この作品は、ドイツ学術振興（SFB 655）と欧州連合（Z​​F-ヘルス）によってサポートされていました。

1。注射混合物の調製<ol><li>細胞がより効率的に、通常のモルホリノ分子よりもそれらを内面として生体モルフォリノを使用してください。詳細については、メーカーの情報（：試薬および材料表1）を参照してください。 </li><li>注入の精度を可視化する蛍光トラッキング色素（ 例えば CellTracker赤CMTPX、Invitrogen）を使用します。この色素は、細胞内で代謝され、唯一の取り込み後の細胞内蛍光灯になります。したがって、このステップでは、効率的に脳室マイクロインジェクションによって目標とされているセルを決定することが重要です。 </li><li>調製リン酸緩衝生理食塩水（PBS）（137mMの塩化ナトリウム、2.7mMのKClを、10mMのの Na 2 HPO 4、2mMのKH 2 PO 4、pH値：7.4）モルホリノ溶液を希釈する。モルホリノ溶液の希釈が必要な場合は、常にPBSを使用する。 </li><li>モルホリノ液9μlのと目の1μlのを追加することで、注入ミックス10μlのを準備電子セルトラッカー色素（希釈または希釈せずモルホリノソリューションの株式の濃度は500μMである我々の以前の結果22がモルホリノのそのいくつかの異なる投与量を示している- 。50μMから500μMまで-効率からノックダウンのさまざまなレベルで結果をhypomorphic表現型へのノックダウン）。溶液1μlのは1ゼブラフィッシュの脳内への注射で十分です。 </li><li>よく混ぜ、射出まで室温で保管してください。 </li></ol> 2。注射装置の準備<ol><li>ニードルプラーを用いてガラス注射毛細血管を準備します。暖房サイクル値：463、サイクル値を引っ張っ：230、速度：1.5秒、時間：75ミリ秒以下のパラメータを使用します。 </li><li>圧力源をオンにして、50 PSIまたは3.5バールまでの圧力設定を調整します。 </li><li>次のようにマイクロインジェクターの設定を調整する：圧力20 psiの、イジェクト圧力10 psiの、ゲーの2.5と100ミリ秒の範囲の期間の値を保持する。 </li><li>ターンリング照明のオンと顕微鏡ステージ上のリングを見つけます。 </li><li>顕微鏡の隣の適切な位置にキャピラリーホルダーを置きます。 </li><li>ホルダーにガラスキャピラリーを挿入します。 45度の噴射角を調整します。 </li><li>細かいエンド鉗子を用いたガラスキャピラリーの先端をオフスナップ、オリフィスからの圧力出力を校正。これは、魚の水の中に針の先端を浸し、連続圧力パルスを与えることでテストする必要があります。生じた気泡が最適な圧力/オリフィスサイズの指標である1行だけ、でなければなりません。このキャリブレーションのデモ用のビデオを参照してください。 </li><li>気泡をトラップせず注射液でガラスキャピラリーをロードします。 </li><li>ガラスキャピラリーの先端とロードされた注射液との間に空気を除去するために圧力を適用します。 </li></ol> 3。麻酔<ol><li>麻酔薬の原液を準備（0.1％MESAB - エチル -M-アミノ安息香酸メタン）。 </li><li>水の十分な量のプラスチックマウスのケージやその他の輸送コンテナに自分のタンクから魚、所望の数を削除します。 </li><li>麻酔原液5mlで魚の水200mlを混合することにより、小さなプラスチックの箱でanaesthetization溶液を調製。麻酔剤の最終濃度：0.0025％（v / v）である。 </li><li>麻酔薬のプラスチックシャーレをハーフ埋める。注射のためにこの料理に使用します。 </li><li>魚subduesまで麻酔で魚をインキュベートする。 </li></ol> 4。切開と脳室マイクロインジェクション<ol><li>魚のネットを使用してボックスから魚を外し、ペトリ皿に置きます。 </li><li>ゆっくりと、それは少し下向きに傾いているように鉗子やオリエント頭で魚を保持します。これは、切開が容易になる。 </li><li> 30ゲージ有刺鉄線エンド針を用いて頭蓋骨に小さなスリットを生成します。針の先端のみを使用し、複数の浸透しない十分にこのような脳には、脳組織を損傷し、出血などのマニフェストなります。 </li><li>魚を保持したまま、切開部位を通じてガラスキャピラリーの先端を挿入します。 </li><li>オリエント終脳に向かってガラスキャピラリーの先端。これは組織の損傷を作成し、また、注入された液の分散を防ぐように脳組織に触れないようにしてください。 </li><li>ソリューションを注入する。液体は注射直後に分散させる。 </li></ol> 5。回復と注入精度の分析<ol><li>新鮮な魚と水とプラスチックの箱への注入のセットアップと場所から魚を外します。 </li><li>回復を許可します。 </li><li>簡潔に0.0025％のMESABで魚を再anaesthetize、蛍光顕微鏡下で魚​​を確認してください。赤色蛍光の徹底的な分散が注入された液体の広範な分布を示すものである。 </li><li>プラスチックの箱に戻って魚を置く。 </li><li>をtにプラスチックの箱を接続時間の長い期間のために酸素を送り込む魚や維持に、彼は循環システム。 </li><li>このような行動の分析など、目的の目的のために魚を使用するか、さらなる分析（組織染色、免疫組織化学、 など ）に組織標本を準備するために注入した後、希望する時点で動物を生け贄に捧げる。 9,11,17-20,24-27：以下の参考文献は成体ゼブラフィッシュの脳を分析する方法の例を与える。効率的なノックダウン（50％以上ノックダウン）を観察する最速タイムは、私たちの研究では22 12時間であった。 </li></ol> 6。推奨科学的コントロール<ol><li>ネガティブコントロールとして任意の表現型を引き起こすことが想定されていないミスマッチモルホリノ分子を使用してください。興味のあるすべての遺伝子について、標準モルホリノ分子又は特に設計モルホリノコントロールを使用します。また、MISMの非特異的効果や毒性を評価するためのさらなるネガティブコントロールとして（この場合はPBS）溶媒を用いるモルホリノ注射を制御/ ATCH。 </li><li>陽性対照として以前に22記載PCNAのモルフォリノを使用します。このモルホリノは大人ゼブラフィッシュの脳（注射の1日以内の百分の75から95のノックダウン効率）22で効率的なノックダウンを引き起こす。 </li></ol>

