博士ヘイは博士西、RCUKフェローシップによってサポートされていました外科でサポートされていた、博士MedineはBHFコア基金からの助成金によって支えられて、氏バルタザルLucendo - VillarinはMRC博士Studenshipによってサポートされていました。博士周は、中国政府からの奨学金によって支えられている。

<ol>
	<li>Asgari, S., Pournasr, B., Salekdeh, G. H., Ghodsizadeh, A., Ott, M., Baharvand, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells:+a+new+era+for+hepatology.">Induced pluripotent stem cells: a new era for hepatology.</a> J. Hepatol. 53, 738-751 (2010).</li><li>Hay, D. C., Pernagallo, S., Diaz-Mochon, J. J., Medine, C. N., Greenhough, S., Hannoun, Z., Schrader, J., Black, J. R., Fletcher, J., Dalgetty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+Screening+of+Polymer+Libraries+to+Define+Novel+Substrates+for+Functional+Hepatocytes+with+Inducible+Drug+Metabolism.">Unbiased Screening of Polymer Libraries to Define Novel Substrates for Functional Hepatocytes with Inducible Drug Metabolism.</a> Stem Cell Research. 6, 92-101 (2011).</li><li>Payne, C. M., Samuel, K., Pryde, A., King, J., Brownstein, D., Schrader, J., Medine, C. N., Forbes, S. J., Iredale, J. P., Newsome, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+Functional+Hepatocyte+Like+Cells+in+Immune+Compromised+Mice.">Persistence of Functional Hepatocyte Like Cells in Immune Compromised Mice.</a> Liver International. 31, 254-262 (2011).</li><li>Greenhough, S., Medine, C., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+Stem+Cell+Derived+Hepatocyte+Like+Cells+and+their+Potential+in+Toxicity+Screening.">Pluripotent Stem Cell Derived Hepatocyte Like Cells and their Potential in Toxicity Screening.</a> Toxicology. 278, 250-255 (2010).</li><li>Medine, C. N., Greenhough, S., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Stem+Cell+Derived+Hepatic+Endoderm+in+Human+Drug+Discovery.">The Role of Stem Cell Derived Hepatic Endoderm in Human Drug Discovery.</a> Biochemical Society Transactions. 38, 1033-1036 (2010).</li><li>Hannoun, Z., Fletcher, J., Greenhough, S., Medine, C. N., Samuel, K., Sharma, R., Pryde, A., Black, J. R., Ross, J. A., Wilmut, I., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Comparison+between+Conditioned+Media+and+Serum+Free+Media+in+Human+Embryonic+Stem+Cell+Culture+and+Differentiation.">The Comparison between Conditioned Media and Serum Free Media in Human Embryonic Stem Cell Culture and Differentiation.</a> Cellular Reprogramming. 12, 133-140 (2010).</li><li>Dalgetty, D. M., Medine, C., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+Future+Challenges+in+Stem+Cell-Derived+Liver+Technologies.">Progress and Future Challenges in Stem Cell-Derived Liver Technologies.</a> American Journal of Physiology - Gastrointestinal and Liver Physiology. 297, 241-248 (2009).</li><li>Hay, D. C., Fletcher, J., Payne, C., Terrace, J. D., Gallagher, R. C. J., Snoeys, J., Black, J., Wojtacha, D., Samuel, K., Hannoun, Z., Pryde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Efficient+Differentiation+of+hESCs+to+Functional+Hepatic+Endoderm+Requires+ActivinA+and+Wnt3a+Signalling.">Highly Efficient Differentiation of hESCs to Functional Hepatic Endoderm Requires ActivinA and Wnt3a Signalling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 12301-12306 (2008).</li><li>Fletcher, J., Cui, W., Samuels, K., Black, J. R., Currie, I. S., Terrace, J. D., Payne, C., Filippi, C., Newsome, P., Forbes, S. J., Ross, J. A., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inhibitory+Role+of+Stromal+Cell+Mesenchyme+on+Human+Embryonic+Stem+Cell+Hepatocyte+Differentiation+is+Overcome+by+Wnt3a+Treatment.">The Inhibitory Role of Stromal Cell Mesenchyme on Human Embryonic Stem Cell Hepatocyte Differentiation is Overcome by Wnt3a Treatment.</a> Cloning and Stem Cells. 10, 331-340 (2008).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

私たちは、人間のHLCsのスケーラブルなレベルを生成するために、単純な均質およびin vitroで再現性の高いモデルを開発した。我々のモデルは、外部の協力研究室の数によって検証されています。我々は日常的に発達マーカーと肝特異的機能アッセイ（これのほとんどが市販されている）の私達の家のツールボックスを使用して幹細胞由来のHLCsを特徴付ける。私たちのプロセスの重要な...

