Agradecemos sinceramente a la Dra. Chen Wenjin por su ayuda con el programa de MATLAB y el Instituto del Cáncer de Nueva Jersey instalación histopatología y microscopía de las instalaciones. También agradecemos a los revisores por sus comentarios y sugerencias. Este estudio se apoya en el Raymond y Beverly Sackler Fundación para la Investigación.

<ol>
	<li>Taal, B. G., Visser, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+neuroendocrine+tumours.">Epidemiology of neuroendocrine tumours.</a> Neuroendocrinology. 80, 3-7 (2004).</li><li>Lee, G. Y., Kenny, P. A., Lee, E. H., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+models+of+normal+and+malignant+breast+epithelial+cells.">Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells.</a> Nat. Methods. 4, 359-365 (2007).</li><li>Friedrich, J., Seidel, C., Ebner, R., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid-based+drug+screen:+considerations+and+practical+approach.">Spheroid-based drug screen: considerations and practical approach.</a> Nat. Protocol. 4, 309-324 (2009).</li><li>Chan, T. F., Vese, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+contours+without+edges.">Active contours without edges.</a> IEEE Trans Image Process. 10, 266-277 (2001).</li><li>Olert, J., Wiedorn, K. H., Goldmann, T., K&#252;hl, H., Mehraein, Y., Scherthan, H., Niketeghad, F., Vollmer, E., M&#252;ller, A. M., M&#252;ller-Navia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOPE++Fixation:+A+Novel+Fixing+Method+and+Paraffin-embedding+Technique+for+Human+Soft+Tissues.">HOPE Fixation: A Novel Fixing Method and Paraffin-embedding Technique for Human Soft Tissues.</a> Pathology-Research and Practice. 197, 823-826 (2001).</li><li>Baradari, V., Huether, A., H&#246;pfner, M., Schuppan, D., Scher&#252;bl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiproliferative+and+proapoptotic+effects+of+histone+deacetylase+inhibitors+on+gastrointestinal+neuroendocrine+tumor+cells.">Antiproliferative and proapoptotic effects of histone deacetylase inhibitors on gastrointestinal neuroendocrine tumor cells.</a> Endocr. Relat. Cancer. 13, 1237-1250 (2006).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Hanging+Drop+Cell+Culture+Protocol+for+Generation+of+3D+Spheroids.">A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids.</a> J. Vis. Exp. (51), e2720 (2011).</li><li>Shaw, K. R., Wrobel, C. N., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+three-dimensional+basement+membrane+cultures+to+model+oncogene-induced+changes+in+mammary+epithelial+morphogenesis.">Use of three-dimensional basement membrane cultures to model oncogene-induced changes in mammary epithelial morphogenesis.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 9, 297-310 (2004).</li><li>Ivascu, A., Kubbies, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+generation+of+single-tumor+spheroids+for+high-throughput+cell+function+and+toxicity+analysis.">Rapid generation of single-tumor spheroids for high-throughput cell function and toxicity analysis.</a> J. Biomol. Screen. 11, 922-932 (2006).</li><li>Napolitano, A. P., Chai, P., Dean, D. M., Morgan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+Self-Assembly+of+Complex+Cellular+Aggregates+on+Micromolded+Nonadhesive+Hydrogels.">Dynamics of the Self-Assembly of Complex Cellular Aggregates on Micromolded Nonadhesive Hydrogels.</a> Tissue Engineering. 13, 2087-2094 (2007).</li><li>do Amaral, J. B., Rezende-Teixeira, P., Freitas, V. M., Machado-Santelli, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF-7+cells+as+a+three-dimensional+model+for+the+study+of+human+breast+cancer.">MCF-7 cells as a three-dimensional model for the study of human breast cancer.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17, 1097-1107 (2011).</li><li>Hirschhaeuser, F., Menne, H., Dittfeld, C., West, J., Mueller-Klieser, W., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+tumor+spheroids:+An+underestimated+tool+is+catching+up+again.">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148, 3-15 (2010).</li></ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Hemos demostrado un método sencillo, fiable y reproducible para formar esferoide 3D multicelular de células tumorales humanas neuroendocrinos utilizando agarosa recubiertos con placas de 24 pocillos. El éxito de esta técnica es la capacidad para obtener un esferoide solo con tamaño homogéneo y forma uniforme por día 6 a partir de un número fijo de células. El paso clave es la agitación lenta de la placa con células NET para la primera 16-24 horas después de placas. Este método puede aplicarse también al común de cáncer de mama humano línea de células MCF-7, el adenocarcinoma de colon humano línea de células HT-29, humana no pequeñas de pulmón de células carcinoma de la línea celular H1299 y de embriones humanos línea celular de riñón HEK-293. Todos ellos pueden formar esferoides en 3D uniformes y compactas para la pantalla de la droga terapéutica (datos no presentados). Aunque varios métodos se reportan en la generación de esferoides 3D, 7-10 el método descrito aquí no requiere placas especializadas o reactivos y por tanto es sencilla y económica. Nuestros datos no publicados demonstrate que NET esferoides 3D cultivadas en agarosa imitar el tumor in vivo en xenoinjertos NET geométricamente y molecularmente, cuando se compara con monocapa de células 2D. Esto es similar a lo que se ha informado de los esferoides 3D hechas a partir de otras líneas celulares de cáncer humano. 11,12 La limitación del modelo de cultivo celular 3D es que no puede sustituir completamente a prueba la eficacia in vivo de los fármacos o tratamientos terapéuticos porque los esferoides 3D son como tumores avasculares, que es diferente de la de tumores in vivo en este aspecto. Sin embargo, este método le ayudará a cerrar la brecha y las evaluaciones de los medicamentos terapéuticos de NET in vitro a in vivo en algunos aspectos. La tinción de inmunofluorescencia en esferoides multicelulares es muy difícil de realizar debido al gran tamaño y geometría de los esferoides 3D flotantes y la limitación del microscopio confocal. Aquí se ilustra un método para procesar incrustación HistoGel para parafinaincorporación, lo que permite la tinción inmunohistoquímica de las diapositivas de serie de sección de los esferoides en 3D. Además, nuestra costumbre desarrollada programa MATLAB ayuda precisa y reproducible estimar el tamaño de los esferoides, vigilar la eficacia de los medicamentos de manera eficiente, y podría ser incorporado en una pantalla de alto rendimiento en el desarrollo de fármacos para los pacientes NET.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> DMEM/F12 los medios </td><td> Gibco </td><td> 10565-018 </td><td></td></tr><tr><td> TrypLE </td><td> Gibco </td><td> 12604 </td><td></td></tr><tr><td> Placas de 24 pocillos </td><td> Halcón </td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> 70 mM de filtro de células </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22363548 </td><td></td></tr><tr><td> Precinto estéril </td><td> Nunc </td><td> 236366 </td><td></td></tr><tr><td> Tricostatina A </td><td> Sigma </td><td> T8552 </td><td></td></tr><tr><td> Agitador orbital </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11-402-12 </td><td></td></tr></tbody></table>

