本研究では、CIHRチームグラント＃82946のCTP、CIHR助成＃102741、MOP、ならびにカナダの椅子＃216684とストラウス財団によってサポートされていました。 ERは、カナダのハート＆ストローク財団からフェローシップによってサポートされていました。

一過性中大脳動脈閉塞（MCAO） 1。手術の手順（ 図1） 一過性中大脳動脈閉塞（tMCAO）が2日に行われる - 3ヶ月の雄のC57BL / 6マウス（22〜28グラム）まで。このプロトコルは、IRCM生命倫理委員会の動物のケアにより承認された。手術器具はオートクレーブ（60分、15 psiで121°C）で滅菌した。それぞれの動物の間に、彼らは熱いビーズ滅菌器（15秒）を使用して滅菌した。手術テーブルと他の機器を70％エタノールを用いて消毒されています。 手術2時間前に、マウスをブプレノルフィン（0.03 mg / kgでbwip）でanalgesizedた。 図1A。 <ol><li>深くイソフルラン5％のマウスをanaesthetizeその後イソフルラン2.5％で麻酔を維持している。マウスの体温は、加熱パッドを備えた手術中に一定に保たれる。 </li><li>毛皮やSKを消毒70％エタノールまたはベタジンとインチシェービングは、脳卒中病態に影響を与える可能性があり毛髪断片リリース、microabrasionsや炎症を生成するので、我々は、マウスの毛皮を剃っていません。 </li><li>正中頸部切開を加え、穏やかに軟組織を引き離す。 </li><li>ステレオ顕微鏡（STEMI 2000、ツァイス）の下では、鈍的切開、気管を露出し、頸動脈を見つけるために筋肉を撤回するために実行されます。 </li><li>左総頸動脈（CCA）を慎重に周囲の組織から解剖され、CCAは、一時的に20ミリメートルのセグメントに5から0絹縫合糸のカットを使用して、一時的な縫合（1）で閉塞されています。細心の注意が迷走神経を害しないよう注意が必要である。 </li><li>左内総頸動脈（ICA）と外部の総頸動脈（ECA）の分岐を分ける。永久的な縫合糸（2）のように遠位になるべく、ECAの周囲に配置されており、ややタイトな別の一時的な縫合（3）から遠位ECAの上に置かれる分岐。 </li><li>出血を避けるために逆作用ピンセットを使用して、左のICA（4）クリップ。細心の注意が迷走神経を害しないよう注意が必要である。 </li><li>永久的な（2）と一時的な（3）縫合糸の間にECA（5）に小さな穴を開けます。 </li></ol>図1B。 <ol start="9"><li> 、12ミリメートル、長さ6から0シリコン被覆（9-10mm程度被覆したシリコンです）ECA（6）にモノフィラメント縫合糸（Doccol株式会社）を導入し、完全に永久的な縫合糸の遠位にECAをカットし、ICAにオクルダーを反転。縫合糸は、しっかりと出血を防ぐためにモノフィラメントの周り縛られ、逆作用ピンセットは削除されます。 </li><li>オクルダーはウィリス動脈輪におけるMCAの起点を閉塞するために導入される。 ECAとCCAの分岐を越えて9〜10ミリメートルの周りにその挿入を停止します。オクルーダは遮断され、もはや移動することはできません。ケアは、翼口蓋動脈を貫通していない注意しなければなりません。 ECAの縫合（3）TIGですhtly位置にモノフィラメントを修正するために接続されています。 </li><li> autoclip創傷閉鎖システムで皮膚を閉じます。 </li><li>皮下に生理食塩水の1ミリリットルを注入し、すべての閉塞後期間（60分）の間、赤外線加熱ランプの下にマウスを置きます。 </li></ol> 2。中大脳動脈の血流の回復 reanesthesia前に、neuroscoreは、手術の成功を評価するためにチェックすることができます。 <ol><li>前述のようにマウスを麻酔し、オートクリップを取り外します。 </li><li>少しモノフィラメント撤退や血液灌流を可能にするためのECAに縫合（3）を開きます。 </li><li>永久に失血を防ぐために、ECAの一時的な縫合糸を結紮する。モノフィラメントは再使用のために保持されます。 </li><li>血液の循環を可能にするために、CCAへの一時的な縫合（1）を取り外します。 </li><li>傷口を閉じます。マウスは、皮下に別の1ミリリットル生理食塩水を受けるべきである。 </li><li> 1時間赤外線加熱ランプ下でマウスを置きます。動物は移動性を取り戻していることを確認した後、マウスをそのケージに戻され、72時間加熱パッドとタオルの下に残しました。ケージの半分だけがマウスは自分の環境を選択できるように加熱パッド上に配置されることに注意してください。手術後の体重減少は、一般的に観察されているので、マッシュポテト食べ物は食べ奨励するペトリ皿に置かれます。 十二時間後に手術、マウスは、ブプレノルフィン（0.03 mg / kgでbwip）の別の投与を受けた。 </li></ol> 3。偽手術偽の操作は、すべての手順がオクルーダーが挿入されていないことを除いて同一である。 4。 Neuroscore 神経障害は、単に再灌流後tMCAOの成功の評価を可能にし、後で傷害の重症度の推定。前述のように神経学的欠損は、5 &lt;を採点される/ sup&gt;の、1、24、48および72時間後に再灌流に出演。拡張された6点スケールは使用されています： <ul><li> 0：正常。 </li><li> 1：軽度の尾が拾うとき、または矛盾した回転せずに動作を旋回、対側に回転させるための&lt;50％の試み。 </li><li> 2：軽度の旋回、一貫性のある反対側に回転させるための&gt; 50％の試み。 </li><li> 3：強力な一貫性と旋回即時、マウスはその鼻がほぼその尾に達して、以上の1〜2秒の回転位置を保持しています。 </li><li> 4：バレルに進んで深刻な回転、反射を歩いたり、立ち直りの損失。 </li><li> 5：昏睡状態または瀕死。 </li></ul> 5。クレジルバイオレット染色（ 図2） PBS溶液灌流後、脳を素早くイソペンタン中で凍結されており、-80℃で保存C.マウスの脳はまた、計画された免疫組織化学の研究に応じて4％パラホルムアルデヒド（PFA）で灌流することができる。冠状脳切片（17μm）のクライオスタット·カットが実行されます。すべての30の1つのセクションのうち、代表的な脳損傷を持っているために、同じスライド上で収集されます。ボリュームの定量のために、2スライドはクレシルバイオレット染色によって染色されており、画像解析システム（サイオン社、フレデリック、メリーランド州）は病変を評価するために使用されていました。傷害ボリュームは任意の単位（ピクセル）で計算され、各セクションの反対側の非病変領域の割合として表した。他のスライドは、免疫組織化学的研究のために-80℃に保たれている。あるいは、PFA固定脳はビブラトームととしてHan ら （2009）6が推奨する測定梗塞体積を用いて30から50μmでカットすることができます。