マトリゲルコーティングプレートとフラスコ<ol><li>マトリゲル（10 mLを、BD Biosciences社、英国）、-20℃で保存</li><li> KO - DMEM（500mLの、ギブコ、Invitrogen社、英国）、4℃で保存します。 </li><li>組織培養プレート（ウェル6、ウェル12、コーニング、英国） </li><li>組織培養フラスコ（ベント25平方センチメートル、コーニング、英国） </li></ol> hESCのメンテナンス<ol><li>マウス胚性線維芽細胞条件培地（MEF - CM）（100mLの、R＆Dシステムズ社、米国）、-20℃で保存します。 </li><li> BSA溶液（50mL、シグマアルドリッチ、英国）、4℃で保存します。 </li><li>人間の塩基性線維芽細胞増殖因子（100μgを、Peprotech社製、米国）、-20℃で保存</li></ol>コラゲナーゼで継代ヒトES細胞<ol><li>ヒトES細胞のコンフルエントよくまたはフラスコ。 </li><li>必要に応じて、マトリゲル被覆ウェルまたはフラスコ。 </li><li> Phospate緩衝生理食塩水（- MgCl 2の 、 -のCaCl 2）（500mLの、ギブコ、Invitrogen社、英国）、室温で保管。 </li><li>コラゲナーゼIV（1グラム、ギブコ、Invitrogen、英国）、4℃で保存します。 </li><li>マウス胚性線維芽細胞条件培地（MEF - CM）（100mLの、R＆Dシステムズ社、米国）。 </li><li>人間の塩基性線維芽細胞増殖因子（100μgを、Peprotech社製、米国）。 </li></ol>肝内胚葉へのヒトESの分化<ol><li> RPMI 1640（500 mLを、ギブコ、Invitrogen社、英国）、4℃で保存します。 </li><li> B27サプリメント（10 mLを、ギブコ、Invitrogen社、英国）、-20℃で保存</li><li>アクチビンA（2μgを、Peprotech社製、米国）、-20℃で保存します。 </li><li>組換えマウスのWnt3a（2μgを、R＆Dシステムズ社、米国）、-20℃で保存</li><li> KO - DMEM（500mLの、ギブコ、Invitrogen社、英国）、4℃で保存します。 </li><li> KO - SR（500mLの、ギブコ、Invitrogen社、英国）、-20℃で保存</li><li>非必須アミノ酸（100mLの、ギブコ、Invitrogen社、英国）、4℃で保存します。 </li><li> β-メルカプトエタノール（10 mLを、ギブコ、Invitrogen社、英国）、4℃で保存します。 </li><li> DMSO（シグマアルドリッチ、英国）、室温で保管</li><li>リーボビッツL - 15培地（500mLの、SIGMアルドリッチ、英国）、4℃で保存します。 </li><li>トリプトースリン酸塩ブロス（100mLの、シグマアルドリッチ、英国）、4℃で保存します。 </li><li>胎児ウシ血清、不活化熱（500mLの、ギブコ、Invitrogen社、英国）、-20℃で保存</li><li>ヒドロコルチゾン21 -ヘミサクシネート（100mgを、シグマアルドリッチ、英国）、-20℃で保存</li><li>インスリン（ウシ膵臓）（100 mgの、シグマアルドリッチ、英国）、-20℃で保存</li><li> L -グルタミン（100mLの、ギブコ、Invitrogen社、英国）、-20℃で保存</li><li>アスコルビン酸（25グラム、シグマアルドリッチ、英国）、-20℃で保存します。 </li><li>ヒトHGF（10μgを、Peprotech社製、米国）、-20℃で保存</li><li>組換えヒトオンコスタチンM（OSM）（50μgの、R＆Dシステムズ社、米国）、-20℃で保存します。 </li><li>シリンジは、フィルタユニット0.22μmの（ミリポア、英国）を駆動</li></ol>ヒトES細胞由来の肝内胚葉のキャラクタリゼーション免疫染色<ol><li>リン酸緩衝生理食塩水（- MgCl 2の 、 -のCaCl 2）（500mLの、ギブコ、Invitrogen社、英国）、STO室温で再。 </li><li> PBST、PBS、0.1％Tween 20（Sigma - Aldrich社、英国）で構成さ。 </li><li>パラホルムアルデヒド（PFA）（Sigma - Aldrich社、英国）をPBSで構成され、店舗-20℃ </li><li>グリセロール（Sigma - Aldrich社、英国）、室温で保管。 </li><li>トリスベース（Sigma - Aldrich社、英国）、室温で保管。 </li><li>エタノール</li><li>血清（ABD Serotech、英国）、-20℃で保存</li><li>二次抗体、Alexaのフルオロフォア（Molecular Probes社、Invitrogen社、英国）。 </li><li> MOWIOL 4から88は（Polysciences社、米国）あたりの製造業者の指示としてトリスHCLとグリセロールで構成されています。 DAPI（ピアース、サーモフィッシャーサイエンティフィック、英国）は、1:1000希釈でMOWIOL溶液に添加される。 </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td colspan="2">一次抗体</td><td></td><td></td></tr><tr><td>抗原* </td><td>タイプ</td><td>サプライヤー</td><td>希釈</td></tr><tr><td> ALB </td><td>モノクローナルマウス</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 1月5日00 </td></tr><tr><td> E -カドヘリン</td><td>モノクローナルマウス</td><td>ミリポア</td><td> 100分の1 </td></tr><tr><td> α-フェトプロテイン</td><td>モノクローナルマウス</td><td>シグマ</td><td> 500分の1 </td></tr><tr><td> SSEA - 4 FITC </td><td>モノクローナルマウス</td><td> Biolegend </td><td> 100分の1 </td></tr><tr><td> IgG抗体</td><td>モノクローナルマウス</td><td> DAKO </td><td> 500分の1 </td></tr><tr><td colspan="2">二次抗体</td><td></td><td></td></tr><tr><td>抗マウスFITC共役</td><td>モノクローナルヤギ</td><td>インビトロジェン</td><td> 400分の1 </td></tr></tbody></table> 表2ヒトES細胞由来の肝内胚葉の免疫染色に用いる抗体を、使用される濃度は、種はで開発され、企業はそれらがから購入されています。 肝内胚葉とNormalisationの機能解析（mgタンパク質当たり） <ol><li> P4 - GLO CYP3A4、CYP1A2、キットおよびルミノメーター（Promega社製、米国）。 </li><li value="1">白色平底96ウェルアッセイプレート（BD Biosciences社、英国）。 </li><li> BCAアッセイキット（Pierce社、サーモフィッシャーサイエンティフィック、英国）。 </li><li>透明な96ウェルアッセイプレート（IWAKI、英国） </li></ol>

