Nous remercions sincèrement le Dr Chen Wenjin pour son aide avec le programme MATLAB et l&#39;Institut du Cancer du New Jersey histopathologie installation et installation de microscopie. Nous remercions également les relecteurs pour leurs commentaires et suggestions. Cette étude est soutenue par le Raymond et Beverly Sackler Fondation pour la recherche.

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	<li>Taal, B. G., Visser, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+neuroendocrine+tumours.">Epidemiology of neuroendocrine tumours.</a> Neuroendocrinology. 80, 3-7 (2004).</li><li>Lee, G. Y., Kenny, P. A., Lee, E. H., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+models+of+normal+and+malignant+breast+epithelial+cells.">Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells.</a> Nat. Methods. 4, 359-365 (2007).</li><li>Friedrich, J., Seidel, C., Ebner, R., Kunz-Schughart, L. 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M., M&#252;ller-Navia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOPE++Fixation:+A+Novel+Fixing+Method+and+Paraffin-embedding+Technique+for+Human+Soft+Tissues.">HOPE Fixation: A Novel Fixing Method and Paraffin-embedding Technique for Human Soft Tissues.</a> Pathology-Research and Practice. 197, 823-826 (2001).</li><li>Baradari, V., Huether, A., H&#246;pfner, M., Schuppan, D., Scher&#252;bl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiproliferative+and+proapoptotic+effects+of+histone+deacetylase+inhibitors+on+gastrointestinal+neuroendocrine+tumor+cells.">Antiproliferative and proapoptotic effects of histone deacetylase inhibitors on gastrointestinal neuroendocrine tumor cells.</a> Endocr. Relat. 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Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Nous avons démontré une méthode simple, fiable et reproductible pour former 3D sphéroïde multicellulaire à partir de cellules de tumeurs neuroendocrines utilisant agarose recouvertes de plaques à 24 puits. Le succès de cette technique est la possibilité d&#39;obtenir un sphéroïde unique avec la taille et la forme homogène uniforme par jour 6 à partir d&#39;un nombre fixe de cellules. L&#39;étape clé est l&#39;agitation lente de la plaque avec des cellules NET pour la première 16-24 heures après placage. Cette méthode peut également s&#39;appliquer à commune lignée cellulaire humaine de cancer du sein MCF-7, lignée cellulaire humaine du côlon adénocarcinome HT-29, l&#39;homme non à petites cellules du poumon carcinome ligne H1299 et humaines lignée de cellules embryonnaires de rein HEK-293. Ils peuvent tous former uniformes et compact sphéroïdes 3D pour écran thérapeutique (données non présentées). Bien que plusieurs méthodes sont signalés sur la génération de sphéroïdes 3D, 7-10 la méthode décrite ici ne nécessite pas de plaques spécialisées ou des réactifs et est donc simple et rentable. Notre demonstrat données inéditese que NET sphéroïdes 3D cultivées sur agarose d&#39;imiter les xénogreffe tumorale in vivo NET géométriquement et moléculaire, par rapport aux cellules monocouches 2D. Ceci est similaire à ce qui a été rapporté pour les sphéroïdes 3D réalisées à partir sur d&#39;autres lignées cellulaires cancéreuses humaines. 11,12 La limitation de la modèle de culture cellulaire 3D, c&#39;est qu&#39;il ne peut pas remplacer complètement tester l&#39;efficacité in vivo de drogues ou de traitements thérapeutiques en raison les sphéroïdes 3D sont comme des tumeurs avasculaires, qui est différente de la dans la tumeur in vivo dans cet aspect. Néanmoins, cette méthode aidera combler le fossé et les évaluations des médicaments thérapeutiques à partir NET in vitro à in vivo dans certains aspects. Immunofluorescence sur sphéroïdes multicellulaires est très difficile à réaliser en raison de la grande taille et la géométrie des sphéroïdes flottants en 3D et la limitation du microscope confocal. Ici, nous illustrons une méthode de traitement à la paraffine plongement HistoGelintégration, permettant la coloration immunohistochimique des coupes sériées en coupe de la sphéroïdes 3D. Par ailleurs, notre coutume développée programme MATLAB permet précise et reproductible estimer la taille des sphéroïdes, de surveiller l&#39;efficacité du médicament de manière efficace, et pourrait être intégrée dans un écran à haut débit dans le développement de médicaments pour les patients NET.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> DMEM/F12 médias </td><td> Gibco </td><td> 10565-018 </td><td></td></tr><tr><td> TrypLE </td><td> Gibco </td><td> 12604 </td><td></td></tr><tr><td> Plaques à 24 puits </td><td> Faucon </td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> 70 tamis cellulaire mM </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22363548 </td><td></td></tr><tr><td> Bande d&#39;étanchéité stérile </td><td> Nunc </td><td> 236366 </td><td></td></tr><tr><td> Un trichostatine </td><td> Sigma </td><td> T8552 </td><td></td></tr><tr><td> Orbital Shaker </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11-402-12 </td><td></td></tr></tbody></table>

human neuroendocrine tumor cell lines as a three-dimensional model for the study of human neuroendocrine tumor therapy

