この作品は、コンセプト助成のUCディスカバリープルーフによっておよびNIH（R00 EB007241）によってサポートされていました。著者らはまた、この実験では彼女の援助のためのジャクリーン·ハバードに感謝したいと思います。

1。手術の準備<ol><li> 6-8週間の年齢の間に雌性CD-1マウスは、私たちの実験で使用した。 </li><li>ケタミンおよびキシラジンの組み合わせ（80 mg / kgのketamine/10 mg / kgをキシラジン）の腹腔内注射でマウスを麻酔。 〜37℃で最適な体温を確保するための恒温パッドの上にマウスを置き継続的に動物の反射を（ 例えば 、鉗子で鈍足をつまんで）テストすることによって、麻酔のレベルを監視し、必要に応じてそれ以上の麻酔を注入します。 </li><li>人工涙液軟膏で両眼を潤滑します。カミソリを使って頭皮に毛を削除し、70％アルコールの準備パッドを用いて残留毛を取り除く。頭皮上Nairさんの脱毛クリームの薄い層を適用し、それを有効にするには、2分間待ちます。穏やかに生理食塩水を使用してNairさん、残りの髪は綿棒とアルコールの準備パッドを湿らせ拭き取ってください。頭皮は完全に無毛である必要があります。 </li><li>ベタジンスワブスティックを使用して頭皮を消毒すると7をクリーン0％エタノール準備パッド。 </li><li> 〜37の最適な体温を確保するための手術用ドレープで動物を注意深く包む℃、頭蓋骨を固定する定位フレームに動物をマウントします。軽くて安定性を確保するために頭蓋骨をタップします。使用される材料のリストを表1に提供されています。 </li></ol> 2。間引き頭蓋骨皮質ウィンドウ準備<ol><li>目の間の正中線の時点で切開を開始します。耳の間の正中線点まで尾を続行します。鉗子との部分は皮膚。 </li><li>解剖顕微鏡下で薄くする領域を見つけ、ゆっくりとピンセットを用いて筋膜を除去します。間伐皮質のウィンドウを作成する前に、滅菌綿棒で頭蓋骨を乾かします。私たちの実験では、4×4mmの間伐頭蓋窓〜後部とブレグマ横1ミリメートルを作成しました。 </li><li>光抜本的な動きのONLを使用して外科ハンドドリルにドリルビットサイズ0.75ミリメートルの丸カーバイドバーを用いて頭蓋骨を薄く開始yである。頭蓋骨の上に直接圧力をかけないでください。滅菌生理食塩水と綿棒を用いて骨ほこりを取り除くために、頭蓋骨の過熱を防ぐため、毎年20〜30秒の掘削を停止します。生理食塩水はまた、頭蓋骨全体に熱を放散させるのに役立ちます。 </li><li>緻密骨の外側の層が完全に除去されたら真ん中の海綿骨の層が表示されるようにする必要があります。血管が海綿骨層でより明らかになりますようにいくつかのわずかな出血があるかもしれません。緑石のいがに切り替えて、海綿層がより繊細であるため特別な注意を用いた掘削を続ける。頭蓋窓全体に均一の作成中に緑色の石のいがが少ない骨材を除去します。骨塵を除去し、頭蓋骨を冷却するために時折ドリルを停止します。 </li><li>最後に、頭蓋骨の透明性と脳への血管系になったときに表示されるようになりました、研磨バールを使って頭蓋骨を研磨開始。頭蓋骨を下にスムージングしつつ、間伐より正確にできるようになります。 SKUの薄さをチェック静かにピンセットでそれをタップして、LL。頭蓋骨が少し柔軟になったときに研磨を停止します。 </li><li>間伐頭蓋窓は完全に滑らかで反射およびイメージング（ 図1）のために準備ができているはずです。非常に脳の組織の散乱の性質上、頭蓋骨は、最適な深さの浸透のために少なくとも55ミクロンまで薄くする必要があります。使用される材料のリストを表1に提供されています。 </li></ol> 3。光コヒーレンストモグラフィーイメージング<ol><li>手術が完了した後、麻酔の適切な水準を確保し、必要に応じて追加の麻酔を投与する動物の呼吸速度と反射神経をチェックします。 、定位フレームから動物を削除する手術用ドレープに包まれた動物を維持し、イメージングステーションに動物を輸送する。 </li><li>イメージングは​​、反射の標識を確認し、必要に応じて追加の人工涙液を適用する前に。頭蓋骨を確保するための定位フレームに代わって動物をマウントします。 </li><li>下に動物を置き10月のカメラと位置光ビーム（ 図2）に基づくTSCW。頭蓋骨と脳の断面図になりました（ 図3）可視化することができる。 </li><li>関心領域が配置された後、データ取得を開始することができます。イメージング目的のために、私たちは4.0ミリメートルの幅で撮像窓を達成するためにガルボミラーを使用しています。 2mmの撮像深度は6入射電力は、mWと焦点間伐頭蓋骨1mm以下で得られた。それぞれの断面積は、画像1枚あたり0.14秒の取得率は2048軸方向走査で構成されていた。 </li><li>脳の体積スキャンも、xyはサジタル方向にビームを走査する第一ガルバノミラーとコロナでスキャン第二ガルバノミラーで走査するためのガルバノミラーの2セットを使用して2D断面一連の画像を収集することによって得ることができる方向。 </li></ol>

