この作品は、フロリダ大学のTL1 TR000066とUL1 TR000064、国立衛生研究所、BDバイオサイエンス試薬の助成金、および大学からの親グラントR01AI056152からダイバーシティ·補完するために、NIH / NCATS臨床およびトランスレーショナル科学賞によって部分的にサポートされていますフロリダ州。

すべての動物の使用は、施設内動物管理使用委員会によって承認されたプロトコルに従って実施した。 1。ミックスとメディアの準備 <ol><li> 滅菌したPBSのpH：7.3（1リットル） 0.23グラムのNaH 2 POの4 1.15グラムのNa 2 HPO 4 9.0グラムのNaCl DI水で音量を上げてください。オートクレーブ滅菌する。 </li><li> 細胞培養培地（100ミリリットル） 89ミリリットルのRPMI 10ミリリットル、10％FBS 1ミリリットル抗生物質抗真菌（ABAM）100μgを50 mMの2 - メルカプトエタノール（96.5μgのPBSに3.5μgの株式2 - メルカプトエタノール） </li><li> FACS緩衝液（蛍光活性化セルソーティング）（フローサイトメトリーの間に使用されるために）、2％FBS、滅菌PBS中</li><li> iTh17ミックス （試料の数に基づいて、すべてのミックスとメディアのために必要な容積を決定） 1.5μg/ mlの抗CD28 20 ng / mlのIL-6 5 ng / mlのTGF-β </li></ol> 2。細胞は以下の条件で三重にメッキされます <ol><li>抗CD3結合したプレートを、抗CD28（これは起動制御ミックスである）。 </li><li> iTH17：抗CD3バインドプレート、抗CD28、IL-6、TGF-β。 </li></ol> 3。プレートに結合した抗CD3（10μg/ ml）を これは、プレートに結合した抗CD3プレートの製造は、事前の細胞がプレートに添加される時間に、少なくとも4時間後に行われることをお勧めします。 <ol><li>ウェルに30μlの抗CD3を追加し、新しい96ウェルU底マイクロテスト組織培養プレート（抗CD3を滅菌PBSで希釈）、およびウェルの均一な被覆を確実にするために、プレートの側面をタップする。それはプレートにミックスやセルを追加するための時間になるまで冷蔵し、その後4時間、37℃で培養します。 </li></ol> 4。マウスの解剖 <ol><li>このプロトコルは、C57BL / 6マイクの使用に基づいているE、3-8ヶ月齢、ジャクソン研究所（バーハーバー、ME）から購入した。 </li><li> CO 2窒息を使用して、マウスを犠牲にし、その後の頸椎脱臼で死亡が確認された。 </li><li> 70％エタノールでマウスの解剖ツールと切開領域を殺菌し、解剖を始める。 </li><li>腹側のビューから、尿道口の前方で皮膚をつかんであごの領域に到達するまで、腹側正中までハサミで切断始まる。涙や腹膜壁の粘膜にカットしない予防策を講じる。 </li><li>皮膚に引いて、取り外し作業中にリンパ節への快適なアクセスを可能にするために突き止める。 </li><li>収集したリンパ節および脾臓を全てピンセットで除去し、バッファミルテニーバイオテク（リンパ節および脾臓の除去の図について図2及び図3を参照）から購入したランニングをautoMACSを5mlを含む滅菌ペトリ皿に置かれます。 <ol><li>アール腋窩リンパ節を取り除く各マウスの胸筋の背後にある腋窩（脇の下）の近くで発見。 </li><li>各腋窩の近くに結合組織に配置されている上腕リンパ節を除去します。 </li><li>各マウスの首に見られる表面的な頸部リンパ節を除去します。 </li><li> 3血管の連動で、腰部に配置されて鼠径部リンパ節を除去します。 </li><li>腸間膜リンパ節にアクセスするには、腹膜ライニングを通して腹側正中線をカット。腸間膜リンパ節は、腸を一緒に保持する結合組織に見出される。これらは一般的に4〜8ノードの文字列で発見されており、「真珠の文字列」として表示されることがあります。文字列全体を引き出していることを確認してください。 </li><li>脾臓、胃や腸の後ろ、腹部領域に位置しています。膵臓からそれを引き出し、取り外して、それを削除します。 </li></ol></li><li> 2つや消し顕微鏡スライドを使用して無菌フードの下での臓器を挽く。リンパ節や脾臓にを置く1顕微鏡のスライドのつや消し側、そして崩壊したまで、第2のスライドのつや消し側をこする。すべてのリンパ節や脾臓が接地されるまで繰り返します。 </li></ol>注：血はそれが困難なAUTOMACSバッファ内の残りのリンパ節を参照してくださいになりますので、これは、リンパ節で始まり、脾臓で終了することをお勧めします。 <ol start="9"><li>単一細胞懸濁液に粉砕器官をフィルタリングするには、40ミクロ​​ンのナイロン素材のワンピースの上に数回折り畳み、そして15ミリリットルの遠心管の最上部に配置することで始まる。ナイロン素材は、大きく分けて3×3インチでなければなりません</li><li>バッファとグラウンド臓器を実行AUTOMACSの5ミリリットルを吸引する5ミリリットルの注射器と21ゲージ針を使用してください。折り畳まれたナイロン素材に徐々に分注する。針で材料を穿刺しないように注意してください。 </li></ol>注：単一細胞懸濁液が達成されると、溶液はvisibなしで淡い、一貫性のあるソリューションとして表示されます固形組織のル·ピース。固体は、再吸引のままであり、新たを15ml遠心管に入れ、ナイロンの新しい折返し片を介して分配する場合。 <ol start="11"><li>使用しないときは、常に氷上で細胞を維持する。 </li></ol> 5。細胞分離 <ol><li>最適な結果を得るために、MACS CD4 + CD25 +調節性T細胞単離キット、マウスを使用して細胞をautoMACS Proのセパレータを介して、少なくとも80％純粋なCD4 + CD25 - 細胞集団を得る。 CD4 + CD25-細胞集団の負の保持のためのプロトコルはミルテニー·バイオテク社を介して得られる。 </li></ol> 6。のTh17分化 <ol><li>とautoMACS Proの電池セパレータで分離した後に、CD4 + CD25 - 細胞集団を収集します。 </li><li>血球計数器を用いてトリパンブルーで1:1000の割合で希釈した細胞を数える。 </li><li>濃度は細胞数から決定されると、細胞培養培地中に1×10 6細胞/ mlの細胞懸濁液を希釈する。 </li><li> 4時間後に抗CD3バインドプレートと96ウェルプレートを取り出します。 </li><li> 200μlのPBSで抗CD3でコーティングされたウェルを洗浄します。 2回繰り返します。 <ol><li>洗浄するために抗CD3でコーティングされたウェルに滅菌PBSを200μlを追加し、廃棄物容器に、PBSを除去します。 </li></ol></li><li>三重でウェルにiTh17ミックスや起動制御ミックスを100μl（ポイント＃2を参照）を追加します。 </li><li>各ウェルのTh17ミックスや起動制御ミックスのいずれかが置かれたに細胞100μlを加える。 </li><li>少なくとも72時間、または5日間まで細胞をインキュベート（Th17の分化は、72時間後または5日後に得ることができる。） </li><li>のTh17分化は、細胞内染色およびフローサイトメトリー分析、ELISA、またはqPCRにより評価することができる</li></ol> 7。細胞の活性化 （細胞内染色のためにのみ必要） <ol><li> 72時間または5日間のいずれかの端部にインキュベーターから96ウェルプレートを外し<ol><li>のTh17 differentiatioことを思い出してくださいnが72時間または5日間のいずれかの後に達成することができる。 </li></ol></li><li>各条件（ 例えば起動制御やiTh17）のために、24ウェル細胞培養プレートの1ウェルに三重にあるセルを転送する。 96ウェルU底培養プレートにトリプリケートであることとは対照的に、一つの条件のための細胞は、現在、24ウェル培養プレートの1ウェルにプールされている。 </li><li> 24ウェル細胞培養プレートの各ウェルの総容積は、現在600μLのである。細胞培養培地で各ウェルに1ミリリットルの音量を上げる。 </li><li>記載された濃度で24ウェル細胞培養プレート中の各ウェルにPMA（ホルボールミリステートアセテート）（50 ng / mlの）、イオノマイシン（1μM）、およびBFA（ブレフェルジン-A）（10μg/ mlの）を添加する。 </li><li> 4時間37℃でインキュベートする。 </li></ol> 8。細胞内染色 <ol><li>フローサイトメトリー解析のために必要な細胞外および細胞内マーカーで染色した細胞。 oをプレゼンスを検出するfはIL-17は、細胞内染色は、抗IL-17A抗体を用いて行われる。推奨される細胞外表面マーカーは、CD4、CD8、およびCD25が含まれる。 <ol><li> IL-17細胞内染色のために、BDバイオサイエンスからの細胞内サイトカイン染色スターターキット - マウスを使用しています。 </li><li>各サンプルについて、ペレット細胞は、上清を除去し、200μlのFACSバッファー（PBS中の2％FBS）に再懸濁細胞ペレット。 </li><li> 96細胞フローサイトメトリープレートに再懸濁細胞を移す。 </li><li> 1,200 rpmで5分間細胞をスピンダウンし、上清を捨てる。 </li><li> 200μlのPBS FACS緩衝液、1,200 rpmで5分間遠心を追加し、上澄みを捨てる。 </li><li> FACS緩衝液100μlに再懸濁細胞と細胞外抗体100μlの（A-B）の混合物（細胞外抗体混合物をFACS緩衝で作られて）を適用。ホイルで覆い、室温で15分間インキュベートする。 </li><li>ステップ8.1.4を繰り返します。 </li><li>手順を繰り返し8.1.5 2X。 </li><li> BDのCytofix / Cytoperm緩衝液100μl中に細胞を懸濁します。 Incubホイルで覆い、RTで20分間食べた。 </li><li> 1XのBDパーマ/洗浄緩衝液100μl加え、1,200 rpmで5分間遠心し、上清を捨てる。繰り返します。 </li><li>細胞内の抗体混合液50μlを加える。 （細胞内抗体混合物を、1×BDのPerm /洗浄で行われる）箔で覆われたRTで15分間、インキュベートする。 </li><li>ステップ8.1.10を繰り返します。 </li><li> BD染色緩衝液200μl中に細胞を懸濁します。 </li><li> 200μlのBD染色緩衝液（最終容量は400μLである）を含むチューブにフローサイトメトリーに再懸濁した細胞を配置します。 </li><li> 4℃で保存サンプルが読み込み可能になるまで。 </li></ol></li></ol> 9。フローサイトメトリー分析 <ol><li>ゲート生きた細胞集団。 </li><li>生細胞集団からのCD4 + CD8-の人口上のゲート。 </li><li> CD4 + CD8-集団から、IL-17A +集団上のゲート。 <ol><li>我々の以前の実験結果に基づいて、IL-17A +集団の100％がCD25 +であろう。 </li></ol></li></ol> *全絶対細胞数は、サンプル三連をプールした後に得られた CD4 + CD25 + IL-17A +細胞のように、ライブゲートパーセンテージおよび系統特異的マーカー、CD4、CD25、およびIL-17Aを有する全細胞の割合で細胞の総数を乗じることによって求めた。**の絶対数フローサイトメトリーにより決定した。 10。定量PCRおよびELISA <ol><li>場所細胞は、5〜10分間、13,000 rpmで1.5mlのエッペンドルフチュー​​ブ、遠心分離、フローサイトメトリー分析のために使用されない。遠心分離後に細胞ペレットに見出される細胞は、qPCR分析のために使用される。 qPCR分析は、PTC-200ペルチェサーマルサイクラー（Biorad）を用いて行った。 </li><li> ELISAの遠心分離チューブから上清を収集します。 IL-17A ELISAは、抗体ペアTC11-18H10（キャプチャ、カタログ番号555068）を使用して実施し、TC11-8H4ビオチン（検出、カタログ番号555067）はBD Biosciences社から購入した。 IL-17A ELISA STAndardsはイーバイオサイエンス（カタログ番号14-8171-80）から得た。 </li><li>上清を除去した後、（後で使用するために-80℃でRNA抽出、cDNA合成および定量PCR、または格納のためにすぐに使用する）175μlのRNA溶解緩衝液中でのqPCRに使用する残りの細胞を再懸濁する。 <ol><li> IL-17Aとアクチンのためのプライマー配列は、表IIを参照してください（ハウスキーピング遺伝子） </li></ol></li></ol>