<ol>
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Neurobiol. 72 (3), 429-461 (2012).</li><li>Grandel, H., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+aspects+of+adult+neural+stem+cell+activity+in+vertebrates.">Comparative aspects of adult neural stem cell activity in vertebrates.</a> Dev. Genes Evol. , (2013).</li><li>Kempermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Adult Neurogenesis 2: Stem Cells and Neuronal Development in the Adult Brain. , (2010).</li><li>Ihrie, R. 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A., Brunjes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+the+olfactory+bulb+of+adult+zebrafish.">Neurogenesis in the olfactory bulb of adult zebrafish.</a> Neuroscience. 105 (4), 793-801 (2001).</li><li>Pellegrini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+aromatase-positive+radial+glial+cells+as+progenitor+cells+in+the+ventricular+layer+of+the+forebrain+in+zebrafish.">Identification of aromatase-positive radial glial cells as progenitor cells in the ventricular layer of the forebrain in zebrafish.</a> J. Comp. Neurol. 501 (1), 150-167 (2007).</li><li>Lam, C. 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Neurosci. 29 (19), 6142-6153 (2009).</li><li>Ganz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+and+Fgf+dependence+of+adult+neural+progenitors+in+the+zebrafish+telencephalon.">Heterogeneity and Fgf dependence of adult neural progenitors in the zebrafish telencephalon.</a> Glia. 58 (11), 1345-1363 (2010).</li><li>M&#228;rz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+progenitor+cell+subtypes+in+the+ventricular+zone+of+the+zebrafish+adult+telencephalon.">Heterogeneity in progenitor cell subtypes in the ventricular zone of the zebrafish adult telencephalon.</a> Glia. 58 (7), 870-888 (2010).</li><li>Rothenaigner, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+analysis+by+distinct+viral+vectors+identifies+bona+fide+neural+stem+cells+in+the+adult+zebrafish+telencephalon+and+characterizes+their+division+properties+and+fate.">Clonal analysis by distinct viral vectors identifies bona fide neural stem cells in the adult zebrafish telencephalon and characterizes their division properties and fate.</a> Development. 138 (8), 1459-1469 (2011).</li><li>Kroehne, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+adult+zebrafish+brain+from+neurogenic+radial+glia-type+progenitors.">Regeneration of the adult zebrafish brain from neurogenic radial glia-type progenitors.</a> Development. 138 (22), 4831-4841 (2011).</li><li>Ito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+neural+stem+cells+and+their+progeny+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum.">Characterization of neural stem cells and their progeny in the adult zebrafish optic tectum.</a> Dev. Biol. 342 (1), 26-38 (2010).</li><li>Kizil, C., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebroventricular+microinjection+(CVMI)+into+adult+zebrafish+brain+is+an+efficient+misexpression+method+for+forebrain+ventricular+cells.">Cerebroventricular microinjection (CVMI) into adult zebrafish brain is an efficient misexpression method for forebrain ventricular cells.</a> PLoS One. 6 (11), e27395 (2011).</li><li>Morcos, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vivo-Morpholinos:+a+non-peptide+transporter+delivers+Morpholinos+into+a+wide+array+of+mouse+tissues.">Vivo-Morpholinos: a non-peptide transporter delivers Morpholinos into a wide array of mouse tissues.</a> Biotechniques. 45 (6), 613-614 (2008).</li><li>Kizil, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemokine+receptor+cxcr5+regulates+the+regenerative+neurogenesis+response+in+the+adult+zebrafish+brain.">The chemokine receptor cxcr5 regulates the regenerative neurogenesis response in the adult zebrafish brain.</a> Neural Dev. 7, 27 (2012).</li><li>Chapouton, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=her5+expression+reveals+a+pool+of+neural+stem+cells+in+the+adult+zebrafish+midbrain.">her5 expression reveals a pool of neural stem cells in the adult zebrafish midbrain.</a> Development. 133 (21), 4293-4303 (2006).</li><li>Kizil, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+neurogenesis+from+neural+progenitor+cells+requires+injury-induced+expression+of+Gata3.">Regenerative neurogenesis from neural progenitor cells requires injury-induced expression of Gata3.</a> Developmental Cell. 23 (6), 1230-1237 (2012).</li><li>Kyritsis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+inflammation+initiates+the+regenerative+response+in+the+adult+zebrafish+brain.">Acute inflammation initiates the regenerative response in the adult zebrafish brain.</a> Science. 338 (6112), 1353-1356 (2012).</li><li>Rosen, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function.">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113 (2009).</li><li>Rikin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reverse+genetic+approach+to+test+functional+redundancy+during+embryogenesis.">A reverse genetic approach to test functional redundancy during embryogenesis.</a> J. Vis. Exp. (42), e2020 (2010).</li></ol>

