我々は彼のトラック &quot;空​​港ラウンジ&quot;、 &quot;壁紙&quot;、および &quot;イブニングメロドラマ（出現順に）を含め、関連するビデオで彼のクリエイティブコモンズライセンスされた音楽の使用のためにケビン·マクラウドを認める。&quot;我々はまた、手術ビデオで彼らの支援のためNdubisi OkekeとフレデリックTorstrickを承認したいと思います。

1。 Spinotrapeziusフィード動脈結紮手術<ol><li>腹腔内注射することにより、マウスを麻酔。 100 mg / mlのケタミンの0.06ミリリットル：0.5 mlシリンジ、策定中で 20.0 mg / mlのキシラジンの0.03ミリリットル 0.4 mg / mlとアトロピンの0.01ミリリットル 0.9％生理食塩水の0.30ミリリットル。 用量：グラム体重当たり0.01ミリリットルの*は、ip </li></ol>マウスの回復が誘導から時間内に収まるようマウス株と株価時*線量変数は、それに応じて調整してください。 <ol start="2"><li>角膜の乾燥を防ぐために、標準の眼軟膏を適用します。 </li><li>脱毛クリームの簡単なアプリケーションに続いて、トリミングバリカンを使用して、バックから髪を削除します。 </li><li>クロルヘキシジンやポビドンヨードで手術野を消毒してください。ポビドンヨードで終わる、エタノールで3回ポビドンヨード代替。 </li><li>加熱パッドと滅菌ドレープで、先に調製した外科的な作業面にマウスを移すに代わるものであること。 </li><li>アイリスはさみや鉗子標準パターンを使用して肩甲骨の骨突出に尾約5mm（ 例えば 、FST、11271から30）はテンで背部皮膚を通して組織を線形切開（3-5 mm）を作成し、平行切断棘がある。ターゲットの切開部位は、皮膚の色素沈着が許せば背脂肪パッドの皮可視化によって特定されるかもしれません;脂肪パッドの尾国境でカット。必要に応じて切開を展開し、春のはさみを使用して、セカンダリの皮膚層を貫通している。 <ol><li>解剖学ノート - spinotrapezius筋肉が背側に位置し、背骨の両側に沿って、L3へのT4から延びている。前縁はほぼ肩甲骨に横方向に延びる。筋肉は最も後縁は前縁に内側に位置しており、背骨と揃う築くことができるように尾側方向に先細り。二つの脂肪パッドも注意することが重要であり、spinotrapeziusに直接背腹敷設頭蓋2分の1に向かって筋肉。 </li><li>偽結紮手術はspinotrapezius血管系のリモデリングに変化は見られなかったような切開に起因する炎症は、血管リモデリング応答に影響を及ぼさないことが示されている。二つの空間的な要因がこの結果に貢献しています。最初の切開は筋肉内の血管反応は、典型的に検査され、関心領域から頭蓋方向に5mmによって除去される。また、背部皮膚の切開部位はspinotrapezius筋肉の頭蓋第三の上に位置して腹脂肪パッドによって血管結紮部位から分離されている。 </li></ol></li><li>筋肉の乾燥を防ぐために温めておいたリンゲル液で切開を灌漑。パパベリンなどの血管拡張剤の適用は、連結のための標的動脈を可視化するのに役立つ。 </li><li>解剖顕微鏡下では、基礎となるMUSCから（削除せず）解剖を鈍らせると分離するために背の白い脂肪パッドを鉗子を使用それが入り、その外側縁にspinotrapeziusを離れると、血管系を可視化するために、ウラル組織。 </li><li> 1つまたは2つのペアになって静脈に沿って、筋肉の外側縁にで、その途中でspinotrapeziusに腹の脂肪パッドを通過する標的動脈の位置を確認します。この動脈は反射や筋肉内動脈の経路を観察するために筋肉を交換することによって確認することができる筋肉の尾半分の大部分を供給します。ライゲーションのためのターゲットの場所は動脈腹脂肪パッドを終了し、筋肉に入るのセグメントであり、この地域では非常にアクセスが可能です。動脈·静脈のペアが優しくこの地域で腹脂肪パッドから分離する必要があるかもしれません。 spinotrapeziusが横背と腹脂肪パッドのどちらかその船を含む、複数の動脈·静脈のペアによって供給されることに注意してください。これらの船舶を妨害しないように注意してください。 <ol><li>複数の指標が動脈を区別するために使用することができる静脈から。最善の方法の1つは優しくマイクロプローブで血液の流れを妨げると筋肉から上流に移動することです。閉塞が解除されるまでの流れは動脈内に再開されません。静脈の壁は動脈が欠けている結合組織の白っぽい鞘を含んでいるので色も、​​使用することができます。