אנו מכירים קווין מקלאוד לשימוש במוזיקה המורשית המלאי שלו בוידאו הקשור, לרבות (לפי סדר הופעתם) &quot;טרקלין שדה התעופה,&quot; רצועות &quot;טפט,&quot; ואת &quot;מלודרמת הערב.&quot; אנחנו רוצים גם להודות Ndubisi Okeke ופרדריק Torstrick על סיועם בוידאו הניתוח.

<ol>
	<li>Bailey, A. M., O'Neill, T. J., Morris, C. E., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteriolar+Remodeling+Following+Ischemic+Injury+Extends+from+Capillary+to+Large+Arteriole+in+the+Microcirculation.">Arteriolar Remodeling Following Ischemic Injury Extends from Capillary to Large Arteriole in the Microcirculation.</a> Microcirculation. 15, 389-404 (2010).</li><li>Bruce, A. C., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exogenous+Thrombin+Delivery+Promotes+Collateral+Capillary+Arterialization+and+Tissue+Reperfusion+in+the+Murine+Spinotrapezius+Muscle+Ischemia+Model.">Exogenous Thrombin Delivery Promotes Collateral Capillary Arterialization and Tissue Reperfusion in the Murine Spinotrapezius Muscle Ischemia Model.</a> Microcirculation. 19, 143-154 (2012).</li><li>Mac Gabhann, F., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collateral+capillary+arterialization+following+arteriolar+ligation+in+murine+skeletal+muscle.">Collateral capillary arterialization following arteriolar ligation in murine skeletal muscle.</a> Microcirculation. 17, 333-347 (2010).</li><li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Model+of+Hindlimb+Ischemia.">Murine Model of Hindlimb Ischemia.</a> J. Vis. Exp. (23), e1035 (2009).</li><li>Madeddu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+myocardial+and+limb+ischemia:+diagnostic+end-points+and+relevance+to+clinical+problems.">Murine models of myocardial and limb ischemia: diagnostic end-points and relevance to clinical problems.</a> Vascul. Pharmacol. 45, 281-301 (2006).</li><li>Cardinal, T. R., Kurjiaka, D. T., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+hindlimb+ischemia+impairs+functional+vasodilation+and+vascular+reactivity+in+mouse+feed+arteries.">Chronic hindlimb ischemia impairs functional vasodilation and vascular reactivity in mouse feed arteries.</a> Front. Physio. 2, 91 (2011).</li><li>Sefcik, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+Activation+of+Sphingosine+1-Phosphate+Receptors+1+and+3+Promotes+Local+Microvascular+Network+Growth.">Selective Activation of Sphingosine 1-Phosphate Receptors 1 and 3 Promotes Local Microvascular Network Growth.</a> Tissue Eng. Part A. 17, 617-629 (2011).</li><li>Deindl, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Ischemia+and+of+Hypoxia-Inducible+Genes+in+Arteriogenesis+After+Femoral+Artery+Occlusion+in+the+Rabbit.">Role of Ischemia and of Hypoxia-Inducible Genes in Arteriogenesis After Femoral Artery Occlusion in the Rabbit.</a> Circulation Research. 89, 779-786 (2001).</li><li>Chalothorn, D., Zhang, H., Smith, J. E., Edwards, J. C., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloride+Intracellular+Channel-4+Is+a+Determinant+of+Native+Collateral+Formation+in+Skeletal+Muscle+and+Brain.">Chloride Intracellular Channel-4 Is a Determinant of Native Collateral Formation in Skeletal Muscle and Brain.</a> Circulation Research. 105, 89-98 (2009).</li><li>Scholz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+Arteriogenesis+and+Angiogenesis+to+Postocclusive+Hindlimb+Perfusion+in+Mice.">Contribution of Arteriogenesis and Angiogenesis to Postocclusive Hindlimb Perfusion in Mice.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 34, 775-787 (2002).</li><li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle-specific+genetic+determinants+contribute+to+the+differential+strain-dependent+effects+of+hindlimb+ischemia+in+mice.">Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice.</a> Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).</li><li>Dokun, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li><li>Faber, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+causes+collateral+rarefaction+and+increased+severity+of+ischemic+injury+in+multiple+tissues.">Aging causes collateral rarefaction and increased severity of ischemic injury in multiple tissues.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 31, 1748-1756 (2011).</li><li>Peng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+affect+blood+flow+recovery+in+a+mouse+model+of+hindlimb+ischemia.">Gender differences affect blood flow recovery in a mouse model of hindlimb ischemia.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 300, 2027-2034 (2011).</li><li>Li, Y., Guan, H., Hazarika, S., Liu, C., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+angiogenesis+following+hind-limb+ischemia+in+diabetes+mellitus+mice.">Impaired angiogenesis following hind-limb ischemia in diabetes mellitus mice.</a> Chin. Med. Sci. J. 22, 232-237 (2007).</li></ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