<ol>
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L., Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-23+drives+a+pathogenic+T+cell+population+that+induces+autoimmune+inflammation.">IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation.</a> J. Exp. Med. 201, 233-240 (2005).</li><li>Lau, K., Benitez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+type+1+diabetes+by+a+Lactobacillus+johnsonii+mediated+Th17+bias.">Inhibition of type 1 diabetes by a Lactobacillus johnsonii mediated Th17 bias.</a> J. Immunol. 186, 3538-3546 (2011).</li><li>Lee, Y., Awasthi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+molecular+signature+of+pathogenic+TH17+cells.">Induction and molecular signature of pathogenic TH17 cells.</a> Nat Immunol. 13, 991-999 (2012).</li><li>Litmann, D. R., Rudensky, A. 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C., Larkin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+TCR+specificity+in+CD4+CD25++regulatory+T+cell+selection.">Role of TCR specificity in CD4+CD25+ regulatory T cell selection.</a> Immunol Rev. 212, 74-85 (2006).</li><li>Shah, K., Lee, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disregulated+balance+of+Th17+and+Th1+cells+in+systemic+lupus+erythematosus.">Disregulated balance of Th17 and Th1 cells in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 12, R53 (2010).</li><li>Sospedra, M., Martin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+of+Multiple+Sclerosis.">Immunology of Multiple Sclerosis.</a> Annu. Rev. Immunol. 23, 683-747 (2005).</li><li>Stockringer, B., Veldhoen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+function+of+Th17+T+cells.">Differentiation and function of Th17 T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 19, 281-286 (2007).</li><li>Veldhoen, M., Hocking, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF&#946;+in+the+context+of+an+inflammatory+cytokine+milieu+supports+de+novo+differentiation+of+IL-17-producing+T+cells.">TGF&#946; in the context of an inflammatory cytokine milieu supports de novo differentiation of IL-17-producing T cells.</a> Immunity. 24, 179-189 (2006).</li><li>Zou, Y., Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-dependent+production+of+interleukin-17/interferon-&#947;+and+matrix+remodeling-associated+genes+in+experimental+Candida+albicans+keratitis.">Strain-dependent production of interleukin-17/interferon-&#947; and matrix remodeling-associated genes in experimental Candida albicans keratitis.</a> Mol Vis. 18, 1215-1225 (2012).</li></ol>

宣言するの開示。

ここでは、 インビトロでのTh17分化を達成するためのプロトコルを記載している。のTh17サブセットへのTリンパ球の分化はヒト病原体13の効果的な除去のために重要であるとしてのTh17分化の研究は、重要です。逆に、IL17産生は、自己免疫疾患の進行13と関連している。それは、免疫調節および自己免疫の多数の異なるマウスモデルに適用することができるように、Th17の?...