robust generation of hepatocyte-like cells from human embryonic stem cell populations

モデリング人間の薬物毒性の進歩にもかかわらず、多くの化合物は、予期せぬ副作用のために臨床試験中に失敗する。臨床試験の費用はかなりのもの、従ってそれはより多くの予測毒性学スクリーンを開発し、薬剤開発（Greenhoughら2010）で早い段階で展開されていることが不可欠です。ヒト肝細胞は、薬物の毒性を評価するための現在のゴールドスタンダードモデルを表していますが、変数機能を発揮する限られたリソースです。そのため、不死化細胞株や動物の組織モデルの使用が日常的に多量のために採用されている。両方のソースが有益であるが、彼らは貧しい機能、種の変動および/または培養における不安定性（ダルゲティら2009）によって制限されています。多能性幹細胞（PSCは）細胞などのヒト肝細胞の魅力的な代替ソース（HLCs）（Medineら2010）です。 PSCは自己再生し、成人で見つかったすべての体細胞型へ分化することが可能であり、それによって表しています分化した細胞の潜在的に無尽蔵の源。我々は、自動化と収量機能性ヒトHLCs（;フレッチャーら2008; Hannounら2010; Payne氏ら2011年とヘイら2011ヘイら2008）の影響を受けやすい、高効率、簡単な手続きを開発した。私たちは、私たちの技術が創薬、疾病のモデリング、体外装置の建設とおそらく細胞ベースの移植療法のためのHLCsのスケーラブルな生産につながると信じています。

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Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations

この記事では、ヒト胚性幹細胞集団からヒト肝内胚葉の発生に焦点を当てます。

ヒト胚性幹細胞集団から肝細胞様細胞の堅牢な生成

Despite progress in modelling human drug toxicity, many compounds fail during clinical trials due to unpredicted side effects. The cost of clinical ...

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47.7K ビュー.  University of Edinburgh. この記事では、ヒト胚性幹細胞集団からヒト肝内胚葉の発生に焦点を当てます。