מחקר זה נתמך על ידי צוות CIHR מענק # 82946 CTP, CIHR מענק # 102741 MOP, כמו גם # 216684 ושטראוס קרן כיסא קנדה. חדר המיון היה נתמך על ידי מלגה מהלב ושבץ הקרן הקנדי.

חסימת עורק מוחית חולפת תיכונה (MCAO) 1. הליך ניתוח (איור 1) חסימת עורק מוח אמצעית חלוף (tMCAO) מתבצעת ב 2 - לC57Bl גבר בן 3-חודש / 6 עכברים (22-28g). פרוטוקול זה אושר על ידי הטיפול בבעלי חי IRCM אתיקת הוועדה. כלים כירורגיים עוקרו על ידי מעוקר (121 מעלות צלזיוס ב 15 psi במשך 60 דקות). בין כל בעלי חיים, הם מעוקרים באמצעות חרוז המעקר החם (15 שניות). שולחן ניתוחים וציוד אחר המחוטאים באמצעות אתנול 70%. שעות לפני הניתוח, עכברי analgesized עם עצירות (0.03 וויפ מ&quot;ג / ק&quot;ג). איור 1 א &#39;. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עמוק לטשטש את העכברים עם 5% isoflurane ולאחר מכן לשמור בהרדמת 2.5% isoflurane. טמפרטורת גוף של העכברים נשמרה קבועה במהלך ניתוח עם כרית חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את הפרווה וskעם אתנול 70% או פולידין. מאז שחרורו מייצר גילוח שיער בר, microabrasions ודלקת שעשוי להשפיע על הפתופיזיולוגיה שבץ, אנחנו לא לגלח פרוות עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו אמצע צוואר ובעדינות לפרק את הרקמות הרכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ סטריאו (STEMI 2000, Zeiss), לנתיחה בוטה מבוצעת כדי לחשוף את קנה הנשימה וחוזר בי את השרירים כדי לאתר את העורק הראשי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עורק התרדמה המשותף השמאל (CCA) הוא גזור בקפידה מרקמות והמרכז לאמנות העכשווית היא באופן זמני על ידי occluded תפר זמני (1) באמצעות קיצוץ תפר משי 5-0 ל20 מגזרי מ&quot;מ. זהירות רבה צריכה להיות למימוש שלא לפגוע בעצב vagal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד הסתעפות של עורק התרדמה המשותף השמאל הפנימי (רשפ&quot;ת) ועורק תרדמה משותף חיצוני (ECA). תפר קבוע (2) ממוקם סביב ECA, כdistally ככל האפשר, ועוד פס דק מעט זמני (3) דגש על ECA דיסטלי כדיהסתעפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפ ICA השמאלי (4) שימוש בפינצטה הפוכה פעולה, כדי למנוע דימום. זהירות רבה צריכה להיות למימוש שלא לפגוע בעצב vagal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך חור קטן לתוך ECA (5) בין (3) תפרים קבועים (2) וזמניים. </li></ol> איור 1 ב. <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג מ&quot;מ באורך 6-0 12 סיליקון מצופה (כ 9-10mm הוא סיליקון המצופה) תפר monofilament (Doccol תאגיד) לECA (6), לחתוך ECA דיסטלי לתפר התמידי לגמרי ולהפוך occluder לרשפ&quot;ת . התפר נקשר בחוזקה סביב monofilament כדי למנוע דימום ופינצטה הפוכת הפעולה יוסרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Occluder הוא הציג לסגור מוצא של MCA במעגל של ויליס. עצור החדרתה סביב 9-10 מ&quot;מ מעבר להסתעפות של ECA ומרכז לאמנות עכשווית. Occluder חסום ולא יכול לזוז יותר. טיפול חייב להיות מופעל לא לחדור עורק pterygopalatine. התפר (3) על ECA הוא tigקשר htly לתקן monofilament בעמדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את העור עם מערכת סגירת פצע autoclip. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזריק 1 מ&quot;ל של תמיסת מלח תת העור ולמקם את העכברים תחת מנורת חימום אינפרא אדום במשך כל התקופה שאחרי החסימה (60 דקות). </li></ol> 2. שחזור זרימת דם עורקי מוח האמצעית לפני reanesthesia, neuroscore ניתן לבדוק כדי להעריך את ההצלחה של הניתוח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדם את העכברים שתוארו כעבר ולהסיר את autoclips. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קצת לפתוח את התפר (3) על ECA כדי לאפשר נסיגת monofilament וreperfusion דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצמיתות לקשור את התפר הזמני על ECA כדי למנוע איבוד דם. Monofilament נשמר לשימוש חוזר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את התפר הזמני (1) על המרכז לאמנות העכשווית כדי לאפשר סחרור דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגור את הפצע. העכברים צריכים לקבל פתרון אחר 1 מ&quot;ל מי מלח תת עורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכברים מתחת למנורת חימום אינפרא האדום לשעה 1. אחרי שווידאתי שהחיה חוזרת לניידות, העכבר חזר לכלוב שלו והשאיר תחת כרית החימום ומגבות ל72 שעות. שים לב שרק מחצית מהכלוב מונחת על כרית החימום כדי לאפשר לעכברים כדי לבחור את סביבתם. בגלל ירידה במשקל לאחר הניתוח נצפית בדרך כלל, אוכל פירה מונח בצלחת פטרי כדי לעודד אכילה. שתים עשר שעות לאחר הניתוח, עכברים קבלו מנה נוספת של עצירות (0.03 וויפ מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li></ol> 3. מבצע שאם לפעולות דמה, כל הנהלים זהים, הפרט שoccluder לא הוכנס. 4. Neuroscore גירעונות נוירולוגיות לאפשר הערכה של ההצלחה של tMCAO רק לאחר reperfusion ומאוחר יותר להערכת מידת החומרה של פציעה. גירעונות נוירולוגיות מקבלים נקודות כפי שתואר קודם לכן 5 &lt;/ Sup&gt; והופיע ב1, 24, 48 ושעות לאחר reperfusion 72. היקף מורחב שש נקודות משמש: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0: נורמלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1: קל מקיף התנהגות עם או בלי סיבוב עקבי כאשר לקח בזנב, ניסיונות &lt;50% כדי לסובב לצד הנגדי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2: קל עקבי חג, 50%&gt; ניסיונות כדי לסובב לצד הנגדי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3: בקנה אחד חזק ומקיף מיידיים, העכבר מחזיק בעמדת רוטציה במשך יותר מ 1-2 שניות, עם האף כמעט להגיע בזנבו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4: סיבוב חמור המתקדם למתגלגל, אובדן הליכה או ליישר רפלקס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5: תרדמת או גוסס. </li></ul> 5. הכתמים סגולים Cresyl (איור 2) בעקבות זלוף הפתרון PBS, המוח מוקפא במהירות בisopentane ואוחסן ב -80 °מוחה ג עכבר ניתן גם perfused עם paraformaldehyde 4% (PFA) בהתאם למחקרי אימונוהיסטוכימיה המתוכננים. Cryostat חיתוך של חלקי מוח עטרה (17 מיקרומטר) מבוצע. סעיף אחד מתוך כל 30 נאסף על אותה השקופית שיש פגיעה מוחית נציג. לכימות נפח, 2 שקופיות מוכתמות מהכתמה סגולה cresyl ומערכת ניתוח תמונה (Scion תאגיד, פרדריק, מרילנד) שמש כדי להעריך את הנגע. היקף הפגיעה היה מחושב ביחידות שרירותיות (פיקסלים), ומבוטא באחוזים מהשטח הלא lesioned הנגדי עבור כל מקטע. שקופיות אחרות נשמרות ב-80 ° C ללימודי אימונוהיסטוכימיה. לחלופין, מוח PFA קבוע ניתן לחתוך ב30-50 מיקרומטר באמצעות vibratome ונפח האוטם נמדד כמומלץ על ידי האן et al. (2009) 6.