利害の衝突は宣言されていない。

我々はここで説明する方法では、成人のゼブラフィッシュの脳へモルフォリノの容易かつ迅速な管理を可能にします。我々は、注入法を効率的心室細胞及びニューロン新生応答の機能的結果をもたらすにおける遺伝子発現をブロックすることを実証した。 脳室マイクロインジェクションの実行中には慎重であるべき重要なポイントがあります。例えば、モルホリノ分子の効果は、使用される濃度に依存する。この濃度は、エンドユーザによって決定されなければならない。我々は標準的な胚の注入プロトコル28-30を使用して胚に注入することにより、事前テストに理想的に原液で始まる（500μM）と段階希釈を行ってお勧めします。以前、我々は、50μMから500μMの22までの範囲モルフォリノの濃度でノックダウン効率のさまざまなレベルを得た。第二に、ガラスキャピラリーのオリフィスがLARGすべきではありませんこのようにeは注射後の脳に広範な液体の流入につながる。これは適切な注入を防ぐことができます同様に、開口部が狭すぎてはいけません。一つは、水とのペトリ皿に空気をポンピングすることにより、最適なオリフィス圧力の組み合わせを決定することができる。生じた気泡がなく、複数の行の単一の行にする必要があります。我々は、ビデオでこれを実証している。第三に、麻酔薬で魚をインキュベートすることが重要です。魚は麻酔で2分より長く保持されるべきではない。これは、注射後の回復率が妨げられる。第四に、切開の位置が完全に注入された液体を分散させるために重要です。視蓋上心室領域が正中線上大きくなり、横方向に狭くなる。したがって、実験者は正中線に近く、終脳領域を覆う頭蓋骨プレートにジャスト尾頭蓋骨にスリットを生成する必要があります。 脳室充血の利点の一つN（CVMI）メソッドは、その迅速性です。 CVMIは遺伝子機能をアッセイするための迅速な方法である。一般的には数ヶ月かかる機能研究のためのトランスジェニック系統の世代と比較した場合、この機能は重要かつ有用である。フォーカル注射またはエレクトロポレーションと比較して、さらに、CVMIは、注入された液体の均一な分布につながるため、遺伝子活性の相対的に徹底した操作を提供します。 CVMIにより、複数の遺伝子が注入を調製することによって、同時にノックダウンすることができ、複数のモルフォリノオリゴヌクレオチドを​​含むミックス。 CVMIは、所定のモルホリノオリゴヌクレオチドの異なる濃度を注入するために使用することができるので、hypomorphicの表現型を分析するために使用することができる。最後に、この注射パラダイムは、毒性を引き起こすか、動物の生存を危うくすることはありません。 CVMI技術はそのような調節ペプチド、薬剤、プラスミドDNAまたはRNA調節カ月の注入のような他のタイプの試験のために展開されるかもしれないleculesまたは細胞の生理機能に影響を与える可能性のある他の物質。分子の組み合わせを検定し、用量反応分析を実行することは可能hypomorphic表現型を勉強できるように、我々の方法を使用しています。これらのプロパティを使用すると、CVMIは大人ゼブラフィッシュの脳内発現研究のための迅速かつ容易な測定法であることが判明し、かつ迅速なスクリーニングと機能解析を開きます。 成体ゼブラフィッシュの脳は、恒常的に全体rostrocaudal軸に沿って新たな神経細胞を生み出すことができますし、それはまた、外傷後に再生成することができます。これは限られた神経発生とすべての場合ではなく、貧しい人々再生能力を持つ哺乳類の脳とは全く対照的である。このような広範な幹細胞の活性および回復能力は、現在、ほとんど知られている中枢神経系の再生に必要な分子プログラムを理解するのに有用なモデル生物のゼブラフィッシュできる。したがって、ZEの再生適性の分子基盤を調査brafishの脳は魚や哺乳類の脳は損傷後に反応し、またヒトの再生医療治療のために道を与える方法の根本的な違いを説明するかもしれない研究の興味深い領域です。それらが神経前駆細胞3,8,20あるので、脊椎動物の脳の可塑性および再生の分子基盤を理解するために、グリア細胞が重要な研究領域となる。このように、ゼブラフィッシュの脳の放射状グリア細胞における遺伝子機能を変更するCVMI技術を使用して解明に尽力されどのように魚の脳が効率的な成体ニューロン新生と再生応答に結合前駆活動ができます。我々は最近、CVMI法を用いて可能になった大人のゼブラフィッシュの脳24,26,27、およびこれらの研究の再生神経新生応答にいくつかの要因とシグナル伝達経路の関与、要件を示している。全体的に、我々は、ゼブラフィッシュの脳から得る知識はリジェネを課すために利用することができた傷害に反応し、それ故に人間の神経疾患と急性傷害のための臨床治療を設計するのに役立ちます哺乳類グリア細胞へrative能力。