המודל העכברי קשירת spinotrapezius מוצג כאן הוא מודל של בעלי חיים קטן יעיל כדי ללמוד את העיבודים הפונקציונליים ומבניים הנובעים מחסימת עורקים. מודל זה הוא משלים למודל איסכמיה בשימוש הנרחב hindlimb 4, בכך שהוא מספק תצוגה כולו שרירים של רשתות כלי דם שלמות עם רזולוציה מרחבית גבוהה. יתר על כן, בגלל שריר זה נמצא מתחת לעור הגב, הוא נגיש להדמיה סידורית עם מיקרוסקופיה intravital, ועד להפצת סמים מקומיות באמצעות superfusion או השתלת סרט דקה 2. תכונות אלו הופכות את מודל חיה קטן מושך שבכדי לחקור את ההשפעות של מטרות טיפוליות חדשניות בשיפוץ והרחבת כלי דם כלי דם תפקודית בעקבות חסימת עורקים. שימו לב שיש להשתמש בזהירות כאשר משווים נתונים רכשו במודל הקשירה spinotrapezius לנתונים שנרכשו במודל קשירת hindlimb בשל מספר המפתח דifferences. ראשית, את שרירי spinotrapezius הם ייצוב שרירים, והם שונים מאת שרירי הרגליים במונחים של פונקציה והפצת סוג סיב. הקבוצה שלנו הוכיחה בעבר כי קשירת ארטריולות בשריר spinotrapezius יוצרת היפוקסיה פחות או זניחה בזנים עם רשתות מפותחות טחונות arteriolar, בהשוואה ליפוקסיה נצפתה בhindpaw בעקבות קשירת עורק הירך במודל hindlimb 1,8 - 10. יש לנו גם הראו כי מודל הקשירה spinotrapezius מייצר תגובה שונה שיפוץ בעכברי BALB / ג לעומת C57bl / 6 עכברים, עם שיפוץ רשתות עכברי BALB / ג ידי collateralization נימים ושיפוץ C57bl / 6 על ידי גדלה של קשרים קיימים arteriolar 3. יש מקבילה מעניינת בין תצפיות אלה ואלה נעשו במודלי הקשירה hindlimb, שבו עכברי BALB / ג חווים התאוששות זלוף ממושכת לאחר קשירה לעומת C57bl / 6 עכברים 9,11,12 &lt;/ Sup&gt;. בדגמים אחרים של איסכמיה רקמות, גיל 13 עכבר מגדר 14 ונוכחות של מחלה 15 גם להשפיע תגובות ההרקמות אל ארטריולות חסימה, למרות שאנחנו עדיין לא נבחנו עדיין מנבאים אלה במודל הקשירה spinotrapezius. שנית, בגודל של העורק שאת הגבעול במודל spinotrapezius הוא קטן באופן משמעותי מעורק הירך, ולכן, הקשירה משפיעה נפח רקמה קטנה יותר כי הוא עוד יותר במורד זרם, כלומר ברמה נמוכה של עץ הדם, בspinotrapezius לעומת 3 hindlimb. לפיכך, הבדל אנטומי במיקום של הקשירה בשני דגמים אלה צריכים להילקח בחשבון כאשר משווים את התגובות הפיזיולוגיות המתאימות (למשל שיפוץ כלי דם) להתערבות זו. שלישית, הרזון של spinotrapezius רשאי להתיר חמצן להגיע unperfused החלק מהרקמה מהשכנותרקמה, בהשוואה לאיסכמיה והיפוקסיה המשולבות במודל hindlimb כאמור לעיל 3. רביעית, ההתאוששות של זרימה לחלק מזרם spinotrapezius של הקשירה היא מהירה יותר מאשר בקשירת hindlimb. מודל הקשירה spinotrapezius הוא מודל ייחודי כרוני ולא צריך להיות מבולבל עם דגמים אחרים של חסימת עורקים זמניים או מודלים של פגיעת reperfusion איסכמיה. אנו רואים את זה אפשרי להתאים את הדגם הזה כדי להכיל סוגים אלה של תנאים, אבל זה מחוץ להיקף העבודה שהוצגה במסמך זה. לבסוף, אנו מזהירים מפני התייחסות ישירה תצפיות קדם קליניות במודל זה לביטויים קליניים של מחלה איסכמית בבני אדם, במיוחד כאשר ניצול צעיר ואחרת עכברים בריאים והן בשל המגבלות הפיזיולוגיות הטבועות, כגון קצב לב גבוה יותר 5. עם זאת, אנו רואים במודל חדש זה ככלי רב ערך לגילוי מנגנונים בסיסיים של תגובות רקמות לקשירה וזיהוי פוטנציאליעדי rapeutic בהגדרת vivo ב. בנוסף להערות הניתוחיות הניתנות בהליך spinotrapezius הזנת עורק הקשירה (הערת אנטומי (6 א), הבחנת העורק מוריד (9 א), ושימוש בחוט תלייה בודד (11a)), כמה היבטים אחרים של ההליך מהתועלת דיון. ראשית, החתך הראשוני נעשה מעבר לגבול כרית השומן הגבה (או זנב למ&quot;מ השכמה כמה, אם להדמיה דרך עור היא לא אפשרית) הוא עשה באופן אידיאלי קטן כמו המנתח הוא נוח איתו, והרחיב במהלך ההליך במידת צורך. פרקטיקה זו מצמצמת את התפרים נדרשו כדי לסגור את החתך, שהוא נוח למנתח, מפחיתה את זמן פרוצדורה, וגם פחות מעצבן לבעל החיים במהלך התאוששות. לחלופין, חתך בעור גדול יותר עשוי להיות מתאים בהתאם להעדפת מנתח, שכן השרירים יכולים להיות קלים יותר לאיתור בשדה מורחב. במקרה זה, החתך רשאיליהנות מצורת פרסה עם פנים פתוחים המדיאלי כדי לאפשר קיפול לכיוון עמוד השדרה. בזמן ביצוע החתך בעור ובהרחבה דרך שכבות עור משתיים, אם כלי משטח פגום וגורם לדימומים, להפעיל לחץ קל עם גזה סטרילית ולספק זמן לhemostasis. כן, יש לציין, חשוב להתמודד עם רקמת הכח המינימאלי הנדרש, ובכל מקום אפשרי להחזיק עם מלקחיים קרובים יותר לגבול הרוחב של השריר והרחק מאזור איסכמי המיועד. נוהג זה עוזר כדי למנוע פציעה למעוך, אשר יכול להוביל לתגובות רקמות דלקתיות בתיווך נוספות שעשויות לבלבל את תגובת כלי דם השיפוץ מעורר על ידי קשירת העורקים. לסיכום, יש לנו הפגנו שימוש בשרירי spinotrapezius העכבריים כמודל לבחינה כירורגית כלי דם ורקמות תגובות לקשירת ארטריולות. מודל זה מתאים להערכת intravital של שינויים בכלי דם (ללמשל הרחבת כלי דם, תפקודית), ולהערכת vivo לשעבר של שינויים בכלי דם (למשל, הדמיה ולכמת immunofluorescent של רשתות כלי דם). שני מחקרים קדם קליניים וקליניים הראו כי התגובה של פרט לחסימת ארטריולות (למשל באמצעות קשירה בעכברים או פלאק טרשת עורק בבני אדם) תלויה בגיל שלהם נוכחות או עדר של מחלה (למשל סוכרת) בקוטר של העורק החסום , את ההרכב הגנטי של הפרט, והדרישה המטבולית של הרקמה 11-15. מודלים עכבריים, כגון זו שהציגה כאן, לשווא את החוקר של הבדלים אנטומיים זן ספציפי וגנטיים ופנוטיפים מחלה ספציפיים, המאפשרים חקירת היחסים מורכבים אלה.