静脈は一般的にサイズが大きくなっているようにまた、一つは、血管拡張剤を塗布する前に直径を考慮することがあります。 </li></ol></li><li>動脈は、そのペア静脈に近接して、典型的には、動脈の後ろにマイクロプローブを通過し、自然で広いギャップを作るために先端を使用して、マイクロプローブと約5mmのセグメントを分離するために、第5鉗子で鈍的切開を使用動脈と静脈の間の裂け目。これは、縫合糸がスレッドに経由されるギャップである。 </li><li> 10から0シングルスレッド縫合糸と針ホルダー場所外科医の結び目を使用して、解剖セグメントの近位端に向かって送り動脈（〜70μmの直径）の周りのライゲーションを用いた。ナンプラー動脈の切断を可能にするために合字との間に十分な分離とCE解剖動脈セグメントの遠位端に向かって追加のライゲーション、。 <ol><li> spinotrapeziusフィード動脈に関連付けられた小スケールは、大腿動脈などの大きな血管の結紮に比べて増加した外科的困難につながる。経験の浅い外科医は特に剥離率の高さ、不注意による出血、他の手術の合併症を持つことになります。特に懸念されるのは、識別および流れはちょうど切削前に妨害された後に無色の動脈を切断することの難しさです。外科医は動脈だけでなく、2字の分離を容易に観察可能とカットの確認を横断する場所を見つけるのに視覚的なガイドを持っているとして、これらの理由から、2合字を配置すること、手​​続きに不慣れな方にお勧めです。しかし、より多くの経験豊富な外科医がいる限り、彼らは明らかにすることができるよう、十分な合字を見つけることができるリガチャーの動脈下流を識別し、カット。このテクニックは意図せずに鋭い結紮縫合糸に近い容器をニッキングのリスクを減少させている間、それは動脈が離断された確認の増加難しさを含む欠点がないわけではない。 </li></ol></li><li>下流ライゲーション部位（筋肉に向かってIE）の血流の減少（遮られたRBC列）を観察することにより、ライゲーションを確認します。 </li><li>解剖用ハサミを使用するには、2つの合字の間にライゲートした動脈を横断する。唯一の1字が置かれていた場合（11a）は、下流方向に細心の注意を払ってカットします。 </li><li>プレーンフィルム（1mm）を読み込ま薬は実験手順の一環として、（尾）の下流に配置されてもよい。 </li><li>彼らの元の向きに変位筋膜と脂肪組織の位置を変更します。 </li><li> 8から0非吸収性縫合糸を用いて皮膚切開を閉じます。その後観察下準備温水回復ケージにマウスを置き、APの管理ブピバカイン、0.02〜0.05ミリリットル0.25パーセント局所浸潤などの鎮痛propriate。 </li></ol> 2。 in situで Spinotrapezius生体顕微鏡、 <ol><li> 3月4日、L·min -1の流速で100％酸素で気化イソフルラン3から4パーセントで誘導チャンバ内でマウスを麻酔。 <ol><li>注射麻酔薬よりも少ない心血管うつ病があるので、吸入麻酔の使用は、機能的な測定のために好適である。利用できないで吸入麻酔なら、そのようなペントバルビタールナトリウムとして長時間作用型の注射麻酔薬は、動物が配置された後に繰り返し注射を避けるために好ましい。 </li></ol></li><li>一度麻酔し、継続的にメンテナンス濃度（一般に約2％）と、0.5から1、L·min -1の流量で麻酔マスク（通称ノーズコーン）を通じてイソフルラン届ける。 <ol><li>マウスは、主に彼らの鼻の通路を通って換気するので、それが唯一のNECです麻酔マスクのダイヤフラムと鼻をカバーするessary。 </li></ol></li><li>必要であれば、トリミングバリカン及び脱毛クリームを使用して、バックから髪を削除します。 </li><li>熱パッドに動物を輸送する。 <ol><li>低温誘導性の血管収縮を防ぐために適温の状態でマウスを維持することが重要であるが、これはランプ、水循環熱パッド、電子レンジで加熱パッド等を介して行うことができます</li></ol></li><li>直腸温度プローブを挿入し、35にサーモコントローラ℃に設定してください。 </li><li>アイリスはさみと標準パターン鉗子を用いspinotrapeziusの尾側端で皮膚切開を加えます。 </li><li> 、脂肪パッドに頭側切開を延長馬の靴の切開を作成して、乾燥を防ぐためにラップで皮弁をカバーしています。 </li><li>可視性を最大化するための鉗子と春のハサミで皮下結合組織を解剖鈍らせる。 </li><li>近い峠として刺激電極を置き、できるだけ熱、現在のフィールドの大きさを最小限にし、脊椎へのちょうど横に露出筋肉の尾終わりにそれらを配置することができる。 </li><li> 1 Hzで配信さ200μ秒の持続時間、2ミリアンペア振幅の方形波で、電極のデータ集録システムは、電極刺激アイソレータ、およびコンピュータ·コントローラを用いた電極配置を確認するためのテスト刺激を行う。 </li><li>乾燥を防ぐために露出した筋肉の上にラップを置きます。 </li><li>血管径を平衡化される時に、30分の期間を計時開始。 </li><li>血管構造を表示するためにspinotrapezius筋肉の上に生体顕微鏡を置きます。 <ol><li>浸レンズを使用する場合は、客観的かつプラスチックラップの間に、PBSを一滴。 </li></ol></li><li>主な動脈（可視最大の船舶）の上から始めて、興味のある容器を見つけるために、XY平面でステージを操作します。 <ol><li>小さなarteriolの可視化反射光顕微鏡でesは赤血球列が提供するよりもコントラストが必要です。当社は、主に微小血管のコントラストを高めるためにサイドストリーム暗視野イメージング顕微鏡を使用していますが、コントラストは、高分子蛍光デキストランを静脈内注射後の反射光蛍光顕微鏡で改善することができます。 </li></ol></li><li> 30分間平衡化した後、目的の血管の画像/ビデオをキャプチャします。 </li><li>上記のように、90秒間、200マイクロ秒の持続時間の方形波で8 Hzで配信2ミリアンペア振幅を、筋肉を刺激する。 </li><li>別の画像/ビデオ直後の刺激をキャプチャして、血管が安静時直径に戻されるまで、毎分をキャプチャし続け、10分〜。 </li><li>反対側の筋肉を使ってステップ6から18を繰り返します。 </li><li>データ解析は、画像解析ソフトを用いてビデオキャリパーまたはオフラインでリアルタイムに行うことができます。 </li><li>マウスが続く安楽死させるる動物実験委員会のプロトコル。 </li></ol> 3。 Spinotrapeziusティッシュハーベストおよび固定<ol><li>腹腔内注射によりマウスを麻酔; Spinotrapeziusフィード動脈結紮のステップ1のように定式化。 </li><li>アイリスはさみと標準パターン鉗子を用いて、マウスの肩甲骨の骨突出に頭蓋切開数ミリメートルを作る。両側尾次に横方向に切開を展開します。 </li><li>優しく肌を反射し、浅筋膜を切断することによって、背胴から肌を解放します。 </li><li>標準ピンセットを用いて背脂肪組織を除去した後、筋肉を反映しており、同様に腹の脂肪組織を切開する鈍的切開を使用しています。 </li><li>鉗子と春のはさみを使用して筋肉を覆う筋膜を取り除きます。このステップでは難しく、時間がかかる場合がありますが、免疫蛍光染色とイメージングを向上させることが重要であることができます。組織が水和保つことは筋膜の除去を容易にすることができる。 </li><li>見つける側筋の境界線、およびそれに腹側にある脂肪体からspinotrapezius筋肉を分離するために鈍的切開を使用しています。 </li><li>尾側方向への頭蓋内の鈍的切開を続行します。いくつかの血管が筋肉のこの腹面に出入りすることに注意してください。灌流が必要な場合は、これらの血管をtransecting前に行われるべきです。その筋肉の尾側半分に、その外側縁を挿入それに腹を嘘筋肉にも注意してください。いくつかのカットは完全にエッジを定義し、解放するために、この境界に沿って必要な場合があります。 </li><li>消費税​​spinotrapezius筋肉。これを行うには： <ol><li>上記のような筋肉の外側縁無料。 </li><li>筋肉のほとんどの頭蓋程度横切ってカットします。 </li><li>矢状面において、内側縁（背骨に沿って）に沿って切り取ります。 </li></ol></li><li>反対側の筋肉にある手順の4から9を繰り返し、次に、mを安楽死させる動物実験委員会の承認された方法によってウーズ。 </li><li>冷メタノールに浸漬（4℃）によって、または室温で20分間、4％パラホルムアルデヒド/脱イオン水溶液中のゼラチンコートしたスライドガラス上の組織を固定してください。 <ol><li>あるいは、灌流固定を採用してもよい。手順2の前に、1の5ミリリットル×4の5ミリリットル続く、0.1mMのCaCl 2および左心室を経由して2％のヘパリン生理食塩水、トリス緩衝と右心房に切開を行い、開胸を行い、灌流血管系％容器固定用パラホルムアルデヒド、最後に1の5ミリリットル×0.1 mMのCaCl 2 7と生理食塩水、トリス緩衝。 </li></ol></li><li>すぐに次の固定、4回20分間試料を洗う各0.1％サポニンと0.01Mのリン酸緩衝食塩水（PBS）を用いて行った。 </li></ol>