Les tumeurs neuroendocrines (TNE) sont des tumeurs rares, avec une incidence de deux par 100 000 personnes par an, et ils représentent 0,5% de l&#39;ensemble des tumeurs malignes humaines. 1 Autre que la chirurgie pour la minorité des patients qui présentent une maladie localisée, il est bénéfice de survie peu ou pas de la thérapie systémique. Par conséquent, il ya un grand besoin de mieux comprendre la biologie des filets, et en particulier de définir de nouvelles cibles thérapeutiques pour les patients atteints non résécables ou métastatiques des tumeurs neuroendocrines. Culture cellulaire 3D devient une méthode populaire pour le dépistage des drogues en raison de sa pertinence dans la modélisation de la dans l&#39;organisation des tissus in vivo de la tumeur et microenvironnement. 2,3 Les sphéroïdes multicellulaires 3D pourrait fournir de précieuses informations d&#39;une manière plus rapide et moins cher que de passer directement de la 2D Les expériences de culture cellulaire pour la santé animale (murin) modèles. Afin de faciliter la découverte de nouvelles thérapies pour le NET patients, nous avons développé un test in vitro 3D sphéroïdes multicellulaires modèle en utilisant les lignes cellulaires humaines NET. Les cellules sont étalées NET dans un non-adhésif revêtu d&#39;agarose de 24 puits de plaque et incubés dans des conditions physiologiques (5% de CO 2, 37 ° C) avec une agitation très lente des 16-24 ans h après le placage. Les cellules forment sphéroïdes multicellulaires à compter du jour 3 e ou 4 e. Les sphéroïdes devenir plus sphérique par le 6 e jour, à quel point les traitements médicamenteux sont initiées. L&#39;efficacité des traitements pharmacologiques sur les sphéroïdes NET est surveillée sur la base de la morphologie, la forme et la taille des sphéroïdes avec un microscope optique à contraste de phase. La taille des sphéroïdes est estimé automatiquement à l&#39;aide d&#39;un programme personnalisé développé MATLAB basé sur un algorithme de contour actif. En outre, nous démontrons une méthode simple pour traiter le plongement HistoGel sur ces sphéroïdes 3D, permettant l&#39;utilisation de standards techniques histologiques et immunohistochimiques. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; C&#39;est le premier rapport sur la production de sphéroïdes 3D utilisant des lignées cellulaires NET pour examiner l&#39;effet de médicaments thérapeutiques. Nous avons également procédé, l&#39;histologie sur ces sphéroïdes 3D, et a présenté un exemple d&#39;effet d&#39;un seul médicament sur la croissance et la prolifération des sphéroïdes NET. Nos résultats confirment que les sphéroïdes NET sont précieux pour les études de la biologie NET et le développement de médicaments.

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Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Nous présentons une simple superposition d&#39;agarose plate-forme pour développer 3D sphéroïdes multicellulaires en utilisant des lignées cellulaires cancéreuses neuroendocrines. Cette méthode fournit un moyen très pratique pour examiner l&#39;effet des médicaments thérapeutiques sur les cellules de tumeurs neuroendocrines. Il pourrait aussi nous aider à établir l&#39;homme sphéroïdes de tumeurs neuroendocrines pour le traitement du cancer.

L&#39;homme neuroendocriniennes lignées cellulaires tumorales comme un modèle tridimensionnel pour l&#39;étude de la thérapie des tumeurs neuro-endocrines humaines

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

human-neuroendocrine-tumor-cell-lines-as-three-dimensional-model-for

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28.5K vues.  Raymond and Beverly Sackler Foundation. Nous présentons une simple superposition d'agarose plate-forme pour développer 3D sphéroïdes multicellulaires en utilisant des lignées cellulaires cancéreuses neuroendocrines. Cette méthode fournit un moyen très pratique pour examiner l'effet des médicaments thérapeutiques sur les cellules de tumeurs neuroendocrines. Il pourrait aussi nous aider à établir l'homme sphéroïdes de tumeurs neuroendocrines pour le traitement du cancer.