מודלים של בעלי חיים של איסכמיה הכרונית הם כלים רבים ערך לחקירת פתופיזיולוגיה של מחל איסכמי, כמו מחלת עורקים היקפיות, מחלת לב כלילית, מחלת כלי דם במוח ו. במכרסמים, כמו אצל בני אדם, חסימת עורקים מובילים לשיפוץ מבני של רשת כלי הדם, כוללת arteriogenesis ואנגיוגנזה. בחולים בריאים וצעירים יותר, שיפוץ זה יכול להיות מספיק כדי להציל את הרקמה מפגיעה מושרה איסכמיה, אבל תחלואות נלוות כגון סוכרת יכולות לפגוע קשות שיפוץ ושחזור. הבנת המנגנונים בבסיס אירועי שיפוץ כלי דם היא חיונית לפיתוח טיפולים שמגרים תהליכי revascularization אנדוגניים אלה. נכון לעכשיו, קשירת עורק ירך או כריתה בhindlimb היא הטכניקה הסטנדרטית ללימוד השיפוץ וסקולרית הנגרם איסכמיה כרוני בבעלי חיים 4.5 קטנים. ניתוח של הקוטר, קישוריות, ותגובתיות שלאת microvessels שמרכיב את זרם רשת כלי הדם של עורק הירך את הגבעול הוא קשה, עם זאת, בשל העובי של השרירים. פתחנו מודל ארטריולות קשירה בשריר spinotrapezius עכבר: קשירה חד צדדית של עורק ההזנה הרוחבית בשרירים מייצבים זה הגבה 1. את spinotrapezius הדק יחסית (60-200 מיקרומטר) הוא נוח לimmunostaining פן en להערכת טופולוגיית רשת שלמה עם החלטה מתא בודד, המאפשר בחינה מדוקדקת של אירועים וסקולריים שיפוצים בכל רחבי הרקמה. Spinotrapezius גם שטחי ונגיש, ובכך כליו בקלות ניתנים לצפייה על ידי מיקרוסקופ intravital, לאפיון יעיל של ההשפעה של שיפוץ וקשירת ארטריולות על תגובתיות כלי דם. בדו&quot;ח זה, אנו מתארים בפירוט ונדגים את מודל קשירת ארטריולות spinotrapezius עכבר. שניהם in vivo ו vivo לשעברthods של הניתוח הבא הערכה מתוארת, לרבות מדידה של התרחבות פונקציונלית, אשר הוכחו להיפגע בתנאי איסכמי 6, והדמיה של רשתות כלי דם immunofluorescent שלמי שרירים. אנו גם תוצאות של שני מחקרי טייס נפרדים כדי להדגים את התועלת של המודל. ראשית, אנו מנוצלים מודל קשירת העורקים לגרום לעלייה משמעותית מבחינה סטטיסטית בtortuosity הכלי בC57BL / 6 עכברים (איור 2 ב &#39;). עליות Tortuosity במהלך arteriogenesis בטחונות עורקיק. בזני עכברים אחרים, שהם פגיעים יותר לאיסכמיה עקב היעדר arterioles טחונות (למשל BALB / ג), arterialization נימים נצפתה 10. arterialization נימים הוא זוהה על ידי קטרים ​​מוגברים והפיתוח של תגובתיות יקטין שריר α החלקה. שנית, גירוי חשמלי פונקציונלי של השריר גורם להרחבת כלי דם בarterioles הטרמינל של spinotrapezi(איור 3 ב &#39;).