<ol>
	<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn. J. Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Chan, P. H., Kamii, H., Yang, G., Gafni, J., Epstein, C. J., Carlson, E., Reola, L. B. r. a. i. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=infarction+is+not+reduced+in+SOD-1+transgenic+mice+after+a+permanent+focal+cerebral+ischemia.">infarction is not reduced in SOD-1 transgenic mice after a permanent focal cerebral ischemia.</a> Neuroreport. 5, 293-296 (1993).</li><li>Yang, G., Chan, P. H., Chen, J., Carlson, E., Chen, S. F., Weinstein, P., Epstein, C. J., Kamii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenic+mice+are+highly+resistant+to+reperfusion+injury+after+focal+cerebral+ischemia.">Human copper-zinc superoxide dismutase transgenic mice are highly resistant to reperfusion injury after focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 25, 165-170 (1994).</li><li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+stroke+model+guidelines+for+preclinical+stroke+trials+(1st+edition.">Rodent stroke model guidelines for preclinical stroke trials (1st edition.</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li><li>Jiang, S. X., Lertvorachon, J., Hou, S. T., Konishi, Y., Webster, J., Mealing, G., Brunette, E., Tauskela, J., Preston, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlortetracycline+and+demeclocycline+inhibit+calpains+and+protect+mouse+neurons+against+glutamate+toxicity+and+cerebral+ischemia.">Chlortetracycline and demeclocycline inhibit calpains and protect mouse neurons against glutamate toxicity and cerebral ischemia.</a> J. Biol. Chem. 280, 33811-33888 (2005).</li><li>Han, R. Q., Ouyang, Y. B., Xu, L., Agrawal, R., Patterson, A. J., Giffard, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postischemic+brain+injury+is+attenuated+in+mice+lacking+the+beta2-adrenergic+receptor.">Postischemic brain injury is attenuated in mice lacking the beta2-adrenergic receptor.</a> Anesth. Analg. 108, 280-287 (2009).</li><li>Rousselet, E., Marcinkiewicz, J., Kriz, J., Zhou, A., Hatten, M. E., Prat, A., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCSK9+reduces+the+protein+levels+of+the+LDL+receptor+in+mouse+brain+during+development+and+after+ischemic+stroke.">PCSK9 reduces the protein levels of the LDL receptor in mouse brain during development and after ischemic stroke.</a> J. Lipid Res. 52, 1383-1391 (2011).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1986).</li><li>Chen, Y., Ito, A., Takai, K., Saito, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+pterygopalatine+arterial+blood+flow+decreases+infarct+volume+variability+in+a+mouse+model+of+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion.">Blocking pterygopalatine arterial blood flow decreases infarct volume variability in a mouse model of intraluminal suture middle cerebral artery occlusion.</a> J. Neurosci. Methods. 174, 18-24 (2008).</li><li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970, 131-192 (2003).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li></ol>