human neuroendocrine tumor cell lines as a three-dimensional model for the study of human neuroendocrine tumor therapy

Los tumores neuroendocrinos (TNE) son tumores poco frecuentes, con una incidencia de dos por cada 100, 000 individuos por año, y representan el 0,5% de todos los cánceres humanos. 1 Con excepción de la cirugía para la minoría de los pacientes que presentan enfermedad localizada, ¿hay la supervivencia de poco o ningún beneficio de la terapia sistémica. Por lo tanto, existe una gran necesidad de entender mejor la biología de los TNE, y en particular definir nuevos objetivos terapéuticos para pacientes con tumores neuroendocrinos resecables o metastásico. Cultivo de células en 3D se está convirtiendo en un método popular para la detección de drogas debido a su importancia en el modelado de la organización en el tejido del tumor in vivo y el microambiente. 2,3 Los esferoides multicelulares 3D podría proporcionar información valiosa de una manera más oportuna y menos costosa que la de proceder directamente de 2D experimentos con cultivos de células de los animales (ratón) modelos. Para facilitar el descubrimiento de nuevas terapias para NET patients, hemos desarrollado un modelo in vitro 3D esferoides multicelulares utilizando las líneas de células humanas NET. Las células se sembraron NET en un no-adhesivo de agarosa recubierta 24-pocillos y se incubaron bajo condiciones fisiológicas (5% de CO 2, 37 ° C) con una agitación muy lenta durante 16-24 horas después de placas. Las células forman esferoides multicelulares de partida en el día 3 de o 4. Los esferoides se vuelven más esférica por el día 6 ª, en cuyo punto los tratamientos farmacológicos se inician. La eficacia de los tratamientos farmacológicos sobre los esferoides NET se controla sobre la base de la morfología, la forma y tamaño de los esferoides con un microscopio óptico de contraste de fase. El tamaño de los esferoides se calcula automáticamente utilizando un programa personalizado desarrollado MATLAB basa en un algoritmo de contorno activo. Además, se demuestra un método simple para procesar la incorporación de estos esferoides HistoGel 3D, permitiendo el uso de las técnicas histológicas e inmunohistoquímicas. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; Este es el primer informe sobre la generación de esferoides en 3D usando líneas celulares NET para examinar el efecto de las drogas terapéuticas. También hemos realizado la histología de estos esferoides en 3D, y se muestra un ejemplo del efecto de un solo fármaco en el crecimiento y la proliferación de los esferoides NET. Nuestros resultados apoyan que los esferoides NET son valiosos para futuros estudios de la biología NET y el desarrollo de fármacos.

Watch this Scientific Journal Video about Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy at JoVE.com

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Se presenta una sencilla plataforma de agarosa superposición de crecer en 3D esferoides multicelulares que utilizan líneas celulares de cáncer neuroendocrino. Este método proporciona una forma muy conveniente para examinar el efecto de fármacos terapéuticos en las células tumorales neuroendocrinas. También podría ayudar a establecer humanos esferoides tumor neuroendocrino de la terapia del cáncer.

Humanos neuroendocrinos líneas de células tumorales como un modelo tridimensional para el estudio de la terapia humana tumor neuroendocrino

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

human-neuroendocrine-tumor-cell-lines-as-three-dimensional-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

28.5K vistas.  Raymond and Beverly Sackler Foundation. Se presenta una sencilla plataforma de agarosa superposición de crecer en 3D esferoides multicelulares que utilizan líneas celulares de cáncer neuroendocrino. Este método proporciona una forma muy conveniente para examinar el efecto de fármacos terapéuticos en las células tumorales neuroendocrinas. También podría ayudar a establecer humanos esferoides tumor neuroendocrino de la terapia del cáncer.