<ol>
	<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn. J. Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Chan, P. H., Kamii, H., Yang, G., Gafni, J., Epstein, C. J., Carlson, E., Reola, L. B. r. a. i. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=infarction+is+not+reduced+in+SOD-1+transgenic+mice+after+a+permanent+focal+cerebral+ischemia.">infarction is not reduced in SOD-1 transgenic mice after a permanent focal cerebral ischemia.</a> Neuroreport. 5, 293-296 (1993).</li><li>Yang, G., Chan, P. H., Chen, J., Carlson, E., Chen, S. F., Weinstein, P., Epstein, C. J., Kamii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenic+mice+are+highly+resistant+to+reperfusion+injury+after+focal+cerebral+ischemia.">Human copper-zinc superoxide dismutase transgenic mice are highly resistant to reperfusion injury after focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 25, 165-170 (1994).</li><li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+stroke+model+guidelines+for+preclinical+stroke+trials+(1st+edition.">Rodent stroke model guidelines for preclinical stroke trials (1st edition.</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li><li>Jiang, S. X., Lertvorachon, J., Hou, S. T., Konishi, Y., Webster, J., Mealing, G., Brunette, E., Tauskela, J., Preston, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlortetracycline+and+demeclocycline+inhibit+calpains+and+protect+mouse+neurons+against+glutamate+toxicity+and+cerebral+ischemia.">Chlortetracycline and demeclocycline inhibit calpains and protect mouse neurons against glutamate toxicity and cerebral ischemia.</a> J. Biol. Chem. 280, 33811-33888 (2005).</li><li>Han, R. Q., Ouyang, Y. B., Xu, L., Agrawal, R., Patterson, A. J., Giffard, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postischemic+brain+injury+is+attenuated+in+mice+lacking+the+beta2-adrenergic+receptor.">Postischemic brain injury is attenuated in mice lacking the beta2-adrenergic receptor.</a> Anesth. Analg. 108, 280-287 (2009).</li><li>Rousselet, E., Marcinkiewicz, J., Kriz, J., Zhou, A., Hatten, M. E., Prat, A., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCSK9+reduces+the+protein+levels+of+the+LDL+receptor+in+mouse+brain+during+development+and+after+ischemic+stroke.">PCSK9 reduces the protein levels of the LDL receptor in mouse brain during development and after ischemic stroke.</a> J. Lipid Res. 52, 1383-1391 (2011).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1986).</li><li>Chen, Y., Ito, A., Takai, K., Saito, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+pterygopalatine+arterial+blood+flow+decreases+infarct+volume+variability+in+a+mouse+model+of+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion.">Blocking pterygopalatine arterial blood flow decreases infarct volume variability in a mouse model of intraluminal suture middle cerebral artery occlusion.</a> J. Neurosci. Methods. 174, 18-24 (2008).</li><li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970, 131-192 (2003).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li></ol>

המחברים אין אינטרסים מנוגדים לגילוי. הייצור והגישה חופשיה למאמר זה הוא בחסות Zeiss, Inc

מודלי שבץ שונים פותחו כדי לחקות השלכות שבץ בחולים. הבחירה במודל השבץ תלוי בשאלות הביולוגיות. מודל MCAO intraluminal מחק אחד מהסוגים הנפוצים ביותר של שבץ איסכמי בחולים והוא פחות פולשני ויותר עקבי מאשר מודל טאמורה 4,7. זהו מודל מעניין באמת עבור ניתוחי מות neuroprotection, neurorepair ותא. הצלחתו של מודל intraluminal תלוי בגורמים רבים כמו מין חיה, גיל ומשקל, טמפרטורה, הרדמה וזמן הניתוח, אשר צריכים להיות בשליטה. לחזות הפיסית של occluder (טיפ קוטר, אורך, צורה וfexibility) היא קריטית לעקביות של MCAO 4. בזאת, אנו משתמשים 6-0 12 monofilament מ&quot;מ הארוך מצופה בסיליקון על 9-10 מ&quot;מ מחברת Doccol. היתרון הגדול של monofilament זה הוא להפחית דימום subarachnoid ובגלל אורכו כיסה את כל ICAאורך זרימה, שיורי דם, אשר מגיעה מעורקי התקשורת של הקדמיים ואחוריים של המעגל של ויליס וPPA, נמנעת וההשתנות בירידות נפח האוטם (15% מהשתנות בידות שלנו) 8. התפר של מרכז לאמנות עכשווית גם מקטין את השונות של נפח האוטם 9. היקף פגיעה המוחית tMCAO הבא יכול להיות מוערך על ידי דרכים שונות. גירעונות נוירולוגיות ניתן למדוד כאמור לעיל. עם זאת, קשה לי אמצעי יעיל בדרך זו. ההיקף האוטם מבוצע בדרך כלל על ידי מכתים TTC. לאחרונה, טכניקות תהודה מגנטיות משמשות גם, טכנולוגיה מעניינת במיוחד עבור טיפולי neuroprotective. כדי להבין את המנגנונים התאיים הבסיסיים המעורבים בשבץ כגון neurorepair, מוות של תאים או התפשטות תאים, המחקר של סמנים שונים על ידי אימונוהיסטוכימיה הוא קריטי ומאוד אינפורמטיבי. לפיכך, protocol הכנות סעיף במוח יש את היתרון הגדול של ניתוחים אלו מאפשרים, ומצמצם את מספר העכברים בשימוש. יתר על כן, Tureyen et al. 10 דיווח כי קיימת קורלציה טובה בין הכתמים סגולים cresyl וTTC.