CD4 + Tリンパ球（T細胞）は、感染性微生物に対する免疫系媒介性防御において重要な役割を果たしている。逆に、T細胞はまた、密接に1型糖尿病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチなどの自己免疫疾患の発症および進行に関連している。 CD4 + Tリンパ球は、T細胞受容体、同族抗原/主要組織適合複合体II（MHCII）の分子と（TCR）相互作用の組み合わせによって活性化され、B7.1/B7.2でCD28受容体の相互作用は15リガンド 。 TCR刺激およびCD28共刺激の提供に加えて、抗原提示細胞は、それによって所与の抗原に対するTリンパ球の応答を導く、Tリンパ球の分化状態を決定するサイトカイン環境を提供する。異なる病原体/抗原提示細胞の相互作用は、イーライに焦点を当てた別個の経路をTリンパ球をダウンスキュー異なるサイトカイン環境を作成する開始病原体のmination。残念ながら、元々の病原体を根絶するために設計された侵入するTリンパ球のエフェクター経路は、誤って自己組織15に向けることができる。したがって、各別個のCD4 + T細胞サブセットの分化状態のより良い理解は、病原体の排除と自己に対する寛容とのバランスを調節する方法についての我々の理解に重要である。 のTh1、Th2の、および誘導性調節性T細胞分化経路に加えて、ナイーブTリンパ球はまた、ダウン経路のTh17サイトカインにより駆動することができる。 Th1細胞は細胞内病原体戦闘一方、Th2細胞は、細胞外病原体を排除し、調節性T細胞（Tregs）は、炎症応答1,16を最小限に抑える、Th17細胞は、細胞外細菌および真菌の排除に重要な役割を果たしている。 Th17細胞は、一般に、系統特異的転写因子であるRORγtの発現およびILの産生を付しているマクロファージおよび好中球1,7の活性化を促進-17A、。 Th17細胞は、幾つかの自己免疫疾患、およびそれらに関連するげっ歯類モデルに関与している。例えば、それはIL-23（Th17の表現型を維持するために必要とされる）ことが実証されているではなく、IL-12、実験的自己免疫性脳炎（EAE）におけるMSのための齧歯類疾患モデル中央犯人であった。それは、その後、IL-17産生の減少がEAEの予防2、6、17に相関することが示されている。また、Th17細胞は、関節炎および全身性エリテマトーデス（SLE）10、16を含む他の自己免疫疾患と関連している。 IL-23 のp19欠損- / -マウスTh17細胞の非常に低い数値を有することが示されており、EAEだけでなく、現像に耐性であるが、コラーゲン誘導関節炎、関節リウマチ10,18のモデルをした。加えて、マウスは、後方にIL-17Aの中和抗体で処置小胞体コラーゲン誘導関節炎の発症はまた、関節損傷18の分解能を有することが見出された。なお、最近の研究はまた、1型糖尿病9,11および腸炎症14におけるTh17細胞の保護的役割が示されているような自己免疫疾患の進行におけるTh17細胞の役割は特徴付けされないままであることに留意されたい。これらの研究は、自己免疫におけるTh17の分化の重要性を確認。 さらなる調査が必要で、少なくとも2困惑の質問があるので、 体外のTh17分化の T細胞の研究に必要なメソッドです。1）どのように正確に、IL-6は、Treg細胞とTh17の分化との間のバランスを調節しないと、2）正確なメカニズムは何ですかIL-17誘導性の炎症性疾患の背後にある？我々の方法は、C57BL / 6マウスの脾臓およびリンパ節からのCD4 + CD25-T細胞を使用する。なお、留意することが重要であることは、不純を使用してTh17の分化を誘導することが可能であるが集団は、少なくとも80％純粋なCD4 + CD25-T細胞の集団を取得することにより、汚染の心配を否定し、より成功のTh17分化の結果を確実にする。適切なTh17の分化を達成するために、CD4 + CD25-T細胞を、それぞれ、抗CD3および抗CD28、活性化シグナルを提供する、1および2の存在下でインキュベートし、IL-6、およびTGF-β。それはIL-23単独ではTh17の分化を達成するために用いることができることが報告されているが、これは後でIL-23がTh17分化細胞集団の安定性のために必要であることが実証されたが、IL-6およびTGF-βは、Th17細胞の分化に必須である3、18、19。マウスの研究は、IL-23受容体は、それらがIL-6およびTGF-β13,18で刺激された後にのみCD4 + T細胞上で発現されることを示した。また、Th17細胞が正常であればIL-6およびTGF-β18,19存在するようなIL-23遮断抗体の存在下で発症する。このように、本のTh17分化プロトコルPROV正常のTh17分化を誘導するために適切な条件をIDES。 Th17の分化のメカニズムのよりよい理解を開発し、IL-17産生が自己免疫疾患13を目的とした、より良い治療法の開発のための機会を提示する。

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagent/Material</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Polyestrene Petri Dish</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>0875713A</td>
 <td>60 mm x 15 mm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>autoMACS Running Buffer</td>
 <td>Miltenyi Biotec</td>
 <td>130-091-221</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Premium Microscope Slides, Frosted</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>12-544-3</td>
 <td>3" x 1"1 mm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5 ml 21G1 Latex Free Syringe and Needle</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>309632</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Corning 15 ml Centrifuge Tubes</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>CLS430791</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nylon 40 microns</td>
 <td>Miami Aquaculture</td>
 <td>Nylon 40/26</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microtest tissue culture plate 96 well U bottom </td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>35-3077</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Corning Costar 24 well cell culture plates</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>CL3524</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Eppendorf Tubes 1.5 ml</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>05-408-129</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Purified NA/LE Hamster Anti-Mouse CD3e</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553057</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Purified NA/LE Hamster Anti-Mouse CD28</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553294</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mouse IL-6 Recombinant Protein</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>14-8061-62</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TGFbeta</td>
 <td>R&amp;D Systems</td>
 <td>240-B-002</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trypan blue solution 0.4 %</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>66H2364</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pac Blue Rat Anti-Mouse CD4</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>558107</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>APC Rat Anti-Mouse CD8a</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553035</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PE Conjugated Anti-mouse CD25</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>E01155-516</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alexa Fluor 700 Rat Anti-mouse IL-17</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>560820</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Intracellular Cytokine Staining Starter Kit-Mouse</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>51-2041AK (559311)</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MACS CD4+CD25+ regulatory T cell isolation kit, mouse</td>
 <td>Miltenyi Biotec</td>
 <td>130-091-221</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ABAM </td>
 <td>Cellgro</td>
 <td>30-004-CI</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>RPMI</td>
 <td>Corning, Cellgro</td>
 <td>10-040-CM</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>B 2-MercaptoEthanol</td>
 <td>MP Biomedical</td>
 <td>194834</td>
 <td>Hazardous</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA)</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ionomycin Calcium Salt</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>13909-1ML</td>
 <td>Hazardous</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Brefeldin A (BFA)</td>
 <td>MP Biomedicals</td>
 <td>159027</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ELISA IL-17A Capture mAb </td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555068</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ELISA IL-17A Detection mAb </td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555067</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ELISA IL-17A Standard</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>14-8171-80</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>IL-2 ELISA Kit</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555148</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TMB Substrate Reagent Set </td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555214</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>autoMACS Pro Cell Separator</td>
 <td>Miltenyi Biotec</td>
 <td>130-092-545</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sorvall Legend RT+ Centrifuge</td>
 <td>ThermoScientific</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Napco series 8000 WJ CO2 Incubator</td>
 <td>ThermoScientific</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PTC-200 Peltier Thermal Cycler</td>
 <td>Biorad</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolation and th17 differentiation of na&iuml;ve cd4 t lymphocytes