成体神経新生は、脊椎動物に共通する特徴ですが、有病率と効率性の程度は、系統発生1,2,3,4,5,6によって異なります。例えば、成人哺乳類の脳は硬骨魚のゼブラフィッシュは、その脳全体4,5,9,10で16の異なる幹細胞のドメインと関連する神経ゾーンが含まれている間、主に、前脳7,8に限定され、幹細胞の領域を含む。哺乳動物およびゼブラフィッシュの間のこの変化は、幹細胞の維持および前駆細胞の神経容量の機構における視差を反映しているかもしれない。ゼブラフィッシュの脳で採用分子メカニズムはヒトの神経変性疾患に取り組むために治療への応用のために活かされる可能性があるので、脳内の神経細胞を生成するためにゼブラフィッシュの生涯能力は、臨床影響をもたらす可能性があります。 成体ゼブラフィッシュ脳のいくつかの幹細胞ゾーンが分析されて、それが示されているそれらの領域の心室表面を覆う細胞が前駆細胞9,11-20として役立つ。ゼブラフィッシュの終脳内の詳細な分析は、例えば、神経前駆細胞19、20になるこの脳領域の心室表面の輪郭を描く放射状グリア細胞を同定した。これは、小脳や神経上皮細胞が神経入力16,21を提供する脳室内に配置視蓋、など他の地域にも当てはまる。この目的を達成するために、成人のゼブラフィッシュの脳内の広範な神経能力を支配する分子メカニズムを理解することは前駆細胞における遺伝子発現の操作を必要とします。 種々の方法は、以前はゼブラフィッシュで調節する遺伝子の機能について記載した。これらは単一のタンパク質、エレクトロポレーションまたは化学的処理に結合されたプラスミドベースフォーカル注射の所望の変異を表現条件トランスジェニック系統の生成を含む。我々は以前に設計され成体ゼブラフィッシュ脳22の心室細胞で調節する遺伝子機能を迅速かつ効率的な方法として、脳室マイクロインジェクションを用いた成人のゼブラフィッシュの脳へモルホリノオリゴヌクレオチドまたはタンパク質を含む様々な物質の投与方法。我々の研究では、生体内でのモルフォリノがあるため、共有結合などのエレクトロ23などの余分な透過処理を必要とせずに目的の細胞への効率的な配信を可能にする豊富な配信ペプチド、アルギニンにリンクモルホリノ分子を含む彼らの化学を用いた。これは、注射後に所望の組織を徹底的にターゲティングを可能にする、我々はゼブラフィッシュ成体終脳22で観察されただけで何が好きです。生体モルフォリノの使用したがって、そのようなエレクトロやDNA分子の焦点注射として標的組織の既存の方法よりも優れている。 ここで、我々は、この操作を実行し、どのように提供するか視覚的に示していステップ·バイ·ステップ·プロトコル。私たちは、注射液の準備と注入される魚の説明で始まり、射出装置の設定方法を示すことによって進みます。我々はマイクロインジェクターを用いたモルフォリノの頭蓋骨と注射で切開を生成伴う脳室注入法の説明を提供します。我々はまた、1つは、最適化やトラブルシューティングのガイドとして、それらを示すことによって全体の手順の間に慎重にする必要がある臨界点を詳述。

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagent/Material</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>CellTracker Red CMTPX</td>
 <td>Life Technologies, Invitrogen</td>
 <td>C34552</td>
 <td>Use at 1:100 dilution for measuring the injection accuracy</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MESAB (ethyl-m-aminobenzoate methanesulphonate)</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A5040</td>
 <td>For anesthetizing the fish</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petri dishes</td>
 <td>Sarstedt</td>
 <td>821,472</td>
 <td>For handling the fish during injection and imaging</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phosphate-buffered saline</td>
 <td>Life Technologies, GIBCO</td>
 <td>10010-056</td>
 <td>As sterile dilution medium</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vivo morpholinos</td>
 <td>Gene Tools Inc.</td>
 <td>Customized</td>
 <td>More info on vivo morpholinos: <a href="http://www.gene-tools.com" target="_blank">www.gene-tools.com</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Barbed-end needle</td>
 <td>Becton-Dickinson</td>
 <td>305178</td>
 <td>To generate the incision in the skull</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissecting microscope</td>
 <td>Olympus, Leica, Zeiss </td>
 <td>Varies with the manufacturer</td>
 <td>Part of the whole injection setup</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dumont Tweezers</td>
 <td>World Precision Instruments</td>
 <td>501985</td>
 <td>To snap off the tip of the glass capillary</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorescence camera</td>
 <td>Zeiss, Nikon, Leica</td>
 <td>Varies with the manufacturer</td>
 <td>To visualize the fluorescence after injection</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Gillies Dissecting Forceps</td>
 <td>World Precision Instruments</td>
 <td>501265</td>
 <td>To hold the fish in position</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glass injection capillaries</td>
 <td>World Precision Instruments </td>
 <td>TWF10 </td>
 <td>For microinjection</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PicoNozzle kit (microinjector holder)</td>
 <td>World Precision Instruments</td>
 <td>5430-12</td>
 <td>For microinjection</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pneumatic PicoPump (microinjector)</td>
 <td>World Precision Instruments</td>
 <td>SYS-PV820 </td>
 <td>For microinjection</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ring illuminator; Ring Light Guide</td>
 <td>Parkland Scientific</td>
 <td>ILL-RLG </td>
 <td>For illuminating the specimen</td>
 </tr>
	</tbody>
 </table>

micromanipulation of gene expression in the adult zebrafish brain using cerebroventricular microinjection of morpholino oligonucleotides