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> מספרי איריס </td><td> FST </td><td> 14090-09 </td><td> סוג: כלי </td></tr><tr><td> גודל 7 מלקחיים </td><td> FST </td><td> 11271-30 </td><td> סוג: כלי </td></tr><tr><td> גודל 5 מלקחיים </td><td> FST </td><td> 11251-20 </td><td> סוג: כלי </td></tr><tr><td> מספרי האביב </td><td> Roboz </td><td> RS5671 </td><td> סוג: כלי </td></tr><tr><td> Microprobe </td><td> FST </td><td> 10140-03 </td><td> סוג: כלי ניתן להחליף עם חללית ישר </td></tr><tr><td> בעל מחט </td><td> FST </td><td> 12500-12 </td><td> סוג: כלי </td></tr><tr><td> קאמרי אינדוקציה </td><td> JD רפואי Dist. ושות, Inc </td><td> IC-1086 </td><td>סוג: ציוד </td></tr><tr><td> ג&#39;ל עיניים </td><td> Dechra </td><td> NDC 17033-211-38 </td><td> סוג: מגיב </td></tr><tr><td> מחממי כרית </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> בדיקה רקטלית טמפרטורה </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> אלקטרודות גירוי </td><td> Fhc </td><td> UEWSGCSE0N1M </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> חימר הפולימרים של האומן </td><td> Polyform </td><td> N / </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> מערכת רכישת נתוני PowerLab </td><td> ADInstruments </td><td> ML 845 </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> מבודד גירוי </td><td> ADInstruments </td><td> FE 180 </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> LabChart </td><td> ADInstruments </td><td> ML S060 / 7 </td><td> סוג: תוכנה </td></tr&gt; <tr><td> מיקרוסקופ פלואורסצנטי משתקף אור </td><td> אולימפוס </td><td> BFXM </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> MW הגבוה הניאון dextran </td><td> סיגמא </td><td> FD250S-100 מ&quot;ג </td><td> סוג: מגיב </td></tr><tr><td> מחוגה וידאו </td><td> קולורדו וידאו </td><td> 308 </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> ניתוח כלי דם אוטומטי (AVA) </td><td> Microvision רפואי </td><td></td><td> סוג: תוכנה </td></tr><tr><td> Fluorophore מצומדת אנטי αSMA </td><td> סיגמא </td><td> 1A4-Cy3 </td><td> סוג: מגיב משובט, 1:100 </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ פלורסנט </td><td> אולימפוס </td><td> BFXM </td><td> סוג: ציוד </td></tr><tr><td> גבוה משקל מולקולרי פלואורסצנטי dextran </td><td> סיגמא </td><td> FD250S-100 מ&quot;ג </td><td> סוג: מגיב </td></tr></tbody></table>