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著者らは、彼らが競合する金融利害関係はありません宣言。

ここに提示されたマウスspinotrapezius結紮モデルは動脈閉塞から生じることを機能的および構造的適応を研究するために効果的な小さな動物モデルである。このモデルは、広く使われている後肢虚血モデル4に相補的である、という点では高い空間分解能で無傷の微小血管のネットワークの全体の筋肉のビューを提供します。この筋肉がちょうど背部の皮膚の下に配置されているのでまた、それは生体顕微鏡でシリアルイメージングへ、そして灌流又は薄膜2を介して注入局所薬物送達へのアクセスが可能です。これらの機能は、それ動脈閉塞後の血管リモデリングと血管拡張機能における新規治療標的の影響を研究する中で魅力的な小さな動物モデルを確認します。 いくつかの主要なdにより後肢結紮モデルで得られたデータにspinotrapezius結紮モデルで得られたデータを比較する際にその注意を払って使用するようにしてくださいifferences。まず、spinotrapezius筋肉は筋肉を安定しており、彼らは機能とファイバ型分布の面で、脚の筋肉とは異なります。私たちのグループは、以前spinotrapezius筋における動脈結紮として後肢モデル1,8における大腿動脈結紮後に後足で観察された低酸素状態に比べて、よく発達した側副動脈網を有する株で小さいか無視できる低酸素状態を作成することを実証しています- 10。我々はまた、C57BL / 6マウスに比べてspinotrapezius結紮モデルは毛細血管担保と既存細動脈コネクション3の拡大によりC57BL / 6改造によってBalb / cマウスのネットワーク改造で、Balb / cマウスの異なるリフォーム応答を生成することが示されている。これらの観察および後肢結紮モデルで作られたものとの間に興味深い平行があり、ここで、Balb / cマウスをC57BL / 6マウス9,11,12に比べライゲーション後の長期灌流回復を体験&lt;/&gt;（商標）。我々はまだspinotrapezius結紮モデルにおいて、これらの予測変数をテストしていないものの、組織虚血、マウスの13歳性別14、病気15の存在の他のモデルでも、動脈閉塞症に対する組織の反応に影響を与える。 第二に、spinotrapeziusモデルで連結されている動脈のサイズは大腿動脈よりも実質的に小さいため、ライゲーションはspinotrapeziusで、循環器ツリーの下位レベルで、 すなわち 、さらに下流にある小さな組織の体積に影響を与える後肢3と比較。この介入にそれぞれの生理学的反応（ 例えば、血管リモデリング）を比較するとき、したがって、これら2つのモデルでライゲーションの場所における解剖学的な違いを考慮する必要があります。 第三に、spinotrapeziusの薄さは、酸素が隣国から組織のunperfused部分に到達することを許すことができる3上述のように後肢モデルで組み合わさ虚血および低酸素症に比べて組織。第四に、ライゲーションのspinotrapezius下流の部分への流れの回復は後肢ライゲーションよりも高速です。 spinotrapezius結紮モデルはユニークな慢性的なモデルであり、虚血再灌流障害の一過性動脈閉塞やモデルの他のモデルと混同してはいけません。我々は、これらの条件の種類に対応するため、このモデルを適応させることが可能に考慮するが、これは、本明細書で提示された仕事の範囲の外にあります。最後に、私たちは若いとマウスそれ以外の場合は健康や高い心拍数5のような固有の生理的な限界のために利用する場合は特に直接、ヒトでの虚血性疾患の臨床症状には、このモデルでは前臨床観察を関連を警戒。それにもかかわらず、我々は、ライゲーションに組織応答の基本的なメカニズムを明らかにし、潜在的に識別するための貴重なツールとして、この新しいモデルを考えるを用いたin vivoの設定でrapeutic目標。 spinotrapeziusフィード動脈結紮手続において提供される手術のノートに加えて、（解剖学ノート（6A）、静脈（図9a）から動脈を区別する、および単一のリガチャ（11a）の使用）からプロシージャの利点のいくつかの他の側面議論。 まず、背脂肪パッドボーダー（または経皮視覚化が不可能な場合は肩甲骨に尾数mm）上で行われ、最初の切開は、理想的には外科医が快適である限り小さくし、必要に応じて手順の間に展開されます。