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; תיאור</strong</td&gt;<td<strong&gt; חברה</strong</td&gt;<td<strong&gt; מספר קטלוג</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; מיקרוסקופ סטריאו</td&gt;<td&gt; Zeiss</td&gt;<td&gt; STEMI 2000</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; פנס עצמה גבוה סיבי אור</td&gt;<td&gt; דולן-ג&#39;נר תעשיות בע&quot;מ</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; מערכת הרדמה לisoflurane</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isoflurane</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 108737</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; שמיכת חימום</td&gt;<td&gt; Gaymar Medsearch</td&gt;<td&gt; TP22G</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; מנורת חימום אינפרא אדומה</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Ultra פינצטה בסדר, סגנון 5</td&gt;<td&gt; מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים</td&gt;<td&gt; 78320-5TI</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; מספרי Vannas 3 קרח דק מ&quot;מ, סטרייט</td&gt;<td&gt; מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים</td&gt;<td&gt; 72932-01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; אורח LA-1 וMPF-1 כל הלהבים החלקים</td&gt;<td&gt; מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים</td&gt;<td&gt; 77926-5S</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; פינצטה פעולה שלילית, בסגנון 5 KOPINC</td&gt;<td&gt; מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים</td&gt;<td&gt; 72850-F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; ביתור מספריים 5 1/2 &quot;סטרייט</td&gt;<td&gt; Cedarlane</td&gt;<td&gt; 72960</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Autoclip המתנע סט</td&gt;<td&gt; הרווארד מנגנון</td&gt;<td&gt; 34-0557</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BD Autoclip פצע Syst סגירה., 9 מ&quot;מ ארוך, 100/pk</td&gt;<td&gt; פישר</td&gt;<td&gt; 01-804-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 5-0 תפר</td&gt;<td&gt; הרווארד מנגנון</td&gt;<td&gt; 517763</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; תפר חומרי PDS השני monofilament סגול, 5-0, RB-1; Z303H</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 6167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 12 6-0 תפר monofilament סיליקון מצופה מ&quot;מ ארוך</td&gt;<td&gt; Doccol תאגיד</td&gt;<td&gt; 60SPRePK5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Seringes 1ml</td&gt;<td&gt; פישר</td&gt;<td&gt; 14-823-2F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; מחטי 26G1 / 2</td&gt;<td&gt; פישר</td&gt;<td&gt; BD-305111</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; C57BL / 6</em&gt; עכברים</td&gt;<td&gt; IRCM</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</table

mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining

שבץ הוא הגורם השלישי לתמותה והסיבה המובילה למוגבלות בעולם. חשבונות שבץ איסכמי מהווה כ 80% מכל מקרי השבץ. עם זאת, thrombolytic רקמת plasminogen activator (tPA) הוא הטיפול היחיד של שבץ איסכמי חריף שקיים. חוקרים בהראשות זו כדי לפתח מספר דגמי שבץ איסכמי במגוון מינים. שני סוגים עיקריים של מכרסמים פותחו: מודלים של איסכמיה המוחית הגלובלית או איסכמיה מוחית מוקדים. לחקות שבץ איסכמי בחולים, בכ 80% משיחות טרומבוטיים או תסחיפים מתרחשים בטריטוריה של עורק המוח האמצעי (MCA), חסימת עורק המוח האמצעית intraluminal (MCAO) מודל הוא די רלוונטי ללימודי שבץ. מודל זה פותח לראשונה בחולדות על ידי קואיזומי et al. בשנת 1986 1. בגלל הקלות של מניפולציה גנטית בעכברים, דגמים אלה גם פותחו ב2-3 מין זה. תוכן &quot;&gt; בזאת, אנו מציגים את הליך חסימת MCA החולף בC57/Bl6 עכברים. מחקרים קודמים דיווחו כי תכונות פיסיקליות של occluder כגון קוטר קצה, אורך, צורה וגמישות הן קריטיות לשחזור של נפח אוטם 4. בזאת, בmonofilaments מצופי הסיליקון מסחרי (Doccol תאגיד) היה בשימוש. יתרון גדול נוסף הוא שmonofilament זה מקטין את הסיכון לדימומים לגרום subarachnoid. שימוש במיקרוסקופ סטריאו-STEMI צייס 2000, monofilament המצופה סיליקון הוכנס עורק התרדמה הפנימי (רשפ&quot;ת) דרך חתך בעורק הראשי החיצוני (ECA) עד monofilament חוסם את הבסיס של MCA. זרימת דם שוחזרה 1 שעה מאוחר יותר על ידי הסרת monofilament לחקות השבת זרימת דם לאחר תמוגה של קריש בתרומבואמבוליים בני אדם. המידה של אוטם מוחי יכולה להיות מוערכת על ידי 1 ציון נוירולוגים ועל ידי המדידה של נפח האוטם.עכברי איסכמי נותחו ובכך לציון הנוירולוגים שלהם בזמנים שונים לאחר reperfusion. על מנת להעריך את נפח האוטם, מכתים עם כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium (TTC) היה מבוצע בדרך כלל. בזאת, אנו משמשים מכתימים סגולים cresyl כן הוא מציע את ההזדמנות כדי לבדוק סמנים קריטיים רבים על ידי אימונוהיסטוכימיה. בסרטון הזה, אנו מדווחים על הליך MCAO; עשרות נוירולוגיות וההערכה של נפח האוטם ידי צביעה סגולה cresyl.