著者らは、開示することは、競合する利害関係はありません。 この記事への生産とフリーアクセスがツァイス社が主催している

異なるストロークモデルは患者の脳卒中の影響を模倣するために開発されてきた。ストロークモデルの選択は、生物学的な問題に応じて異なります。腔内MCAOモデルは、患者における虚血性脳卒中の最も一般的なタイプのいずれかを模倣し、田村モデル4,7と比較して低侵襲、より一貫性があります。それは、神経保護、neurorepairと細胞死の解析のための本当に興味深いモデルです。腔内モデルの成功は、制御されなければならないような動物の性別、年齢、体重、体温、麻酔や手術の時のような多くの要因に依存します。オクルーダ（先端径、長さ、形状及びfexibility）の物理的な礼儀はMCAO 4の整合性を保つために重要です。ここで、我々はDoccolコーポレーション9〜10ミリメートル上にシリコンでコーティングされた12ミリメートル、長さ6から0モノフィラメントを使用しています。その長さはすべてのICAを覆ったので、このモノフィラメントの大きな利点は、くも膜下出血を減少させることであると長さは、ウィリスとPPAのサークルの前部と後部の通信動脈から来る残留血流が防止及び梗塞体積が減少する（我々の手の変動の15％）8の変動しています。 CCAの縫合も梗塞容積9の変動を減少させます。 tMCAO後の脳損傷の程度は様々な方法によって評価することができる。前述したように神経学的欠損を測定することができます。しかし、それはこのようにすることで、効率的な対策を持っていることは困難である。梗塞の範囲は、一般的にTTC染色によって実行されます。さらに最近では、磁気共鳴技術はまた、神経保護治療のために特に興味深い技術を使用しています。そのようなneurorepair、細胞死や細胞増殖、脳卒中に関与基礎細胞のメカニズムを理解するために、免疫組織化学によって異なるマーカーの研究は重要で非常に有益です。したがって、我々のprotoc脳切片標本のOLは、これらの分析を可能にするという大きな利点を持っており、使用したマウスの数を最小限に抑えます。また、Tureyen ら 10クレシルバイオレット染色とTTCとの間に良好な相関関係があることが報告されています。