Th17細胞は、インターロイキン17（IL-17）を産生することが見出されているT細胞の別個のサブセットである、およびTh1、Th2の、および調節T細胞を含む他のT細胞サブセットの機能が異なる。 Th17細胞は、多くの自己免疫疾患に関連した熱心炎症性免疫応答において中心的な原因として浮上している。この方法では、C57BL / 6マウスの脾臓およびリンパ節からのTリンパ球を精製し、制御およびTh17分化を誘導する環境下での精製されたCD4 + T細胞を刺激する。 Th17分化を誘導する環境を、抗CD3および抗CD28抗体、IL-6、およびTGF-βの存在下での刺激を含む。少なくとも72時間、および37℃で最長5日間インキュベートした後、細胞を、続いてフローサイトメトリー、定量PCRおよびELISAを介してIL-17を産生する能力について分析する。 Th17の分化CD4 + CD25-T細胞はさらに、Th17細胞が自己免疫およびホスト·ドの発症および進行に果たす役割を解明するために利用することができる国防。また、個別のマウスノックアウト/疾患モデルからのCD4 + CD25 - リンパ球のTh17の分化は、細胞運命の可塑性の我々の理解に貢献することができます。

このTh17の分化プロトコルは、脾臓の摘出および腋窩、上腕、腸間膜、頸部、および鼠径リンパ節から始まります。それぞれの位置の表現は、 図2および図3に見出すことができる。図1および図5の両方が、このプロトコルに記載された方法の視覚的表現を提供する。 このTh17のプロトコルは、CD4 + CD25 - Tリンパ球集団から?...

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Isolation and Th17 Differentiation of Na&amp;#239;ve CD4 T Lymphocytes

他のT細胞サブセットとは異なるエフェクター機能を持つ、Th17細胞は、中央炎症性自己免疫に関与している。このインビトロのTh17分化プロトコルは、ナイーブCD4 + Tリンパ球は、Th17細胞に分化することができ、さらに自己免疫および宿主応答におけるそれらの役割を検討するかどうかを決定するための手段を提供する。

離とナイーブCD4 Tリンパ球のTh17分化

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

34.3K ビュー.  The University of Florida. 他のT細胞サブセットとは異なるエフェクター機能を持つ、Th17細胞は、中央炎症性自己免疫に関与している。このインビトロのTh17分化プロトコルは、ナイーブCD4 + Tリンパ球は、Th17細胞に分化することができ、さらに自己免疫および宿主応答におけるそれらの役割を検討するかどうかを決定するための手段を提供する。 

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Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of malignancies 1. CTLs can recognize malignant cells by interacting tumor antigens with the T cell receptors (TCR), and release cytotoxins as well as cytokines to kill malignant cells. It is known that less-differentiated and central-memory-like (termed highly reactive) CTLs are the optimal population for ACT-based immunotherapy, because these CTLs have a high proliferative potential, are less prone to apoptosis than more differentiated cells and have a higher ability to respond to homeostatic cytokines 2-7. However, due to difficulties in obtaining a high number of such CTLs from patients, there is an urgent need to find a new approach to generate highly reactive Ag-specific CTLs for successful ACT-based therapies.
TCR transduction of the self-renewable stem cells for immune reconstitution has a therapeutic potential for the treatment of diseases 8-10. However, the approach to obtain embryonic stem cells (ESCs) from patients is not feasible. Although the use of hematopoietic stem cells (HSCs) for therapeutic purposes has been widely applied in clinic 11-13, HSCs have reduced differentiation and proliferative capacities, and HSCs are difficult to expand in in vitro cell culture 14-16. Recent iPS cell technology and the development of an in vitro system for gene delivery are capable of generating iPS cells from patients without any surgical approach. In addition, like ESCs, iPS cells possess indefinite proliferative capacity in vitro, and have been shown to differentiate into hematopoietic cells. Thus, iPS cells have greater potential to be used in ACT-based immunotherapy compared to ESCs or HSCs.
Here, we present methods for the generation of T lymphocytes from iPS cells in vitro, and in vivo programming of antigen-specific CTLs from iPS cells for promoting cancer immune surveillance. Stimulation in vitro with a Notch ligand drives T cell differentiation from iPS cells, and TCR gene transduction results in iPS cells differentiating into antigen-specific T cells in vivo, which prevents tumor growth. Thus, we demonstrate antigen-specific T cell differentiation from iPS cells. Our studies provide a potentially more efficient approach for generating antigen-specific CTLs for ACT-based therapies and facilitate the development of therapeutic strategies for diseases.