הערכת neuroscore מאשרת את ההצלחה של tMCAO לאחר השבץ וקובעת את היעילות של הפוסט reperfusion tMCAO. בידות שלנו, כל העכברים נתונים להליך intraluminal הציג לפחות מסתלסל קל עקבי (neuroscore 2) ואת גירעונות הנוירולוגיות הם עד 72 שעות בדרך כלל יציבים. רוב עכברי תערוכה מסתלסלים עקבי קל (neuroscore 2). עכברים מראים היעדר מסתלסל הם הוצאו מהמחקר. עם זאת, הערכת neuroscore אינה מאפשרת לנו להבחין בין עכברים עם ההיפוקמפוס פצוע ואלה עם ההיפוקמפוס ללא פגע. אין תמותה נצפתה במהלך יום הניתוח, טוענת כי דימומי subarachnoid לא התרחשו. כאשר הדימום תת עכבישים מזוהה בעכבר, זה לא נכלל באופן שיטתי מהניתוח. השימוש בחוט הניילון סיליקון מצופה מDoccol תאגיד, שהוא חלק יותר monofilaments הביתי מוכן, מגביר את ההצלחהtMCAO ומפחית את דימום subarachnoid. תמותה בין 24 שעות ועד 72 שעות היא 14% במודל זה, כפי שדווח באופן כללי ל60 דקות של חסימה. התמותה נצפתה היא כנראה בשל נפח אוטם גדול בעכבר זן זה. שחזור נגע חזק גם נצפה (סטיית תקן היא 15%), וזה מאוד מעניין ללמוד מולקולות neuroprotection בי ההשפעה שלהם (הים) יכולה להיות מוסתרת על ידי ההשתנות של המודל. כדי להעריך את מידת פגיעה מוחית בעקבות tMCAO, אנחנו בחרנו להשתמש מכתימים סגולים cresyl (איור 2) ולא TTC על מנת שיהיה הרבה חומרים לבדיקת סמנים רלוונטיים 6. היקף הפגיעה הוא יחסית עקבי. עם זאת, הבחין כי בעכברים מסוימים, ההיפוקמפוס נפצע (סביב 30% מעכברים). זה מעניין לציין כי הכתמים הסגולים cresyl יכולים להיות מיושם עד 1 שבוע מאוחר יותר. בספרות, שיעור האוטם מוחי משתנה מאחדללמוד לצד השני. זה תלוי בבחירה של עכבר זן, הרדמה, בעובי של חלקי מוח, חוט הניילון בשימוש, או בשימוש מכתים 6, 7. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1.jpg" alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1highres.jpg" /> איור 1. ערכה של החסימה של עורק המוח האמצעי באמצעות monofilament intraluminal סיליקון מצופה. ערכה. פשוט של מוח עכבר ועורקי המוח מראים תפרים וקליפ רצופים כדי להכין את ההקדמה של monofilament סיליקון המצופה. B. עמדת monofilament באמצעות המעגל של ויליס מיוצגת. Monofilament מוחדר דרך ICA ECA כדי לחסום את הבסיס של MCA ACA, עורק המוח קדמי;. התואר ראשון, basilar עורק; מרכז לאמנות עכשווית, עורק תרדמה משותף; ג ויליס, מעגל של ויליס; ECA, החיצוני התרדמה arteר&quot;י; יק&quot;א, עורק התרדמה הפנימית; MCA, עורק המוח האמצעי; PCA, עורק תקשורת אחורי; PPA, עורק pterygopalatine. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. סעיפי עטרה יציגים של מוח עכבר המוכתם בסגול cresyl אחרי 72 שעות שלאחר reperfusion. אזור אוטם (בעיקר סטריאטום, קליפה ואזורי מוח סמוכים) מופיעים בלבן (בתוליים ידי סגול cresyl). נפח הפציעה (חלק לבן, אונה ימנית) היה מופרד ומבוטא כאחוז מהשטח הנגדי אינו lesioned (אונה שמאלית).

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining at JoVE.com

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

מודל intraluminal המוח האמצעי, החסימה בעכברים מוצג במסמך זה. ההיקף אוטם מוחית מחושב על ידי ציון נוירולוגים וכתמים סגולים cresyl, מכתים חלופה לTTC, להציע את היתרון הגדול לבדיקה בסמני ריבית רבים במקביל.

מודל עכבר של MCAO intraluminal: הערכת אוטם מוחית על ידי כתמים סגולים Cresyl

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

mouse-model-intraluminal-mcao-cerebral-infarct-evaluation-cresyl

Research

JoVE Journal

Medicine

62.9K Views.  Clinical Research Institute of Montreal. מודל intraluminal המוח האמצעי, החסימה בעכברים מוצג במסמך זה. ההיקף אוטם מוחית מחושב על ידי ציון נוירולוגים וכתמים סגולים cresyl, מכתים חלופה לTTC, להציע את היתרון הגדול לבדיקה בסמני ריבית רבים במקביל.

Video: Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated death 1. Common sites of metastatic spread include lung, lymph node, brain, and bone 2. Mechanisms that drive metastasis are intense areas of cancer research. Consequently, effective assays to measure metastatic burden in distant sites of metastasis are instrumental for cancer research. Evaluation of lung metastases in mammary tumor models is generally performed by gross qualitative observation of lung tissue following dissection. Quantitative methods of evaluating metastasis are currently limited to ex vivo and in vivo imaging based techniques that require user defined parameters. Many of these techniques are at the whole organism level rather than the cellular level 3-6. Although newer imaging methods utilizing multi-photon microscopy are able to evaluate metastasis at the cellular level 7, these highly elegant procedures are more suited to evaluating mechanisms of dissemination rather than quantitative assessment of metastatic burden. Here, a simple in vitro method to quantitatively assess metastasis is presented. Using quantitative Real-time PCR (QRT-PCR), tumor cell specific mRNA can be detected within the mouse lung tissue.