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strong&gt;説明</strong</td&gt;<td<strong&gt;会社概要</strong</td&gt;<td<strong&gt;カタログ番号</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ステレオ顕微鏡</td&gt;<td&gt;ツァイス</td&gt;<td&gt; STEMI 2000</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ファイバーライト高輝度イルミ</td&gt;<td&gt;ドーラン - ジェナー工業株式会社</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdイソフルラン用&gt;麻酔システム</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;イソフルラン</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 108737</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;暖房ブランケット</td&gt;<td&gt; Gaymar Medsearch</td&gt;<td&gt; TP22G</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;赤外線加熱ランプ</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;超微細なピンセット、スタイル5</td&gt;<td&gt;電子顕微鏡学</td&gt;<td&gt; 78320-5TI</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vannasはさみ3ミリメートルのCutting Edge、ストレート</td&gt;<td&gt;電子顕微鏡学</td&gt;<td&gt; 72932から01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;スタイルLA-1およびMPF-1すべての滑らかなブレード</td&gt;<td&gt;電子顕微鏡学</td&gt;<td&gt; 77926-5S</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;ネガティブな作用ピンセット、スタイルKOPINC 5</td&gt;<td&gt;電子顕微鏡学</td&gt;<td&gt; 72850-F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdストレート&gt;解剖ハサミ5 1/2 &quot;</td&gt;<td&gt; Cedarlane</td&gt;<td&gt; 72960</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Autoclipスターターセット</td&gt;<td&gt;ハーバード装置</td&gt;<td&gt; 34から0557</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BD Autoclipは閉会ブローネを巻いた。、9mmの長い、100個</td&gt;<td&gt;フィッシャー</td&gt;<td&gt; 01-804-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 5から0縫合</td&gt;<td&gt;ハーバード装置</td&gt;<td&gt; 517763</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;縫合材料のPDS IIのモノフィラメントバイオレット、5-0、RB-1; Z303H</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 6167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 12ミリメートル、長さ6から0、シリコンコーティングされたモノフィラメント縫合糸</td&gt;<td&gt; Doccol株式会社</td&gt;<td&gt; 60SPRePK5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Seringes 1ミリリットル</td&gt;<td&gt;フィッシャー</td&gt;<td&gt; 14-823-2F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;針26G1 / 2</td&gt;<td&gt;フィッシャー</td&gt;<td&gt; BD-305111</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; C57BL / 6</em&gt;マウス</td&gt;<td&gt; IRCM</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</table

mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining

脳卒中は死亡率と世界の障害の主要な原因の3番目の原因である。すべてのストロークの約80％、虚血性脳卒中を占めています。しかし、血栓溶解組織プラスミノーゲンアクチベーター（tPA）が存在する急性虚血性脳卒中の唯一の治療法です。これは、研究者は、様々な種のいくつかの虚血性脳梗塞モデルを開発するために導いた。齧歯類モデルの2つの主要なタイプが開発されている：全脳虚血または限局性脳虚血のモデル。患者における虚血性脳卒中を模倣するために、誰に約80％の血栓または塞栓性脳卒中が中大脳動脈（MCA）の領土で発生し、管腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルでは、脳卒中の研究に大いに関係があります。このモデルは第一小泉らがラットで開発された、1986年1インチそのため、マウスにおける遺伝子操作のしやすさのために、これらのモデルは、この種の2-3に開発されてきた。 このような先端径、長さ、形状、柔軟性などオクルダーの物性は梗塞容積4の再現のために重要であることをコンテンツ&quot;&gt;ここで、我々はC57/BL6マウスにおける過渡MCA閉塞手順を紹介します。これまでの研究で報告されています。ここで、商用シリコンコーティングされたモノフィラメント（Doccolコーポレーション）が使用されている。もう一つの大きな利点は、このモノフィラメントは、くも膜下出血を誘発する危険性を減少させるということです。ツァイスステレオ顕微鏡STEMI 2000を使用し、シリコンコーティングされたモノフィラメントは内頚動脈に導入されました（ICA）を外頸動脈（ECA）のカット経由モノフィラメントは、MCAのベースを閉塞するまで血流は血栓塞栓症における血栓の溶解後の血流の回復を模倣するためにモノフィラメントを除去して1時間後に復元されました人間。脳梗塞の範囲は、神経学的スコアにより、梗塞体積の測定によって最初に評価することができる。虚血マウスは、このように異なる後再灌流時々彼らの神経学的スコアを分析した。 2,3,5 - トリフェニルテトラゾリウムクロライド（TTC）で染色し、梗塞体積を評価するために通常行われた。それは免疫組織化学によって多くの重要なマーカーをテストする機会を提供していますのでここで、我々はクレシルバイオレット染色を使用していました。このビデオでは、MCAO手順を報告し、神経学的スコアとクレシルバイオレット染色による梗塞体積の評価。