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	<li>Bizheva, K., Unterhuber, A., Hermann, B., Povazay, B., Sattmann, H., Drexler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+ex+vivo+and+in+vitro+brain+morphology+in+animal+models+with+ultrahigh+resolution+optical+coherence+tomography.">Imaging ex vivo and in vitro brain morphology in animal models with ultrahigh resolution optical coherence tomography.</a> Journal of Biomedical Optics. 9, 719-724 (2004).</li><li>Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+for+ultrahigh+resolution+in+vivo+imaging.">Optical coherence tomography for ultrahigh resolution in vivo imaging.</a> Nature Biotechnology. 21, 1361-1367 (2003).</li><li>Wantanabe, H., Rajagopalan, U. M., Nakamichi, Y., Igarashi, K. 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M., Calabresi, P. A., Saidha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+retinal+neuronal+layers+in+multiple+sclerosis+with+maual+and+automated+optical+coherence+tomography+segementation+techniques.">In vivo assessment of retinal neuronal layers in multiple sclerosis with maual and automated optical coherence tomography segementation techniques.</a> J. Neurol. , (2012).</li><li>Frohman, E. M., Fujimoto, J. G., Frohman, T. C., Calabresi, P. A., Cutter, G., Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography:+a+window+into+the+mechanisms+of+multiple+sclerosis.">Optical coherence tomography: a window into the mechanisms of multiple sclerosis.</a> Nature Clinical Practice. 4, 664-675 (2008).</li><li>Gill, A. S., Rajneesh, K. F., Owen, C. 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特別な利害関係は宣言されません。

10月と間引き頭蓋骨によるイメージングはごく最近検討されている小説のニューロイメージング技術15、16です。私たちの実験では、in vivoでのマウスモデルにおけるTSCWを通して、SD-OCTイメージングの実現可能性を実証した。我々の結果から、頭蓋骨が約55μmまで薄くされると侵入深さは、それぞれ、軸方向および横方向に8μmと20μmの画像解像度で約1ミリメートルで得られる。?...

1990年代初頭の登場以来、10月は、組織の構造と機能2の生体イメージングのために広く使用されてきました。 10月は、光ファイバ·マイケルソン干渉計2,4低コヒーレンス光源を実装することにより、後方散乱光4のエコー遅延時間を測定することにより、断面画像を生成します。また、フーリエドメインOCT（FD-OCT）として知られている、SD-OCTは、1995年に初めて5年に導入され、従来のタイムドメインOCT（TD-OCT）と比較して優れた画像診断法を提供しています。 SD-OCTでは、参照アームが高速·超高解像度の画像取得6-9で得られた静止状態に保たれています。 現在、TSCWモデルは従来の開頭術の代わりに、2光子顕微鏡の in vivoでの脳の画像アプリケーションでのために主に使用されている。これらTSCWは追加IMAを提供するために、カスタム頭蓋骨板またはガラスカバースリップ10月13日と同時に使用されてきた安定性を変更する。我々の研究では、TSCWが使用されている場合これらのような付属品はOCTイメージングのために必要ではないことを観察した。彼らは光ビームと干渉し、OCT画像を変更することがありますしたがって、頭蓋骨板またはガラスカバースリップの欠如は、イメージング·ウィンドウサイズの広い範囲を可能にします。 間引き頭蓋骨の準備は、二光子顕微鏡10-13を用いて脳のイメージング研究に有利で ​​あることが判明した。私たちの実験では、TSCWを通じて体内画像皮質に、SD-OCTシステムを利用しています。当社のカスタムSD-OCTイメージングセットアップは、それぞれ8μmと20μmの軸方向および横方向の解像度が得97 nmの帯域幅で1295 nmの中心とする2つのスーパールミネッセントダイオード（SLD）14からなる広帯域、低コヒーレンス光源が含まれています。弊社の光学撮像素子では、我々はTSCW介して撮像がoで構造と機能を特定し、可視化に大きな可能性を持っていることを想像するptically密脳組織。

