私達は誠意をこめて、MATLABのプログラムとニュージャージー病理組織学的機能と顕微鏡施設のがん研究所と彼女の助けを博士Wenjinチェンに感謝します。我々はまた、彼らのコメントと提案についてのレビューに感謝します。本研究では、レイモンドとビバリー·サックラー研究財団によってサポートされています。

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	<li>Taal, B. G., Visser, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+neuroendocrine+tumours.">Epidemiology of neuroendocrine tumours.</a> Neuroendocrinology. 80, 3-7 (2004).</li><li>Lee, G. Y., Kenny, P. A., Lee, E. H., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+models+of+normal+and+malignant+breast+epithelial+cells.">Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells.</a> Nat. Methods. 4, 359-365 (2007).</li><li>Friedrich, J., Seidel, C., Ebner, R., Kunz-Schughart, L. 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M., M&#252;ller-Navia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOPE++Fixation:+A+Novel+Fixing+Method+and+Paraffin-embedding+Technique+for+Human+Soft+Tissues.">HOPE Fixation: A Novel Fixing Method and Paraffin-embedding Technique for Human Soft Tissues.</a> Pathology-Research and Practice. 197, 823-826 (2001).</li><li>Baradari, V., Huether, A., H&#246;pfner, M., Schuppan, D., Scher&#252;bl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiproliferative+and+proapoptotic+effects+of+histone+deacetylase+inhibitors+on+gastrointestinal+neuroendocrine+tumor+cells.">Antiproliferative and proapoptotic effects of histone deacetylase inhibitors on gastrointestinal neuroendocrine tumor cells.</a> Endocr. Relat. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF-7+cells+as+a+three-dimensional+model+for+the+study+of+human+breast+cancer.">MCF-7 cells as a three-dimensional model for the study of human breast cancer.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17, 1097-1107 (2011).</li><li>Hirschhaeuser, F., Menne, H., Dittfeld, C., West, J., Mueller-Klieser, W., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+tumor+spheroids:+An+underestimated+tool+is+catching+up+again.">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148, 3-15 (2010).</li></ol>

利害の衝突が宣言されません。

我々はアガロースでコーティングされた24ウェルプレートを用いたヒト神経内分泌腫瘍細胞からの3次元多細胞スフェロイドを形成するための、シンプルで信頼性が高く、再現可能な方法を実証した。この手法の成功は、セルの固定の番号から6日目で均質な大きさと均一な形状を持つ単一のスフェロイドを取得する機能があります。重要なステップは、めっき後の最初の16から24時間NETの細胞を用いたプレートのゆっくり攪拌します。また、このメソッドは、一般的なヒト乳癌細胞株MCF-7、ヒト結腸腺癌細胞株HT-29、ヒト非小細胞肺癌細胞株H1299とヒト胚腎臓細胞株HEK-293に適用することができます。彼らはすべての治療薬の画面（データは示さず）のための統一とコンパクトな3Dスフェロイドを形成することができます。いくつかの方法は、3D回転楕円体を生成することが報告されていますが、7月10日方法は、特殊なプレートや試薬を必要としないここで報告し、その結果、シンプルで費用対効果です。私たちの未発表データdemonstrat単層2次元のセルと比較した場合、アガロース上に成長させたNET 3D回転楕円体は、幾何学的および分子生体 NET異種移植腫瘍における模倣した電子。これは、他のヒト癌細胞株で作られた3D回転楕円体について報告されているものと似ています。3D細胞培養モデルの11,12制限は、それが完全に任意の薬剤または治療的処置の in vivoでの有効性のテストで置き換えることができないということですので、 3D回転楕円体は、この面でのin vivoで腫瘍内と異なっている、血管腫瘍のようなものです。それにもかかわらず、このメソッドはいくつかの側面における in vivo、in vitroでからNET治療薬のギャップと評価を埋めるのに役立ちます。 多細胞スフェロイドにおける免疫蛍光染色は、浮動小数点3D回転楕円体と共焦点顕微鏡の限界の大きなサイズとジオメトリーのために実行することは非常に困難である。ここでは、パラフィン包埋のためにHistoGelを処理する方法を示しています3D回転楕円体のシリアル切片スライドの免疫組織化学的染色を可能にして、埋め込む。また、私たちのカスタム開発されたMATLABプログラムは、正確かつ再現性、スフェロイドの大きさを推定する効率的な薬効を監視するのに役立ちますし、NET患者のための薬の開発におけるハイスループットスクリーニングに組み込まれる可能性があります。