neuroscore評価がtMCAO脳卒中後の成功を確認しtMCAO後再灌流の効率を決定する。我々の手では、すべてのマウスは、少なくとも軽度の一貫カーリング（neuroscore 2）、神経障害、最大72時間まで、一般的に安定している提示腔内手続きを行った。ほとんどのマウスは、軽度の一貫カーリング（neuroscore 2）を示す。カーリングの不在を示すマウスは研究から除外されます。しかし、neuroscoreの評価は、私たちは負傷した海馬とそのまま海馬とのそれらを持つマウスを区別することはできません。 死亡例は、くも膜下出血が発生しなかったことを示唆し、手術日の間に観察されなかった。くも膜下出血は、マウスで同定されている場合、このいずれかを系統的に分析から除外されます。自宅に準備モノフィラメントよりスムーズですDoccol株式会社からシリコンコーティングされたモノフィラメントの使用はの成功を増加させるtMCAOとくも膜下出血を減らすことができます。 24時間と72時間の間での死亡率は、一般的に咬合の60分間報告したように、このモデルでは14％です。観察された死亡率は、おそらくこのマウス系統の大梗塞体積が原因です。強い病変の再現性もその効果（s）は、モデルのばらつきによって隠される可能性が神経保護分子を勉強することは非常に興味深いものである（標準偏差が15％）が観察されている。 tMCAO後の脳損傷の程度を評価するために、我々は、関連するマーカー6をテストするための材料の多くを持っているために、むしろTTCよりクレシルバイオレット染色（ 図2）を使用することにしました。病変の程度は比較的一貫している。しかし、我々はいくつかのマウスでは、海馬が（マウスの約30％）負傷したことに気づいた。これは、クレシルバイオレット染色は後1週間まで適用可能であることは興味深いことです。文献では、脳梗塞の割合が1から変化お互いに勉強しています。それは、マウス系統、麻酔、脳切片の厚さ、使用モノフィラメント、または6、7を使用し染色の選択に依存します。 <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1.jpg" alt="図1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1highres.jpg" /> 図1。シリコン被覆管腔内モノフィラメントを用いて中大脳動脈の閉塞のスキーム。マウス脳とシリコンコーティングされたモノフィラメントの導入を準備するために連続した縫合糸およびクリップを示す脳動脈の簡略化した方式を採用しています。B.は、ウィリス動脈輪を介してモノフィラメントの位置が表されます。ますが、BA、脳底動脈、、CCA、総頸動脈、C.ウィリス、ウィリスのサークル、モノフィラメントは、MCA、ACA、前大脳動脈の根元を閉塞するECA を介してのICAに導入され、ECA、外頸動脈アルテRY、ICA、内頚動脈、MCA、中大脳動脈、PCAは、後交通動脈、PPAは、翼口蓋動脈。 <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig2.jpg" alt="図2" /> 図2。 72時間後の再灌流後クレシルバイオレットで染色したマウスの脳の代表的な冠状断面。梗塞領域（主に線条体、皮質と隣接する脳領域）（クレシルバイオレットで染色さ）白で表示されます。傷害ボリューム（白い部分、右半球）が区切りだったと反対側の非病変領域（左半球）の割合として表される。

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Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

マウスにおける腔内中大脳閉塞モデルは、本明細書に提示されます。脳梗塞の程度は、神経学的スコアとクレジルバイオレット染色は、TTCに代わる染色、並列多くの関心マーカーでテストする大きな利点を提供することによって評価されます。

腔内MCAOのマウスモデル：クレシルバイオレット染色による脳梗塞の評価

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

mouse-model-intraluminal-mcao-cerebral-infarct-evaluation-cresyl

Research

JoVE Journal

Medicine

62.8K ビュー.  Clinical Research Institute of Montreal. マウスにおける腔内中大脳閉塞モデルは、本明細書に提示されます。脳梗塞の程度は、神経学的スコアとクレジルバイオレット染色は、TTCに代わる染色、並列多くの関心マーカーでテストする大きな利点を提供することによって評価されます。

ビデオ: Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

中大脳動脈閉塞のマウスモデル

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

医学

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

マウスにおけるレーザードップラー流量計の指針と虚血性脳卒中に対する腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデル

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

腔内中大脳動脈閉塞のラット脳卒中モデルにおける脳血流モニタリングのための最適化されたシステム

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO）

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated death 1. Common sites of metastatic spread include lung, lymph node, brain, and bone 2. Mechanisms that drive metastasis are intense areas of cancer research. Consequently, effective assays to measure metastatic burden in distant sites of metastasis are instrumental for cancer research. Evaluation of lung metastases in mammary tumor models is generally performed by gross qualitative observation of lung tissue following dissection. Quantitative methods of evaluating metastasis are currently limited to ex vivo and in vivo imaging based techniques that require user defined parameters. Many of these techniques are at the whole organism level rather than the cellular level 3-6. Although newer imaging methods utilizing multi-photon microscopy are able to evaluate metastasis at the cellular level 7, these highly elegant procedures are more suited to evaluating mechanisms of dissemination rather than quantitative assessment of metastatic burden. Here, a simple in vitro method to quantitatively assess metastasis is presented. Using quantitative Real-time PCR (QRT-PCR), tumor cell specific mRNA can be detected within the mouse lung tissue.