Generation of T lymphocytes from induced pluripotent stem (iPS) cells gives an alternative approach of using embryonic stem cells for T cell-based immunotherapy. The method shows that by utilizing either in vitro or in vivo induction system, iPS cells are able to differentiate into both conventional and antigen-specific T lymphocytes.

Tリンパ球に向かって誘導多能性幹細胞の分化の指示

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

免疫・感染学

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 T cells in vitro with TCR- and co-stimulation in the presence of TGF&beta; and IL-2. This bears enormous potential for future therapies, however, the molecules and signaling pathways that control differentiation are largely unknown.
Primary T cells can be manipulated through ectopic gene expression, but common methods fail to target the most important naive state of the T cell prior to primary antigen recognition. Here, we provide a protocol to express ectopic genes in naive CD4 T cells in vitro before inducing Treg differentiation. It applies transduction with the replication-deficient adenovirus and explains its generation and production. The adenovirus can take up large inserts (up to 7 kb) and can be equipped with promoters to achieve high and transient overexpression in T cells. It effectively transduces naive mouse T cells if they express a transgenic Coxsackie adenovirus receptor (CAR). Importantly, after infection the T cells remain naive (CD44low, CD62Lhigh) and resting (CD25-, CD69-) and can be activated and differentiated into Tregs similar to non-infected cells. Thus, this method enables manipulation of CD4 T cell differentiation from its very beginning. It ensures that ectopic gene expression is already in place when early signaling events of the initial TCR stimulation induces cellular changes that eventually lead into Treg differentiation.

Adenoviral gene transfer into naive CD4 T cells with transgenic expression of the Coxsackie adenovirus receptor enables the molecular analysis of regulatory T cell differentiation in vitro.

ナイーブCD4のアデノウイルス形質導入Tregの分化を研究するためにT細胞

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition of cognate antigen presented on MHC class II. The cytokine signals present in the environment at the time of TCR activation are a major factor in determining the effector fate of a na&#239;ve CD4+ T cell. Although the cytokine environment during na&#239;ve T cell activation may be complex and involve both redundant and opposing signals in vivo, the addition of various cytokine combinations during naive CD4+ T cell activation in vitro can readily promote the establishment of effector T helper lineages with hallmark cytokine and transcription factor expression. Such differentiation experiments are commonly used as a first step for the evaluation of targets believed to promote or inhibit the development of certain CD4+ T helper subsets. The addition of mediators, such as signaling agonists, antagonists, or other cytokines, during the differentiation process can also be used to study the influence of a particular target on T cell differentiation. Here, we describe a basic protocol for the isolation of na&#239;ve T cells from mouse and the subsequent steps necessary for polarizing na&#239;ve cells to various T helper effector lineages in vitro.

Mouse Na&amp;#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Na&#239;ve CD4+ T cells polarize to various subsets depending on the environment at the time of activation. The differentiation of na&#239;ve CD4+ T cells to various effector subsets can be achieved in vitro through the addition of T cell receptor stimuli and specific cytokine signals.

マウスナイーブCD4<sup&gt; +</sup&gt; T細胞の単離と<em&gt;インビトロ</em&gt; T細胞サブセットへの分化

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Efficient Isolation Protocol for B and T Lymphocytes from Human Palatine Tonsils

Tonsils form a part of the immune system providing the first line of defense against inhaled pathogens. Usually the term &#8220;tonsils&#8221; refers to the palatine tonsils situated at the lateral walls of the oral part of the pharynx. Surgically removed palatine tonsils provide a convenient accessible source of B and T lymphocytes to study the interplay between foreign pathogens and the host immune system. This video protocol describes the dissection and processing of surgically removed human palatine tonsils, followed by the isolation of the individual B and T cell populations from the same tissue sample. We present a method, which efficiently separates tonsillar B and T lymphocytes using an antibody-dependent affinity protocol. Further, we use the method to demonstrate that human adenovirus infects specifically the tonsillar T cell fraction. The established protocol is generally applicable to efficiently and rapidly isolate tonsillar B and T cell populations to study the role of different types of pathogens in tonsillar immune responses.

Palatine tonsils are a rich source of B and T lymphocytes. Here we provide an easy, efficient and rapid protocol to isolate B and T lymphocytes from human palatine tonsils. The method described has been specifically adapted for studies of the viral etiology of tonsil inflammation known as tonsillitis.

ヒトパラティーノ扁桃腺からBおよびTリンパ球の効率的な単離プロトコール

Tonsils form a part of the immune system providing the first line of defense against inhaled pathogens. Usually the term &#8220;tonsils&#8221; refers to ...