murine spinotrapezius model to assess the impact of arteriolar ligation on microvascular function and remodeling

Spinotrapezius העכברי הוא שריר רזה, שטחי שלד תמיכה שמשתרע בין T3 לL4, והוא נגיש בקלות דרך חתך בעור גב. האנטומיה הייחודית שלו הופכת את spinotrapezius שימושי לחקירה של פגיעת איסכמית ושיפוץ כלי דם לאחר מכן. הנה, אנחנו מדגימים את מודל קשירת ארטריולות בשריר spinotrapezius העכברי שפותח על ידי צוות המחקר שלנו ושפורסם בעבר 1-3. לזנים מסוימים פגיעים עכבר, כגון עכבר BALB / ג, ניתוח קשירה זו יוצר אמין איסכמיה שרירי שלד ומשמש כפלטפורמה לבירור טיפולים שמגרים revascularization. שיטות של הערכה גם הם הפגינו, כוללים שימוש במיקרוסקופ intravital וconfocal. Spinotrapezius הוא גם מתאים למחקרי הדמיה כאלה בשל נגישותו (האנטומיה הגבה שטחית) והרזון יחסי (60-200 מיקרומטר). שרירי spinotrapezius ניתן להרכיב en פנים, בהנחייתהדמיה של רשתות כלי דם כולו שרירים ללא חתך היסטולוגית. אנו מתארים את השימוש במיקרוסקופ intravital לרכוש מדדים הבאים הליך התרחבות פונקציונלית; במיוחד, גידול בקוטר arterilar כתוצאה מהתכווצות שרירים. אנחנו גם להדגים את הנהלים לקצירה ותיקון הרקמות, מבשר צורך immunostaining מחקרים והשימוש במיקרוסקופיה confocal.