この慣行は、外科医のために便利である切開を閉じるために必要な縫合を最小限に手続き時間を短縮し、リカバリ中にも動物への刺激が少ないです。筋肉が拡張されたフィールドで見つけることが容易になることができるので、別の方法として、より大きな皮膚切開は、外科医の好みに応じて適切であるかもしれません。この場合には、切開月背骨に向かって折りたたみ可能にするために内側オープンフェースで馬蹄形の恩恵を受ける。皮膚切開を行うと表面の血管が損傷して出血を引き起こしている場合、セカンダリ皮膚の層を通って延びているが、滅菌ガーゼで軽く圧力を適用し、止血のための時間を提供します。 また、ノートのは、必要最小限の力で組織を処理するために重要であり、可能な限り近い筋の外側縁へと離れて、意図虚血領域からピンセットで保持します。この習慣は動脈結紮によって誘発血管リモデリング応答を混乱かもしれない追加の炎症媒介組織反応につながる可能性挫滅を回避するのに役立ちます。 結論として、我々は細動脈の結紮に血管や組織の応答を調べるための外科的モデルとしてマウスspinotrapezius筋肉の使用を実証している。このモデルは、（たとえば、血管の変化の生体内評価に適しています例えば、機能的血管拡張）、および血管の変化の ex vivo での評価（例えば、血管網の免疫蛍光イメージングと定量）について。両方の前臨床および臨床研究では、細動脈の閉塞（ヒトではマウスやアテローム性動脈硬化プラークのライゲーションなどを通じて）への個々の反応は、自分の年齢に依存していることが実証されている疾患の有無（ 例えば糖尿病）閉塞動脈の直径、個々の遺伝子構造、及び11月15日組織の代謝要求。などここで提示されるものとマウスモデルでは、これらの複雑な関係に捜査を容易に株特異的解剖学的および遺伝的差異および疾患特異的な表現型の研究を利用する。

慢性虚血の動物モデルは、末梢動脈疾患、冠動脈疾患、脳血管疾患などの虚血性疾患の病態生理を研究するための貴重なツールです。げっ歯類では、人間のように、動脈閉塞は動脈形成と血管新生を含む、血管網の構造的な改造につながる。健康で若い患者では、この改造は、虚血誘発傷害から組織を救出するために十分なことができますが、糖尿病などの併存疾患が深刻な改造と回復を脅かす可能性があります。血管リモデリングイベントのメカニズムを理解することは、これらの内因性血管再生プロセスを刺激する治療法を開発するために不可欠です。 現時点では、後肢の大腿動脈結紮または切除が4,5小動物の慢性虚血誘発性血管リモデリングを研究するための標準的な技術である。の直径は、接続性、および反応性の解析ライゲートした大腿動脈の血管網の下流を構成する微小血管は、しかし、筋肉の厚さに起因することは困難である。この安定背肉1における横送り動脈の一方的なライゲーション：我々は、マウスspinotrapezius筋における動脈結紮モデルを開発した。比較的薄いspinotrapezius（60〜200μm）は全組織にわたる血管リモデリングイベントの詳細な検査を可能にする、単一セルの解像度を持つネットワーク全体のトポロジを評価するための専用の顔の免疫染色に適している。 spinotrapeziusも表面的でアクセス可能であり、したがって、その血管は容易に血管反応性に改造や動脈結紮の影響の効率的な特性のために、生体内顕微鏡によって観察されています。 本稿では、詳細に記述し、マウスspinotrapezius動脈結紮モデルを示しています。 vivoおよびex vivoで 、私の中で両方の評価は、次の手術thodsは虚血状態6、全体の筋肉の微小血管網の免疫蛍光イメージングの下で損なわれることが示されている機能的な血管拡張の測定を含む、記載されている。また、モデルの有用性を実証するための2つの別々のパイロット試験の結果が含まれています。まず、C57BL / 6マウス（ 図2B）における血管蛇行の統計的に有意な増加を誘導するために動脈結紮モデルを利用した。細動脈の血行における動脈形成時のねじれが大きくなる。担保動脈の欠如（ 例えば BALB / C）に起因する虚血に対してより脆弱である他のマウス系統では、毛細管動脈血は10を観察される。毛細管動脈血が増加直径およびα-平滑筋アクチン反応の開発により検出される。第二に、筋肉の機能的電気刺激はspinotrapeziの端末動脈に血管拡張につながる私達（ 図3B）。