組織における遺伝子発現の操作は、機能的研究を行う必要がある。本稿では、成人のゼブラフィッシュ脳における遺伝子発現を調節するための手段として、脳室マイクロインジェクション（CVMI）技術を実証する。 CVMIを使用することによって、物質が脳室液中に投与することができ、完全に脳のrostrocaudal軸に沿って分配される。我々は、特にin vivoでの遺伝子発現をノックダウンするための強力なツールであるアンチセンスモルホリノオリゴヌクレオチドの使用に焦点を当てる。本手法では、適用された場合、モルホリノ分子が心室の表面を覆う細胞によって取り込まれている。これらの細胞は、神経前駆細胞として機能する放射状グリア細胞を含む。したがって、放射状グリア細胞における遺伝子発現をノックダウンするゼブラフィッシュの広範な神経発生の応答を分析するために最も重要であり、また、脊椎動物は成人neurogenを維持することができるかについての洞察を提供するであろうESIS応答。このような理解は、人間の神経変性疾患、中枢神経系の再生における臨床応用のための努力を支援するだろう。したがって、私たちは大人ゼブラフィッシュ脳における遺伝子発現と神経新生応答を変更するために迅速かつ効率的な方法として、脳室マイクロインジェクション法を提示する。またCVMI手続きを行う方法に関するトラブルシューティングのヒントおよびその他の有用な情報を提供します。

脳室マイクロインジェクションは、注入されたソリューションの広範な分布につながる 図1に示されている脳室マイクロインジェクションのワークフローや技術的なスキームを使用して、我々は大人ゼブラフィッシュの脳にモルホリノオリゴヌクレオチドを投与した。正確な注入プロトコルは、心室面（ 図2A）に近い細胞のターゲティング脳および効率的な全体に注入された液体の分散に繋がる。キャピラリーガラスは脳組織をimpales注射は注入点（ 図2B）における高密度蛍光シグナルを持つことになります。注入量が十分でない場合、弱い蛍光シグナル（ 図2C）が観察される。 脳室マイクロインジェクションは、成人のゼブラフィッシュ脳の脳室領域に遺伝子発現をノックダウンするために使用することができる我々は目のを示しているin vivoでのモルフォリノで心室内面少数気泡径に浸透することができ、したがって、効率的に心室細胞（ 図3A、3B）ターゲットにすることができます。モルホリノ注入は、対応するタンパク質（ 図3C、3Dに示すような例があるPCNA）の産生を軽減するようにノックダウンする遺伝子発現することができる。我々は以前に、この技術を用いて遺伝子をノックダウンすると、成体のニューロン新生（ 図3E、3F）又は再生応答（ 図3G、3H）の間に機能的結果をもたらすことを実証した。我々は、効率的なノックダウンレンジが（50％以上ノックダウン）モルホリノ22の注入後約12時間で達成されることを実証した。我々はまた、効率的なノックダウン期間は約5日間PCNAタンパク質22注入後までであることを観察した。 70％以上のノックダウンは3日注射22後まで見られた。ノックダウン曲線は従属プレーヤーであるnは、内因性タンパク質およびモルホリノ分子の効率の発現レベルと、実験者はすべての遺伝子について決定されなければならない。我々の研究では、モルホリノ分子の投与が局所的であるため、おそらく、CVMI手順は動物の生存を危うくすることを見ていないと全身毒性を引き起こすことはありません。 <img alt="図1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50415/50415fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50415/50415fig1.jpg" /> 図1。脳室注入法の概略図。 （A）注入は視蓋のレベル（OT、2）における成人のゼブラフィッシュ（1）の背側から行われる。切開は、30ゲージの針（3）光ファイバ視蓋頭蓋骨プレートを介して行われます。ガラスキャピラリーを使用して、モルホリノ分子は心室液（4）に注入される。徹底した分散がある（5）瞬時chieved。（B）カニューレ及びその棘付きエンドは高倍率で示されている。（C）切開の前に針の向きは、（D）切開を丸で囲んだと破線で概説されている。（E）示され、噴射が行われるようにキャピラリ注入が配置されている。すべてのパネルは、REFから適応された22。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50415/50415fig1large.jpg" target="_blank">より大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/50415/50415fig2.jpg" /> 図2。注入効率と精度を比較する。（A）良い注入が近い心室表面への細胞の標的化につながる。 （B）ガラス毛管が脳組織内に挿入される場合、これは中央に位置する蛍光シグナルを生成する。 （C </strong&gt;）噴射量が低い場合、これはより弱い蛍光シグナルをもたらす。 <img alt="図3" fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50415/50415fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50415/50415fig3.jpg" /> 図3。 。GFP陽性核を示すトランスジェニックライン： モルホリノ浸透、遺伝子ノックダウンと機能的結果の効率は （）GFPコントロールモルホリノ注入Tgは（GFP H2A）の終脳の断面に免疫染色。 GFP陽性核を示すトランスジェニックライン：（B）GFPは、GFPセンスモルホリノ注入Tgは（GFP H2A）の終脳の断面に免疫染色。心室領域におけるGFP-信号の違いに注意してください。 V：心室。 （C）PCNAは、PCNA陽性細胞の広範な分布を示す制御モルホリノ注入脳で免疫染色。 （ <strong&gt; D）PCNAはCVMIが内因性の遺伝子をノックダウンすることができますことを示す、PCNA陽性細胞の大幅に削減量を示すPCNAセンスモルホリノ注入脳に免疫染色。 （E）のBrdUとHUC / Dが22前述のBrdUパルスチェイス実験後新生児ニューロンを決定するために制御モルホリノ注入脳に免疫染色。 （F）のBrdUとHUC / Dが22前述のBrdUパルスチェイス実験後新生児ニューロンを決定するPCNAセンスモルホリノ注入脳に免疫染色。 （G）ノックダウンPCNAはCVMIの機能的結果をもたらす内在性遺伝子ノックダウンに使用することができることを示す、新生ニューロンの発生の大幅な削減につながる。すべてのパネルは、REFから適応された22は、 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50415/50415fig3large.jpg" target="_blank">より大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。