נוף כירורגית של העורק הראשי מאכיל את שריר spinotrapezius שעובר קשירה מוצג באיור 1, עם תוויות המצביעות על תחומי העניין. תמונת confocal דוגמה לאזור שנקטף וimmunostained של שריר הממוקם ישירות במורד זרם מעורקי גבעול שבוע לאחר הקשירה מוצגת באיור 2 א. arterioles ביטחונות מוגדלים המכיל שריר אלפא יקטין חלק להביע תאי שריר חלק (אדום) להציג tortuosity האופייני לאחר קשירה. tortuosity כלי, דיווח כיחס בין אורך נתיב כלי ומרחק כבל (כלומר, הקו המשתרע על אותן נקודתי קצה נתיב כולים), בשריר הגבעול (מימין) הוא משופר ביחס לשריר נגדי unligated (התרשים 2B, n = 8) . איור 3 מציג את התוצאות של מחקר פיילוט שבי התרחבות פונקציונלית מסוף עורקיק נמדדה באמצעות מיקרוסקופ intravital. כצפוי, ארטריולות די<html> ameter מגביר באופן משמעותי בעקבות התכווצות שרירי גירוי-Induced חשמל. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1.jpg" alt="איור 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1highres.jpg"/> איור 1. שדה ניתוח של שריר spinotrapezius משתקף ועורק הזנה. עורק הזנת גבעול בשני המקומות שצוינו על ידי A0. בין הקשירות האלה ואחרי החסימה של זרימת דם, עורק הצניעות הצטלב באתר שצוין על ידי א הפלח הממוקד של המעברים העורקים מכרית השומן הבטנית, שמתוארת על ידי C, לתוך שריר spinotrapezius, שתואר על ידי ד &#39;, באתר מצוין עם כיוון זרימת B. חץ מצוין באמצעות חץ המקווקו E. ghres.jpg &quot;/&gt; איור 2. תמונת confocal של רשת כלי דם שרירי spinotrapezius למחקר פיילוט של tortuosity. () נקטפה ושריר כולו היה רכוב immunostained לשריר החלק אלפא יקטין והדמיה באמצעות מיקרוסקופיה confocal. שדה הראיה מציג את האזור של שריר הממוקם ישירות במורד זרם של קשירת גבעול עורקיק 1 שבוע הודעה. כולים מפותלים ניכרים בשריר כתוצאה מהקשירה (ב &#39;) תוצאות מחקר פיילוט להראות גדלו באופן משמעותי (p = 0.035; מבחן t של סטודנט זנב 1). tortuosity הפגין microvessels בשריר הגבעול כפי שנמדד על ידי אורך נתיב כלי ל יחס מרחק כבל לניסוי של עכברי C57BL / 6 (n = 8) בהשוואה לשליטה נגדית. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3.jpg" alt="איור 3" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3highres.jpg"/> Figuמחדש 3. הדמיה מיקרוסקופית Intravital של התרחבות תפקודית בarterioles spinotrapezius, in vivo. () photomicrographs היציג של arterioles המסוף spinotrapezius במנוחה (משמאל) ולאחר הפסקת התכווצות שרירי הרץ 8 (מימין) באופן מיידי. (ב) קוטר המסוף עורקיק במנוחה ( 8.5 ± 0.5 מיקרומטר, משמאל) ומייד בא (11 ± 1 מיקרומטר, באמצע) 90 שניות של התכווצות שרירים, אשר הגדילו באופן משמעותי קוטר ארטריולות (p = 0.032; 1-זנב לזווג מבחן t) בעכברי BALB / C (n = 6). שינוי באחוזים מצוין (מימין).

Watch this Scientific Journal Video about Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling at JoVE.com

Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

אנחנו מדגימים את מודל רומן עורקי קשירה בשריר spinotrapezius עכברי, לרבות הליך צעד אחר צעד ותיאור של מכשור הנדרש. אנו מתארים את הניתוח ומדידות תוצאה רלוונטיות הנוגעות לשיפוץ כלי דם והרחבת כלי דם ברשת פונקציונלית באמצעות מיקרוסקופ intravital וconfocal.

דגם Spinotrapezius Murine כדי להעריך את ההשפעה של קשירת arteriolar על תפקוד כלי דם וRemodeling

The murine spinotrapezius is a thin, superficial skeletal support muscle that extends from T3 to L4, and is easily accessible via dorsal skin incision. ...

murine-spinotrapezius-model-to-assess-impact-arteriolar-ligation-on

Research

JoVE Journal

Medicine

12.0K Views.  University of Virginia. אנחנו מדגימים את מודל רומן עורקי קשירה בשריר spinotrapezius עכברי, לרבות הליך צעד אחר צעד ותיאור של מכשור הנדרש. אנו מתארים את הניתוח ומדידות תוצאה רלוונטיות הנוגעות לשיפוץ כלי דם והרחבת כלי דם ברשת פונקציונלית באמצעות מיקרוסקופ intravital וconfocal.