<table border="1"><tbody><tr><td> 材料 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>フェニックス医薬品</td><td> 57319-542-02 </td><td></td></tr><tr><td>キシラジン</td><td> Akorn株式会社</td><td> 139から236 </td><td></td></tr><tr><td>人工涙液軟膏</td><td>ラグビー</td><td> 0536-6550-91 </td><td></td></tr><tr><td>ナイル</td><td>チャーチ＆ドワイト株式会社</td><td> 4010130 </td><td></td></tr><tr><td>滅菌アルコール準備パッド</td><td>ケンドール·ヘルスケア</td><td> 6818 </td><td></td></tr><tr><td>綿はアプリケーターをひっくり返した</td><td> Fisherbrand </td><td> 23-400-115 </td><td></td></tr><tr><td>ベタジンソリューションSwabstick </td><td>パデュー製品&lt;/ TD&gt; <td> 67618-153-01 </td><td></td></tr><tr><td>食塩水、0.9パーセント</td><td>フェニックス医薬品</td><td> 57319-555-08 </td><td></td></tr><tr><td>定位フレーム</td><td> Stoelting </td><td></td><td></td></tr><tr><td>高速外科ハンドドリル</td><td> Foredom </td><td></td><td> 38000回転</td></tr><tr><td>超硬丸バール</td><td> Stoelting </td><td></td><td> 0.75ミリメートル</td></tr><tr><td>のDura-グリーンストーンズ</td><td>松風</td><td></td><td>シャンク：HP 形状：BA1 </td></tr><tr><td> CompoMaster粗＆CompoMasterポリッシャー</td><td>松風</td><td></td><td>形状：ミニ白金。 </td></tr><tr><td> SpaceDrapes </td><td>トリーティフィック株式会社</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

thinned-skull cortical window technique for in vivo optical coherence tomography imaging

光コヒーレンストモグラフィ（OCT）は、高時空間分解能で生物医学イメージング技術です。その低侵襲アプローチと10月は皮膚科、眼科、消化器1-3に広く使用されています。間引き頭蓋骨皮質ウィンドウ（TSCW）を使用して、我々は、in vivoでの画像の皮質をするためのツールとしてスペクトラルドメインOCT（SD-OCT）モダリティを採用しています。一般的に、それは、より汎用性を提供するように開かれ、頭蓋骨がニューロイメージングのために使用されてきた、しかし、TSCWアプローチは、低侵襲であり、神経病理学的研究における長期的イメージングのための効果的な平均である。ここでは、大脳皮質の in vivoイメージングの 10月のマウスモデルにおけるTSCWを作成する方法を紹介します。

大脳皮質上間伐ウィンドウを作成した後血管系は、より視覚的に顕著でなければなりません（ 図1）と深い撮像深度（1mmまで）が可能になります。右皮質は140μmで（ 図1）で測定した正常な頭蓋骨に比べ、より大きな光学的透明度を提供するので、約55ミクロンまで薄くされる。さらに10から15μmまで薄くするガラスカバースリップと頭蓋骨プレートの使用など、しか?...

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Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

私達はのためのマウスモデルにおける間引き頭蓋骨皮質ウィンドウ（TSCW）を作成する方法を紹介<em生体内で&gt;</em大脳皮質の&gt; OCTイメージング。

ための間引き頭蓋骨皮質ウィンドウ·テクニック<emインビボで&gt;</em&gt;光干渉断層イメージング

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

thinned-skull-cortical-window-technique-for-vivo-optical-coherence

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

15.0K ビュー.  University of California, Riverside. 私達はのためのマウスモデルにおける間引き頭蓋骨皮質ウィンドウ（TSCW）を作成する方法を紹介 OCTイメージング。