<table border="1"><tbody><tr><td> 名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>アイリスはさみ</td><td> FST </td><td> 14090から09 </td><td>タイプ：ツール</td></tr><tr><td>サイズ7鉗子</td><td> FST </td><td> 11271から30 </td><td>タイプ：ツール</td></tr><tr><td>サイズ5鉗子</td><td> FST </td><td> 11251から20 </td><td>タイプ：ツール</td></tr><tr><td>春のはさみ</td><td> Roboz </td><td> RS5671 </td><td>タイプ：ツール</td></tr><tr><td>マイクロプローブ</td><td> FST </td><td> 10140から03 </td><td>タイプ：ツール ストレートプローブで置換されてもよい</td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td> FST </td><td> 12500から12 </td><td>タイプ：ツール</td></tr><tr><td>誘導室</td><td> DistのJD医療。株式会社</td><td> IC-1086 </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td>アイジェル</td><td> Dechra </td><td> NDC 17033-211-38 </td><td>タイプ：試薬</td></tr><tr><td>熱パッド</td><td> FST </td><td> 21060から01 </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td>直腸温度プローブ</td><td> FST </td><td> 21060から01 </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td>刺激電極</td><td> FHC </td><td> UEWSGCSE0N1M </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td> Artisanのポリマークレイ</td><td> Polyform </td><td> N / A </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td> PowerLabデータ収録システム</td><td> ADInstruments </td><td> MLの845 </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td>刺激アイソレータ</td><td> ADInstruments </td><td> FE 180 </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td> LabChart </td><td> ADInstruments </td><td> ML S060 / 7 </td><td>種別：ソフトウェア</td></tr&gt; <tr><td>反射光蛍光顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> BFXM </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td>高MW蛍光デキストラン</td><td>シグマ</td><td> FD250S-100MG </td><td>タイプ：試薬</td></tr><tr><td>ビデオキャリパー</td><td>コロラドビデオ</td><td> 308 </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td>自動血管分析（AVA） </td><td> Microvision社メディカル</td><td></td><td>種別：ソフトウェア</td></tr><tr><td>抗αSMA共役フルオロフォア</td><td>シグマ</td><td> 1A4-Cy3を</td><td>タイプ：試薬 クローン、1:100 </td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> BFXM </td><td>タイプ：道具</td></tr><tr><td>高分子蛍光デキストラン</td><td>シグマ</td><td> FD250S-100MG </td><td>タイプ：試薬</td></tr></tbody></table>

murine spinotrapezius model to assess the impact of arteriolar ligation on microvascular function and remodeling