<table border="1"><tbody><tr><td> 名 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> DMEM/F12メディア</td><td>ギブコ</td><td> 10565-018 </td><td></td></tr><tr><td> TrypLE </td><td>ギブコ</td><td> 12604 </td><td></td></tr><tr><td> 24ウェルプレート</td><td>ファルコン</td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> 70mMのセルストレーナー</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 22363548 </td><td></td></tr><tr><td>滅菌シールテープ</td><td>ヌンク</td><td> 236366 </td><td></td></tr><tr><td>トリコスタチンA </td><td>シグマ</td><td> T8552 </td><td></td></tr><tr><td>オービタルシェーカー</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 11-402-12 </td><td></td></tr></tbody></table>

human neuroendocrine tumor cell lines as a three-dimensional model for the study of human neuroendocrine tumor therapy

神経内分泌腫瘍では、（ネット）は年間100、000、個人ごとに2つの発生率と、まれな腫瘍であり、彼らはすべてのヒト悪性腫瘍の0.5％を占めています。1は、限局性疾患を呈する少数の患者の手術以外にも、あります全身療法のほとんど、またはまったく延命効果。したがって、優れたネットの生物学を理解し、特に切除不能または転移性神経内分泌腫瘍の患者さんのための新しい治療標的を定義するための優れた必要がある。 3D細胞培養は、 インビボで腫瘍組織の組織と微小環境でのモデリングで、その妥当性に起因する薬物のスクリーニングのための一般的な方法となっています。2,3次元多細胞スフェロイドが直接2Dから進んでよりタイムリーかつ安価な方法で貴重な情報を提供することができます動物（マウス）モデルへの細胞培養実験を行った。 NETパットのための新しい治療薬の発見を容易にするためにients、我々はヒトNET細胞株を用いたin vitroの3D多回転楕円体モデルで開発してきました。 NET細胞は非接着性アガロースでコーティングされた24ウェルプレートに播種し、播種後16から24時間のために非常にゆっくりと攪拌しながら、生理的条件下（5％CO 2、37℃）下でインキュベートされています。細胞は、第3または4日目に始まる多細胞スフェロイドを形成しています。スフェロイドは、薬物治療が開始される時点で、6日目 、することで、より球状になります。 NETスフェロイドに対する薬物治療の有効性は、位相差光学顕微鏡によるスフェロイドの形態、形状、サイズに基づいて監視されています。スフェロイドのサイズが自動的にアクティブな輪郭アルゴリズムに基づいてカスタム開発されたMATLABプログラムを用いて推定されています。さらに、我々は標準組織学的および免疫組織化学的手法を使用することができ、これらの3D回転楕円体上のHistoGel埋め込みを処理する簡単な方法を示しています。 <pクラス= &quot;jove_content&quot;&gt;これは、治療薬の効果を調べるためにNET細胞株を用いた3次元回転楕円体を生成する上で最初の報告である。また、これらの3次元回転楕円体で組織を行い、NETスフェロイドの成長と増殖に対する単剤の効果の例を表示しています。我々の結果は、スフェロイドNETは、NET生物学と医薬品開発のさらなる研究のために貴重であることをサポートしています。

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Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

我々は、神経内分泌癌細胞株を用いた3次元多細胞スフェロイドを成長させるシンプルなアガロースオーバーレイプラットフォームを提示します。このメソッドは、神経内分泌腫瘍細胞に治療薬の効果を調べるために非常に便利な方法を提供します。それはまた、私たちはがん治療のための人間の神経内分泌腫瘍のスフェロイドを確立するのに役立つ可能性があります。

人間の神経内分泌腫瘍療法の研究のための三次元モデルとしての人間の神経内分泌腫瘍細胞株

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

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28.5K ビュー.  Raymond and Beverly Sackler Foundation. 我々は、神経内分泌癌細胞株を用いた3次元多細胞スフェロイドを成長させるシンプルなアガロースオーバーレイプラットフォームを提示します。このメソッドは、神経内分泌腫瘍細胞に治療薬の効果を調べるために非常に便利な方法を提供します。それはまた、私たちはがん治療のための人間の神経内分泌腫瘍のスフェロイドを確立するのに役立つ可能?...