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Micromanipulation of Gene Expression in the Adult Zebrafish Brain Using Cerebroventricular Microinjection of Morpholino Oligonucleotides

本稿では、アンチセンスモルフォリノオリゴヌクレオチドを​​用いて成体ゼブラフィッシュの終脳の心室細胞における遺伝子発現の操作のための方法を示しています。私たちは、大人の脊椎動物の脳の機能的な研究のために使用することができ、効率的かつ迅速なプロトコルとして、この方法を提示する。

モルホリノオリゴヌクレオチドの脳室マイクロインジェクションを使用した大人のゼブラフィッシュ脳における遺伝子発現のマイクロマニピュレーション

Manipulation of gene expression in tissues is  required to perform functional studies. In this paper, we demonstrate the  cerebroventricular ...

micromanipulation-gene-expression-adult-zebrafish-brain-using

Research

JoVE Journal

Neuroscience

19.1K ビュー.  Cluster of Excellence (CRTD) and Biotechnology Center (BIOTEC) of the Technische Universität Dresden. 本稿では、アンチセンスモルフォリノオリゴヌクレオチドを​​用いて成体ゼブラフィッシュの終脳の心室細胞における遺伝子発現の操作のための方法を示しています。私たちは、大人の脊椎動物の脳の機能的な研究のために使用することができ、効率的かつ迅速なプロトコルとして、この方法を提示する。

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Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

Development of neural circuitries and locomotion can be studied using neonatal rodent spinal cord central pattern generator (CPG) behavior. We demonstrate a method to fabricate suction electrodes that are used to examine CPG activity, or fictive locomotion, in dissected rodent spinal cords. The rodent spinal cords are placed in artificial cerebrospinal fluid and the ventral roots are drawn into the suction electrode. The electrode is constructed by modifying a commercially available suction electrode. A heavier silver wire is used instead of the standard wire given by the commercially available electrode. The glass tip on the commercial electrode is replaced with a plastic tip for increased durability. We prepare hand drawn electrodes and electrodes made from specific sizes of tubing, allowing consistency and reproducibility. Data is collected using an amplifier and neurogram acquisition software. Recordings are performed on an air table within a Faraday cage to prevent mechanical and electrical interference, respectively.

A demonstration of the fabrication and use of an extracellular suction electrode used to measure electrophysiological recordings of neonatal rodent spinal cords in vitro

脊髄電気生理学II：細胞外吸引電極の作製

Development of neural circuitries and locomotion can be studied using neonatal rodent spinal cord central pattern generator (CPG) behavior. We demonstrate ...

神経科学

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central nervous system (CNS). Although much is known about the molecular mechanisms that pattern the spinal cord and elicit neuronal differentiation1, 2, we lack a deep understanding of these early events at the level of cell behavior. It is thus critical to study the behavior of neural progenitors in real time as they undergo neurogenesis.
In the past, real-time imaging of early embryonic tissue has been limited by cell/tissue viability in culture as well as the phototoxic effects of fluorescent imaging. Here we present a novel assay for imaging such tissue for long periods of time, utilizing a novel ex vivo slice culture protocol and wide-field fluorescence microscopy (Fig. 1). This approach achieves long-term time-lapse monitoring of chick embryonic spinal cord progenitor cells with high spatial and temporal resolution.
This assay may be modified to image a range of embryonic tissues3, 4 In addition to the observation of cellular and sub-cellular behaviors, the development of novel and highly sensitive reporters for gene activity (for example, Notch signaling5) makes this assay a powerful tool with which to understand how signaling regulates cell behavior during embryonic development.

Imaging embryonic tissue in real-time is challenging over long periods of time. Here we present an assay for monitoring cellular and sub-cellular changes in chick spinal cord for long periods with high spatial and temporal resolution. This technique can be adapted for other regions of the nervous system and developing embryo.

開発神​​経上皮における細胞挙動の高解像度のライブイメージング

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Optimized Analysis of DNA Methylation and Gene Expression from Small, Anatomically-defined Areas of the Brain

Exposure to diet, drugs and early life adversity during sensitive windows of life 1,2 can lead to lasting changes in gene expression that contribute to the display of physiological and behavioural phenotypes. Such environmental programming is likely to increase the susceptibility to metabolic, cardiovascular and mental diseases 3,4.
DNA methylation and histone modifications are considered key processes in the mediation of the gene-environment dialogue and appear also to underlay environmental programming 5. In mammals, DNA methylation typically comprises the covalent addition of a methyl group at the 5-position of cytosine within the context of CpG dinucleotides.
CpG methylation occurs in a highly tissue- and cell-specific manner making it a challenge to study discrete, small regions of the brain where cellular heterogeneity is high and tissue quantity limited. Moreover, because gene expression and methylation are closely linked events, increased value can be gained by comparing both parameters in the same sample.
Here, a step-by-step protocol (Figure 1) for the investigation of epigenetic programming in the brain is presented using the 'maternal separation' paradigm of early life adversity for illustrative purposes. The protocol describes the preparation of micropunches from differentially-aged mouse brains from which DNA and RNA can be simultaneously isolated, thus allowing DNA methylation and gene expression analyses in the same sample.

A streamlined workflow to study DNA methylation and gene expression changes upon early-life stress is shown. Starting from maternal separation of newborn mice and isolation of discrete brain tissues, we represent a protocol to simultaneously isolate DNA and RNA from brain tissue punches for subsequent bisulfite sequencing and RT-PCR analysis.

