の組み合わせがERミトコンドリアの接触にどのように影響するのか、これらの接触の背後にある重要な分子プレーヤーは何かなど、重要な問題への道を開きました。これらの疑問から、小胞体ミトコンドリアの接触メカニズムをより深く理解し、関連疾患と闘う方法を見つけることができます。