This protocol describes how to use quantitative Real-time PCR (QRT-PCR) to detect tumor cell specific mRNA representing metastasis within the mouse lung tissue.

定量的リアルタイムPCRによるマウス乳腺腫瘍モデルにおける肺転移の評価

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, standardized battery of neonatal mouse motor tests. These tests can validate injury or disease models, determine treatment efficacy and/or assess motor behaviors in new transgenic strains. This paper presents a series of neonatal motor tests to evaluate general motor function, including ambulation, hindlimb foot angle, surface righting, negative geotaxis, front- and hindlimb suspension, grasping reflex, four limb grip strength and cliff aversion. Mice between the ages of post-natal day 2 to 14 can be used. In addition, these tests can be used for a wide range of neurological and neuromuscular pathologies, including cerebral palsy, hypoxic-ischemic encephalopathy, traumatic brain injury, spinal cord injury, neurodegenerative diseases, and neuromuscular disorders. These tests can also be used to determine the effects of pharmacological agents, as well as other types of therapeutic interventions. In this paper, motor deficits were evaluated in a novel neonatal mouse model of cerebral palsy that combines hypoxia, ischemia and inflammation. Forty-eight hours after injury, five tests out of the nine showed significant motor deficits: ambulation, hindlimb angle, hindlimb suspension, four limb grip strength, and grasping reflex. These tests revealed weakness in the hindlimbs, as well as fine motor skills such as grasping, which are similar to the motor deficits seen in human cerebral palsy patients.

Presented is a concise battery of mouse neonatal motor tests. Using these tests, neonatal motor deficits can be demonstrated in a variety of neonatal motor disorders. By having a standardized set of tests, results from different studies can be compared, allowing for better and accurate reporting between groups.

脳性麻痺の新生児マウスモデルにおける運動テストのバッテリー

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The simple murine AVF model was combined with intraluminal administration of drug solution to the venous endothelium at the same time as fistula creation. Technical aspects of this model are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The infra-renal aorta and IVC are dissected for clamping. After proximal and distal clamping, the puncture site is exposed and a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta and into the IVC. Immediately after the puncture, a reporter gene-expressing viral vector was infused in the IVC via the same needle, followed by 15 min of incubation. The intraluminal administration method enabled more robust viral gene delivery to the venous endothelium compared to administration by the external route. This novel method of delivery will facilitate studies that explore the role of the endothelium in AVF maturation and enable intraluminal drug delivery at the time of surgical operation.

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

マウスの動静脈瘻内皮への管腔内薬物送達

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have been established by tamoxifen induced deletion of Ccm genes in postnatal animals. These mouse models provide invaluable tools to investigate molecular mechanism and therapeutic approaches for CCM disease. An accurate and quantitative method to assess lesion burden and progression is essential to harness the full value of these animal models. Here, we demonstrate the induction of CCM disease in a mouse model and the use of the contrast enhanced X-ray micro computed tomography (micro-CT) method to measure CCM lesion burden in mouse brains. At postnatal day 1 (P1), we used 4-hydroxytamoxifen (4HT) to activate Cre recombinase activity from the Cdh5-CreErt2 transgene to cleave the floxed allele of Ccm2. CCM lesions in mouse brains were analyzed at P8. For micro-CT, iodine based Lugol&#39;s solution was used to enhance contrast in brain tissue. We have optimized the scan parameters and utilized a voxel dimension of 9.5 &#181;m, which lead to a minimum feature size of approximately 25 &#181;m. This resolution is sufficient to measure CCM lesion volume and number globally and accurately, and provide high-quality 3-D mapping of CCM lesions in mouse brains. This method enhances the value of the established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for CCM and other cerebrovascular diseases.

This protocol demonstrates the induction of cerebral cavernous malformation disease in a mouse model and uses contrast enhanced micro computed tomography to measure lesion burden. This method enhances the value of established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for cerebral cavernous malformation and other cerebrovascular diseases.

誘導およびマウス モデルにおける脳海綿静脈奇形のマイクロ CT イメージング

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...