脳の小、解剖学的に定義された領域からのDNAメチル化と遺伝子発現の最適化分析

Exposure to diet, drugs and early life adversity during sensitive windows of life 1,2 can lead to lasting changes in gene expression that contribute to ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram recordings. This paper describes how an adult zebrafish can be immobilized, intubated, and used for in vivo electrophysiological experiments, allowing recording of neural activity. Immobilization of the adult requires a mechanism to deliver dissolved oxygen to the gills in lieu of buccal and opercular movement. With our technique, animals are immobilized and perfused with habitat water to fulfill this requirement. A craniotomy is performed under tricaine methanesulfonate (MS-222; tricaine) anesthesia to provide access to the brain. The primary electrode is then positioned within the craniotomy window to record extracellular brain activity. Through the use of a multitube perfusion system, a variety of pharmacological compounds can be administered to the adult fish and any alterations in the neural activity can be observed. The methodology not only allows for observations to be made regarding changes in neurological activity, but it also allows for comparisons to be made between larval and adult zebrafish. This gives researchers the ability to identify the alterations in neurological activity due to the introduction of various compounds at different life stages.

This paper describes how an adult zebrafish can be immobilized, intubated, and used for in vivo electrophysiological experiments to allow recordings and manipulation of neural activity in an intact animal.

無傷アダルトゼブラフィッシュの脳における電気生理学的記録

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Analysis of Gene Expression Changes in the Rat Hippocampus After Deep Brain Stimulation of the Anterior Thalamic Nucleus

Deep brain stimulation (DBS) surgery, targeting various regions of the brain such as the basal ganglia, thalamus, and subthalamic regions, is an effective treatment for several movement disorders that have failed to respond to medication. Recent progress in the field of DBS surgery has begun to extend the application of this surgical technique to other conditions as diverse as morbid obesity, depression and obsessive compulsive disorder. Despite these expanding indications, little is known about the underlying physiological mechanisms that facilitate the beneficial effects of DBS surgery. One approach to this question is to perform gene expression analysis in neurons that receive the electrical stimulation. Previous studies have shown that neurogenesis in the rat dentate gyrus is elicited in DBS targeting of the anterior nucleus of the thalamus1. DBS surgery targeting the ATN is used widely for treatment refractory epilepsy. It is thus of much interest for us to explore the transcriptional changes induced by electrically stimulating the ATN. In this manuscript, we describe our methodologies for stereotactically-guided DBS surgery targeting the ATN in adult male Wistar rats. We also discuss the subsequent steps for tissue dissection, RNA isolation, cDNA preparation and quantitative RT-PCR for measuring gene expression changes. This method could be applied and modified for stimulating the basal ganglia and other regions of the brain commonly clinically targeted. The gene expression study described here assumes a candidate target gene approach for discovering molecular players that could be directing the mechanism for DBS.

The mechanism underlying the therapeutic effects of Deep Brain Stimulation (DBS) surgery needs investigation. The methods presented in this manuscript describe an experimental approach to examine the cellular events triggered by DBS by analyzing the gene expression profile of candidate genes that can facilitate neurogenesis post DBS surgery.

視床前核の脳深部刺激後のラット海馬における遺伝子発現の変化の解析

Deep brain stimulation (DBS) surgery, targeting various regions of the brain such as the basal ganglia, thalamus, and subthalamic regions, is an effective ...

Using Fluorescence Activated Cell Sorting to Examine Cell-Type-Specific Gene Expression in Rat Brain Tissue

The brain is comprised of four primary cell types including neurons, astrocytes, microglia and oligodendrocytes. Though they are not the most abundant cell type in the brain, neurons are the most widely studied of these cell types given their direct role in impacting behaviors. Other cell types in the brain also impact neuronal function and behavior via the signaling molecules they produce. Neuroscientists must understand the interactions between the cell types in the brain to better understand how these interactions impact neural function and disease. To date, the most common method of analyzing protein or gene expression utilizes the homogenization of whole tissue samples, usually with blood, and without regard for cell type. This approach is an informative approach for examining general changes in gene or protein expression that may influence neural function and behavior; however, this method of analysis does not lend itself to a greater understanding of cell-type-specific gene expression and the effect of cell-to-cell communication on neural function. Analysis of behavioral epigenetics has been an area of growing focus which examines how modifications of the deoxyribonucleic acid (DNA) structure impact long-term gene expression and behavior; however, this information may only be relevant if analyzed in a cell-type-specific manner given the differential lineage and thus epigenetic markers that may be present on certain genes of individual neural cell types. The Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) technique described below provides a simple and effective way to isolate individual neural cells for the subsequent analysis of gene expression, protein expression, or epigenetic modifications of DNA. This technique can also be modified to isolate more specific neural cell types in the brain for subsequent cell-type-specific analysis.

The goal of this protocol is to use the fluorescence activated cell sorting (FACS) technique to sort specific types of neural cells for subsequent analysis of cell-type-specific gene expression, epigenetic markers, and or protein expression.

The brain is comprised of four primary cell types including neurons, astrocytes, microglia and oligodendrocytes. Though they are not the most abundant ...