ネズミspinotrapeziusはT3からL4まで延びて薄く、表面的な骨格支持筋であり、背側皮膚切開で簡単にアクセスできます。そのユニークな解剖学的構造は、虚血性損傷とその後の血管リモデリングの調査のためspinotrapeziusが便利になります。ここでは、私たちの研究チームが開発し、1月3日以前に出版されたネズミspinotrapezius筋における動脈結紮モデルを示しています。そのようなBalb / cマウスなどの特定の脆弱なマウス系統については、この結紮手術は確実に骨格筋虚血を作成し、血行再建を刺激する治療法を調査するためのプラットフォームとして機能します。評価の方法はまた、生体内および共焦点顕微鏡の使用を含む、実証されています。 spinotrapeziusはよく、そのアクセシビリティ（浅背解剖学）との相対的な薄さ（60〜200ミクロン）のためにこのようなイメージング研究に適しています。 spinotrapezius筋肉は容易に顔途中でマウントすることができ組織学的切片なし全筋肉の微小血管網のイメージング。我々は、機能的な血管拡張の手順を次のメトリックを取得する生体顕微鏡を使用することを記載し、具体的には、筋収縮の結果としてarterilar直径の増加。我々はまた、研究や共焦点顕微鏡を使用することを免疫染色に必要な前駆体、組織を採取し、固定するための手順を示しています。

ライゲーションを受けるspinotrapezius筋肉を供給する主要な動脈の外科ビューは、関心のある領域を示すラベルと、 図1に示されている。一週間後にライゲーションライゲーション動脈から直接下流に位置する筋肉の収穫と免疫領域の例共焦点画像を図2Aに示されています。平滑筋細胞（赤色）を発現している平滑筋α-アクチンを含む拡大された担保の細動脈は結紮後に蛇行特性を表示します。ライゲートした筋肉内の血管経路の長さとコードの距離（すなわち、同じ容器のパスの端点上に延びる線）との比として報告血管蛇行は、（右）（; n = 8の図2B）非連結反対側の筋肉への相対的な強化されてい図3は、終末細動脈血管拡張機能が生体顕微鏡を用いて測定されたパイロット·スタディの結果を示しています。予想されるように、細動脈のディ<html> ameterが大幅に電気刺激によって誘発される筋収縮後に増加します。 <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1.jpg" alt="図1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1highres.jpg"/> 図1。反映spinotrapezius筋肉と送り動脈の手術野。フィード動脈はA0で示される2つの場所で連結する。これらの合字間や血流の閉塞後、動脈が示さサイトでは、Dが概説し、spinotrapezius筋肉に、AがCで概説腹脂肪、動脈からの遷移のターゲットセグメントを示した部位に離断されている矢印Bの流れの方向は破線の矢印Eで示されているとghres.jpg &quot;/&gt; 図2。蛇行のパイロットスタディのためspinotrapezius筋微小血管ネットワークの共焦点画像。（）を回収し、全マウントの筋肉は平滑筋α-アクチンについて免疫染色し、共焦点顕微鏡を用いて画像化した。視野がライゲーションされた細動脈後1週間ライゲーションの直接下流に位置する筋肉の領域を示している。 。曲がりくねった血管た（p = 0.035; 1スチューデントのt検定）（B）のパイロットスタディの結果が大幅に増加を示してライゲーションの結果として筋肉に明白であるに血管経路の長さによって測定された蛇行はライゲート筋肉で毛細血管によって示される反対側の対照と比較して、C57BL / 6マウス（n = 8）での裁判のための臍帯距離比。 <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3.jpg" alt="図3" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3highres.jpg"/> ふぃぎゅRE 3。 in vivoでの spinotrapezius細動脈の機能的血管拡張の生体顕微鏡イメージング、。（）安静時spinotrapeziusターミナル動脈の代表的な顕微鏡写真（左）と、直ちに8 Hzの筋収縮（右）の中止に続く。安静時（b）端子細動脈径（ 8.5±0.5μmで、左）と直後（11±1μmで、真ん中）が有意に細動脈径（増加した筋収縮の90秒は、p = 0.032; 1尾）は、BALB / cマウスのt-検定ペアリング（N = 6）。変化率は（右）を示した。

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Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

我々は、ステップバイステップの手順および必要な器具の説明など、ネズミspinotrapezius筋における新規動脈結紮モデルを示しています。我々は、手術や生体共焦点顕微鏡を用いた血管網の再構築と機能的な血管拡張に関連する関連するアウトカムの測定について説明します。

微小血管機能およびリモデリングに動脈結紮の影響を評価するためにネズミSpinotrapeziusモデル

The murine spinotrapezius is a thin, superficial skeletal support muscle that extends from T3 to L4, and is easily accessible via dorsal skin incision. ...