Isolation and Ex Vivo Culture of V&#948;1+CD4+&#947;&#948; T Cells, an Extrathymic &#945;&#946;T-cell Progenitor

The thymus, the primary organ for the generation of &#945;&#946; T cells and backbone of the adaptive immune system in vertebrates, has long been considered as the only source of &#945;&#946;T cells. Yet, thymic involution begins early in life leading to a drastically reduced output of na&#239;ve &#945;&#946;T cells into the periphery. Nevertheless, even centenarians can build immunity against newly acquired pathogens. Recent research suggests extrathymic &#945;&#946;T cell development, however our understanding of pathways that may compensate for thymic loss of function are still rudimental. &#947;&#948; T cells are innate lymphocytes that constitute the main T-cell subset in the tissues. We recently ascribed a so far unappreciated outstanding function to a &#947;&#948; T cell subset by showing that the scarce entity of CD4+ V&#948;1+&#947;&#948; T cells can transdifferentiate into &#945;&#946;T cells in inflammatory conditions. Here, we provide the protocol for the isolation of this progenitor from peripheral blood and its subsequent cultivation. V&#948;1 cells are positively enriched from PBMCs of healthy human donors using magnetic beads, followed by a second step wherein we target the scarce fraction of CD4+ cells with a further magnetic labeling technique. The magnetic force of the second labeling exceeds the one of the first magnetic label, and thus allows the efficient, quantitative and specific positive isolation of the population of interest. We then introduce the technique and culture condition required for cloning and efficiently expanding the cells and for identification of the generated clones by FACS analysis. Thus, we provide a detailed protocol for the purification, culture and ex vivo expansion of CD4+ V&#948;1+&#947;&#948; T cells. This knowledge is prerequisite for studies that relate to this &#945;&#946;T cell progenitor`s biology and for those who aim to identify the molecular triggers that are involved in its transdifferentiation.

Isolation and Ex Vivo Culture of V&amp;#948;1+CD4+&amp;#947;&amp;#948; T Cells, an Extrathymic &amp;#945;&amp;#946;T-cell Progenitor

Here, we provide an optimized protocol for the isolation and cloning of the scarce T-cell entity of peripheral V&#948;1+CD4+ T cells that is, as we showed recently, an extrathymic &#945;&#946; T-cell progenitor. This technique allows to quantitatively isolate, clone and efficiently expand these cells in ex vivo culture.

単離と<em&gt;エクスビボ</emVδ1の&gt;文化<sup&gt; +</sup&gt; CD4<sup&gt; +</sup&gt;γδT細胞、胸腺外αβT細胞前駆

The thymus, the primary organ for the generation of &#945;&#946; T cells and backbone of the adaptive immune system in vertebrates, has long been ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading pathogen1,2. Understandably, such intricate abilities are controlled by a large number of molecules involved in various cellular processes to ensure timely and spatially regulated immune responses3. Here, we describe experimental procedures that allow rapid isolation of highly purified murine lymphocytes using magnetic cell sorting technology. The resulting purified lymphocytes can then be subjected to various in vitro or in vivo functional assays, such as the determination of lymphocyte signaling capacity upon stimulation by immunoblotting4 and the investigation of proliferative abilities by 3H-thymidine incorporation or carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) labeling5-7. In addition to comparing the functional capacities of control and genetically modified lymphocytes, we can also determine the T cell stimulatory capacity of antigen-presenting cells (APCs) in vivo, as shown in our representative results using transplanted CFSE-labeled OT-I T cells.

Lymphocytes are the major players in adaptive immune responses. Here, we present a lymphocyte purification protocol to determine the physiological functions of the desired molecules in lymphocyte activation in vitro and in vivo. The described experimental procedures are suitable for comparing functional capacities between control and genetically modified lymphocytes.

単離とマウスリンパ球の活性化

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing autoimmune diseases. Clinical approaches to adoptively transfer Tregs, or to deplete Tregs in cancer, are underway with promising first outcomes. 
Because the number of naturally occurring Tregs (nTregs) is very limited, studying certain Treg features using in vitro induced Tregs (iTregs) can be advantageous. To date, the best although not absolutely specific protein marker to delineate Tregs is the transcription factor FOXP3. Despite the importance of Tregs including non-redundant roles of peripherally induced Tregs, the protocols to generate iTregs are currently controversial, particularly for human cells. This protocol therefore describes the in vitro differentiation of human CD4+FOXP3+ iTregs from human na&#239;ve T cells using a range of Treg-inducing factors (TGF-&#946; plus IL-2 only, or their combination with retinoic acid, rapamycin or butyrate) in parallel. It also describes the phenotyping of these cells by flow cytometry and qRT-PCR. 
These protocols result in reproducible expression of FOXP3 and other Treg signature genes and enable the study of general FOXP3-regulatory mechanisms as well as protocol-specific effects to delineate the impact of certain factors. iTregs can be utilized to study various phenotypic aspects as well as molecular mechanisms of Treg induction. Detailed molecular studies are facilitated by relatively large cell numbers that can be obtained. 
A limitation for the application of iTregs is the relative instability of FOXP3 expression in these cells compared to nTregs. iTregs generated by these protocols can also be used for functional assays such as studying their suppressive function, in which iTregs induced by TGF-&#946; plus retinoic acid and rapamycin display superior suppressive activity. However, the suppressive capacity of iTregs can differ from nTregs and the use of appropriate controls is crucial.

&lt;em&gt;In Vitro&lt;/em&gt; Differentiation of Human CD4&lt;sup&gt;+&lt;/sup&gt;FOXP3&lt;sup&gt;+&lt;/sup&gt; Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&amp;#239;ve CD4&lt;sup&gt;+&lt;/sup&gt; T Cells Using a TGF-&amp;#946;-containing Protocol

This protocol describes the reproducible generation and phenotyping of human induced regulatory T cells (iTregs) from na&#239;ve CD4+ T cells in vitro. Different protocols for FOXP3 induction allow for the study of specific iTreg phenotypes obtained with respective protocols.