Modeling Amyloid-&#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to synaptic degeneration, inflammation, neuronal death, and learning deficits. Humans cannot regenerate lost neurons in the case of AD in part due to impaired proliferative capacity of the neural stem/progenitor cells (NSPCs) and reduced neurogenesis. Therefore, efficient regenerative therapies should also enhance the proliferation and neurogenic capacity of NSPCs. Zebrafish (Danio rerio) is a regenerative organism, and we can learn the basic molecular programs with which we could design therapeutic approaches to tackle AD. For this reason, the generation of an AD-like model in zebrafish was necessary. Using our methodology, we can introduce synthetic derivatives of A&#946;42 peptide with tissue penetrating capability into the adult zebrafish brain, and analyze the disease pathology and the regenerative response. The advantage over the existing methods or animal models is that zebrafish can teach us how a vertebrate brain can naturally regenerate, and thus help us to treat human neurodegenerative diseases better by targeting endogenous NSPCs. Therefore, the amyloid-toxicity model established in the adult zebrafish brain may open new avenues for research in the field of neuroscience and clinical medicine. Additionally, the simple execution of this method allows for cost-effective and efficient experimental assessment. This manuscript describes the synthesis and injection of A&#946;42 peptides into zebrafish brain.

Modeling Amyloid-&amp;#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

This protocol describes the synthesis, characterization, and injection of monomeric amyloid-&#946;42 peptides for generating amyloid toxicity in adult zebrafish to establish an Alzheimer&#39;s disease model, followed by histological analyses and detection of aggregations.

Β42 アミロイド毒性と大人のゼブラフィッシュ脳の神経変性をモデリング

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to ...

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

This technique combines optical fiber mediated fluorescence recordings with the precise delivery of recombinant adeno-associated virus based gene reporters. This new and easy to use in vivo fluorescence monitoring system was developed to record the transcriptional rhythm of the clock gene, Cry1, in the suprachiasmatic nucleus (SCN) of freely moving mice. To do so, a Cry1 transcription fluorescence reporter was designed and packaged into Adeno-associated virus. Purified, concentrated virus was injected into the mouse SCN followed by the insertion of an optic fiber, which was then fixed onto the surface of the brain. The animals were returned to their home cages and allowed a 1-month post-operative recovery period to ensure sufficient reporter expression. Fluorescence was then recorded in freely moving mice via an in vivo monitoring system that was constructed at our institution. For the in vivo recording system, a 488 nm laser was coupled with a 1 &#215; 4 beam-splitter that divided the light into four laser excitation outputs of equal power. This setup enabled us to record from four animals simultaneously. Each of the emitted fluorescence signals was collected via a photomultiplier tube and a data acquisition card. In contrast to the previous bioluminescence in vivo circadian clock recording technique, this fluorescence in vivo recording system allowed the recording of circadian clock gene expression during the light cycle.

In Vivo Monitoring of Circadian Clock Gene Expression in the Mouse Suprachiasmatic Nucleus Using Fluorescence Reporters

This newly developed fluorescence-based technology enables long-term monitoring of the transcription of circadian clock genes in the suprachiasmatic nucleus (SCN) of freely moving mice in real-time and at a high temporal resolution.

生体内で蛍光レポーターを使用してマウス視交叉上核における時計遺伝子発現のモニタリング

This technique combines optical fiber mediated fluorescence recordings with the precise delivery of recombinant adeno-associated virus based gene ...

Using Near-infrared Fluorescence and High-resolution Scanning to Measure Protein Expression in the Rodent Brain

Neuroscience is the study of how cells in the brain mediate various functions. Measuring protein expression in neurons and glia is critical for the study of neuroscience as cellular function is determined by the composition and activity of cellular proteins. In this article, we describe how immunocytochemistry can be combined with near-infrared high-resolution scanning to provide a semi-quantitative measure of protein expression in distinct brain regions. This technique can be used for single or double protein expression in the same brain region. Measuring proteins in this fashion can be used to obtain a relative change in protein expression with an experimental manipulation, molecular signature of learning and memory, activity in molecular pathways, and neural activity in multiple brain regions. Using the correct proteins and statistical analysis, functional connectivity among brain regions can be determined as well. Given the ease of implementing immunocytochemistry in a laboratory, using immunocytochemistry with near-infrared high-resolution scanning can expand the ability of the neuroscientist to examine neurobiological processes at a systems level.

Here, we present a protocol that uses near-infrared dyes in conjunction with immunohistochemistry and high-resolution scanning to assay proteins in brain regions.

げっ歯類の脳におけるタンパク質発現を測定するために近赤外蛍光と高解像度走査を用いること

Neuroscience is the study of how cells in the brain mediate various functions. Measuring protein expression in neurons and glia is critical for the study ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from parallel fibers (PF) to Purkinje cells (PC) is considered the basis for motor learning, and deficiencies of both LTD and motor learning are observed in various gene-manipulated animals. Common motor learning sets, such as adaptation of the optokinetic reflex (OKR), the vestibular-ocular reflex (VOR), and rotarod test were used for evaluation of motor learning ability. However, results obtained from the GluA2-carboxy terminus modified knock-in mice demonstrated normal adaptation of the VOR and the OKR, despite lacking PF-LTD. In that report, induction of LTD was only attempted using one type of stimulation protocol at room temperature. Thus, conditions to induce cerebellar LTD were explored in the same knock-in mutants using various protocols at near physiological temperature. Finally, we found stimulation protocols, by which LTD could be induced in these gene-manipulated mice. In this study, a set of protocols are proposed to evaluate LTD-induction, which will more accurately allow examination of the causal relationship between LTD and motor learning. In conclusion, experimental conditions are crucial when evaluating LTD in gene-manipulated mice.

In some gene-manipulated animals, using a single protocol may fail to induce LTD in cerebellar Purkinje cells, and there may be a discrepancy between LTD and motor learning. Multiple protocols are necessary to assess LTD-induction in gene-manipulated animals. Standard protocols are shown.

成人小脳スライスにおける長期うつ病誘導の評価

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...