murine-spinotrapezius-model-to-assess-impact-arteriolar-ligation-on

Research

JoVE Journal

Medicine

12.0K ビュー.  University of Virginia. 我々は、ステップバイステップの手順および必要な器具の説明など、ネズミspinotrapezius筋における新規動脈結紮モデルを示しています。我々は、手術や生体共焦点顕微鏡を用いた血管網の再構築と機能的な血管拡張に関連する関連するアウトカムの測定について説明します。

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Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

心筋梗塞のマウスモデルにおける冠動脈結紮および心筋内注入

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

医学

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

微小血管と内皮機能の非侵襲的評価

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

左前下の動脈の結紮を通して心筋虚血再灌流傷害のマウスモデル

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is also a valuable model system to test, and to evaluate therapeutics and drugs that negate maladaptive remodeling in the vessel. The injury, or barotrauma, in the vessel lumen caused by an inflated balloon via an inserted catheter induces subsequent neointimal growth, often leading to hyperplasia or thickening of the vessel wall that narrows, or obstructs the lumen. The method described here is sufficiently sensitive, and the results can be obtained in relatively short time (2 weeks after the surgery). The efficacy of the drug or therapeutic against the induced-remodeling can be evaluated either by the post-mortem pathological and histomorphological analysis, or by ultrasound sonography in live animals. In addition, this model system has also been used to determine the therapeutic window or the time course of the administered drug. These studies can leadto the development of a better administrative strategy and a better therapeutic outcome. The procedure described here provides a tool for translational studies that bring drug and therapeutic candidates from bench research to clinical applications.

The rat carotid balloon injury model described below allows researchers to evaluate drugs or therapeutics that negate injury-induced arterial hyperplasia. Detailed pre-surgical preparation, surgical procedure, and post-surgical cares of the animal are described.

ラット頸動脈バルーン損傷モデルは、抗血管リモデリングの治療薬をテストします

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by reduced blood supply to the heart, resulting in the loss of oxygen to and the ensuing necrosis of the heart muscle. The MI model has gained popularity for its use as a short-term ischemia-reperfusion model and a long-term permanent ligation model. Below, we describe a reliable method for the permanent ligation of the LAD. With mouse genetic engineering technology becoming more advanced, and with an increasing availability of quality murine surgical instruments, the mouse has become a popular model for MI surgeries. Our surgical model incorporates the use of an easily reversible anesthetic for the rapid recovery of the mouse; a minimally invasive endotracheal intubation without involving a tracheotomy; and a thoracentesis through the original thoracotomy site without creating an additional incision in the chest, as is done in some other methods, to effectively remove excess blood and air from the chest cavity. This method is comparatively less invasive than other methods, which dramatically reduces surgical and post-surgical complications and mortality and improves reproducibility.

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

We provide a reliable method for left anterior descending artery (LAD) ligation in a mouse model. This method is comparatively less invasive than other methods, involving endotracheal intubation, a left-sided thoracotomy approach, and thoracentesis. This method can be used as a model for both acute and chronic myocardial infarction (MI).

マウス左前方降順（LAD）冠動脈結紮：心筋梗塞のための改善と簡略化されたモデル

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

顕微鏡を用いたひと脂肪組織血管機能評価

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

左前皮下冠動脈の永久的なライゲーションを用いたマウス心筋梗塞モデル

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

ラット膝の周期的負荷誘発関節内軟骨病変モデルを生成するための非侵襲的方法

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In order to explore the pathophysiological changes after myocardial infarction and design future treatments, research models of MI are required. Permanent ligation of the left coronary artery (LCA) in mice is a popular model to investigate cardiac function and ventricular remodeling post MI. Here we describe a less invasive, reliable, and reproducible surgical murine MI model by permanent ligation of the LCA. Our surgical model comprises of an easily reversible general anesthesia, endotracheal intubation that does not require a tracheotomy, and a thoracotomy. Electrocardiography and troponin measurement should be performed to ensure MI. Echocardiography at day 28 after MI will discern heart function and heart failure parameters. The degree of cardiac fibrosis can be evaluated by Masson's trichrome staining and cardiac MRI. This MI model is useful for studying the pathophysiological and immunological alterations after MI.

Presented here is a surgical procedure for permanent ligation of the left coronary artery in mice. This model can be used to investigate the pathophysiology and associated inflammatory response after myocardial infarction.

左冠動脈結紮術:心筋梗塞の外科用マウスモデル

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...