Video: Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

קשירת עורקים כלילית לבין הזרקת Intramyocardial ב מודל Murine של אוטם

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

הערכה בלתי פולשנית של תפקוד כלי דם והאנדותל

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is also a valuable model system to test, and to evaluate therapeutics and drugs that negate maladaptive remodeling in the vessel. The injury, or barotrauma, in the vessel lumen caused by an inflated balloon via an inserted catheter induces subsequent neointimal growth, often leading to hyperplasia or thickening of the vessel wall that narrows, or obstructs the lumen. The method described here is sufficiently sensitive, and the results can be obtained in relatively short time (2 weeks after the surgery). The efficacy of the drug or therapeutic against the induced-remodeling can be evaluated either by the post-mortem pathological and histomorphological analysis, or by ultrasound sonography in live animals. In addition, this model system has also been used to determine the therapeutic window or the time course of the administered drug. These studies can leadto the development of a better administrative strategy and a better therapeutic outcome. The procedure described here provides a tool for translational studies that bring drug and therapeutic candidates from bench research to clinical applications.

The rat carotid balloon injury model described below allows researchers to evaluate drugs or therapeutics that negate injury-induced arterial hyperplasia. Detailed pre-surgical preparation, surgical procedure, and post-surgical cares of the animal are described.

פציעת בלון עכברוש ראש דגם כדי לבדוק Therapeutics שיפוץ אנטי-וסקולרית

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by reduced blood supply to the heart, resulting in the loss of oxygen to and the ensuing necrosis of the heart muscle. The MI model has gained popularity for its use as a short-term ischemia-reperfusion model and a long-term permanent ligation model. Below, we describe a reliable method for the permanent ligation of the LAD. With mouse genetic engineering technology becoming more advanced, and with an increasing availability of quality murine surgical instruments, the mouse has become a popular model for MI surgeries. Our surgical model incorporates the use of an easily reversible anesthetic for the rapid recovery of the mouse; a minimally invasive endotracheal intubation without involving a tracheotomy; and a thoracentesis through the original thoracotomy site without creating an additional incision in the chest, as is done in some other methods, to effectively remove excess blood and air from the chest cavity. This method is comparatively less invasive than other methods, which dramatically reduces surgical and post-surgical complications and mortality and improves reproducibility.

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

We provide a reliable method for left anterior descending artery (LAD) ligation in a mouse model. This method is comparatively less invasive than other methods, involving endotracheal intubation, a left-sided thoracotomy approach, and thoracentesis. This method can be used as a model for both acute and chronic myocardial infarction (MI).

Murine שמאל Anterior יורד (LAD) קשירת עורקים הכליליים: דגם משופר או פשוט עבור אוטם שריר לב

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

הערכה של רקמת שומן אנושי הפונקציה Microvascular באמצעות Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

שיטה לא פולשנית ליצירת מודל סחוס תוך מפרקי הנגרם על ידי העמסה מחזורית של ברך החולדה

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In order to explore the pathophysiological changes after myocardial infarction and design future treatments, research models of MI are required. Permanent ligation of the left coronary artery (LCA) in mice is a popular model to investigate cardiac function and ventricular remodeling post MI. Here we describe a less invasive, reliable, and reproducible surgical murine MI model by permanent ligation of the LCA. Our surgical model comprises of an easily reversible general anesthesia, endotracheal intubation that does not require a tracheotomy, and a thoracotomy. Electrocardiography and troponin measurement should be performed to ensure MI. Echocardiography at day 28 after MI will discern heart function and heart failure parameters. The degree of cardiac fibrosis can be evaluated by Masson's trichrome staining and cardiac MRI. This MI model is useful for studying the pathophysiological and immunological alterations after MI.

Presented here is a surgical procedure for permanent ligation of the left coronary artery in mice. This model can be used to investigate the pathophysiology and associated inflammatory response after myocardial infarction.

קשירת עורקים כליליים שמאליים: מודל מורין כירורגי של אוטם שריר הלב

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...