TGF-βを含むプロトコルを使用したナイーブCD4 + T細胞からのヒトCD4 + FOXP3 +誘導された調節性T細胞（iTregs）のインビトロ分化における

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

Investigating Aortic Valve Calcification via Isolation and Culture of T Lymphocytes using Feeder Cells from Irradiated Buffy Coat

Calcific aortic valve disease (CAVD), an active disease process ranging from mild thickening of the valve to severe calcification, is associated with high mortality, despite new therapeutic options such as transcatheter aortic valve replacement (TAVR). 
The complete pathways that start with valve calcification and lead to severe aortic stenosis remain only partly understood. By providing a close representation of the aortic valve cells in vivo, the assaying of T lymphocytes from stenotic valve tissue could be an efficient way to clarify their role in the development of calcification. After surgical excision, the fresh aortic valve sample is dissected in small pieces and the T lymphocytes are cultured, cloned then analyzed using fluorescence activated cell sorting (FACS).
The staining procedure is simple and the stained tubes can also be fixed using 0.5% of paraformaldehyde and analyzed up to 15 days later. The results generated from the staining panel can be used to track changes in T cell concentrations over time in relation to intervention and could easily be further developed to assess activation states of specific T cell subtypes of interest. In this study, we show the isolation of T cells, performed on fresh calcified aortic valve samples and the steps of analyzing T cell clones using flow cytometry to further understand the role of adaptive immunity in CAVD pathophysiology.

In this study, we describe the process of T lymphocyte isolation from fresh samples of calcified aortic valves and the analytical steps of T cell-cloning for the characterization of the adaptive leukocyte subsets by using flow cytometry analysis.

照射されたバフィーコートからのフィーダー細胞を用いたTリンパ球の分離と培養による大動脈弁石灰化の調査

Calcific aortic valve disease (CAVD), an active disease process ranging from mild thickening of the valve to severe calcification, is associated with high ...

Analysis of HBV-Specific CD4 T-cell Responses and Identification of HLA-DR-Restricted CD4 T-Cell Epitopes Based on a Peptide Matrix

CD4 T cells play important roles in the pathogenesis of chronic hepatitis B. As a versatile cell population, CD4 T cells have been classified as distinct functional subsets based on the cytokines they secreted: for example, IFN-&#947; for CD4 T helper 1 cells, IL-4 and IL-13 for CD4 T helper 2 cells, IL-21 for CD4 T follicular helper cells, and IL-17 for CD4 T helper 17 cells. Analysis of hepatitis B virus (HBV)-specific CD4 T cells based on cytokine secretion after HBV-derived peptides stimulation could provide information not only about the magnitude of HBV-specific CD4 T-cell response but also about the functional subsets of HBV-specific CD4 T cells. Novel approaches, such as transcriptomics and metabolomics analysis, could provide more detailed functional information about HBV-specific CD4 T cells. These approaches usually require isolation of viable HBV-specific CD4 T cells based on peptide-major histocompatibility complex-II multimers, while currently the information about HBV-specific CD4 T-cell epitopes is limited. Based on an HBV-derived peptide matrix, a method has been developed to evaluate HBV-specific CD4 T-cell responses and identify HBV-specific CD4 T-cell epitopes simultaneously using peripheral blood mononuclear cells samples from chronic HBV infection patients.

Based on a hepatitis B virus (HBV)-derived peptide matrix, HBV-specific CD4 T-cell responses could be evaluated in parallel with identification of HBV-specific CD4 T-cell epitopes.

ペプチドマトリックスに基づくHBV特異的CD4 T細胞応答の解析とHLA-DR制限CD4 T細胞エピトープの同定

CD4 T cells play important roles in the pathogenesis of chronic hepatitis B. As a versatile cell population, CD4 T cells have been classified as distinct ...

急性LCMV感染における早期濾胞性ヘルパーT細胞コミットメントの解読

Accessing Early Differentiation of Virus-Specific Follicular Helper CD4+ T Cell in Acute LCMV-Infected Mice

Follicular Helper T (TFH) cells are perceived as an independent CD4+ T cell lineage that assists cognate B cells in producing high-affinity antibodies, thus establishing long-term humoral immunity. During acute viral infection, the fate commitment of virus-specific TFH cells is determined in the early infection phase, and investigations of the early-differentiated TFH cells are crucial in understanding T cell-dependent humoral immunity and optimizing vaccine design. In the study, using a mouse model of acute lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) infection and the TCR-transgenic SMARTA (SM) mouse with CD4+ T cells specifically recognizing LCMV glycoprotein epitope I-AbGP66-77, we described procedures to access the early fate commitment of virus-specific TFH cells based on flow cytometry stainings. Furthermore, by exploiting retroviral transduction of SM CD4+ T cells, methods to manipulate gene expression in early-differentiated virus-specific TFH cells are also provided. Hence, these methods will help in studies exploring the mechanism(s) underlying the early commitment of virus-specific TFH cells.

著者スポットライト:急性LCMVの課題におけるTFH細胞分化の経路の解明

The current study showcases protocols for assessing the early fate commitment of virus-specific TFH cells and manipulating gene expression in these cells.

急性LCMV感染マウスにおけるウイルス特異的濾胞性ヘルパーCD4+ T細胞の早期分化へのアクセス

Follicular Helper T (TFH) cells are perceived as an independent CD4+ T cell lineage that assists cognate B cells in producing high-affinity antibodies, ...