This protocol describes how to use quantitative Real-time PCR (QRT-PCR) to detect tumor cell specific mRNA representing metastasis within the mouse lung tissue.

הערכה של ריאות גרורה במודלי גידול עכבר החלב על ידי בזמן אמת כמותי PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, standardized battery of neonatal mouse motor tests. These tests can validate injury or disease models, determine treatment efficacy and/or assess motor behaviors in new transgenic strains. This paper presents a series of neonatal motor tests to evaluate general motor function, including ambulation, hindlimb foot angle, surface righting, negative geotaxis, front- and hindlimb suspension, grasping reflex, four limb grip strength and cliff aversion. Mice between the ages of post-natal day 2 to 14 can be used. In addition, these tests can be used for a wide range of neurological and neuromuscular pathologies, including cerebral palsy, hypoxic-ischemic encephalopathy, traumatic brain injury, spinal cord injury, neurodegenerative diseases, and neuromuscular disorders. These tests can also be used to determine the effects of pharmacological agents, as well as other types of therapeutic interventions. In this paper, motor deficits were evaluated in a novel neonatal mouse model of cerebral palsy that combines hypoxia, ischemia and inflammation. Forty-eight hours after injury, five tests out of the nine showed significant motor deficits: ambulation, hindlimb angle, hindlimb suspension, four limb grip strength, and grasping reflex. These tests revealed weakness in the hindlimbs, as well as fine motor skills such as grasping, which are similar to the motor deficits seen in human cerebral palsy patients.

Presented is a concise battery of mouse neonatal motor tests. Using these tests, neonatal motor deficits can be demonstrated in a variety of neonatal motor disorders. By having a standardized set of tests, results from different studies can be compared, allowing for better and accurate reporting between groups.

סדרת מבחנים Motor במודל של עכברים ילודים של שיתוק מוחין

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The simple murine AVF model was combined with intraluminal administration of drug solution to the venous endothelium at the same time as fistula creation. Technical aspects of this model are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The infra-renal aorta and IVC are dissected for clamping. After proximal and distal clamping, the puncture site is exposed and a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta and into the IVC. Immediately after the puncture, a reporter gene-expressing viral vector was infused in the IVC via the same needle, followed by 15 min of incubation. The intraluminal administration method enabled more robust viral gene delivery to the venous endothelium compared to administration by the external route. This novel method of delivery will facilitate studies that explore the role of the endothelium in AVF maturation and enable intraluminal drug delivery at the time of surgical operation.

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

החדרת תרופות Intraluminal אל האנדותל מורסה arteriovenous עכבר

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have been established by tamoxifen induced deletion of Ccm genes in postnatal animals. These mouse models provide invaluable tools to investigate molecular mechanism and therapeutic approaches for CCM disease. An accurate and quantitative method to assess lesion burden and progression is essential to harness the full value of these animal models. Here, we demonstrate the induction of CCM disease in a mouse model and the use of the contrast enhanced X-ray micro computed tomography (micro-CT) method to measure CCM lesion burden in mouse brains. At postnatal day 1 (P1), we used 4-hydroxytamoxifen (4HT) to activate Cre recombinase activity from the Cdh5-CreErt2 transgene to cleave the floxed allele of Ccm2. CCM lesions in mouse brains were analyzed at P8. For micro-CT, iodine based Lugol&#39;s solution was used to enhance contrast in brain tissue. We have optimized the scan parameters and utilized a voxel dimension of 9.5 &#181;m, which lead to a minimum feature size of approximately 25 &#181;m. This resolution is sufficient to measure CCM lesion volume and number globally and accurately, and provide high-quality 3-D mapping of CCM lesions in mouse brains. This method enhances the value of the established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for CCM and other cerebrovascular diseases.

This protocol demonstrates the induction of cerebral cavernous malformation disease in a mouse model and uses contrast enhanced micro computed tomography to measure lesion burden. This method enhances the value of established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for cerebral cavernous malformation and other cerebrovascular diseases.

אינדוקציה והדמיה מיקרו-CT של המוח מומים חלול במודל עכבר

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...