私たちは、行動装置の最初のバージョンを開発するのを助けたアラビンタン・サミュエル博士とマーク・ガーショー博士と行動装置を変更したマシュー・ベイティに感謝しています。この研究は、シンシナティ小児病院、JST/PRESTO、ダイムズの行進、NIH R01 GM107582からF.N.Hまでのトラスティグラントによって支援されました。

1. ハエの準備
<ol><li>ライトダーク(LD)実験
	<ol>
<li>インキュベーター(25°C/40-60%相対湿度(RH)))でハエを軽い12時間/暗い12時間(LD)サイクルで上げます。インキュベーターの光強度は〜500〜1,000ルクスです。</li>
		<li>24時間にわたって行動アッセイを完了するためには、2つのインキュベーターが必要です。両方のインキュベーターは、ON OFF機能を備えたプログラム可能なライトを備えている必要があります。また、光に透過性のない固体ドア(ガラス やプレキシガラスなし)を備え付ける必要があります。 注:1つのインキュベーターは「日」インキュベーターを指定し、12時間光と12時間暗いのLDサイクルに設定する必要があります。第2のインキュベーターは「夜」のインキュベーターに指定され、12時間の暗さと12時間の光が続く最初の逆に設定する必要があります。夜間インキュベーターは暗闇の中でアクセス可能な部屋に置かれなければならない、そのような方法で夜間の状態を経験するハエは実験のために容易にアクセスすることができる。</li>
		<li>フライバイアルは昼夜の保育器に入れる。新しく孵化したハエを新鮮なバイアル、アッセイあたり20〜30で収集し、2〜3日間同じインキュベーターに保管してください。</li>
		<li>2〜3日後、温度嗜好行動アッセイにハエを使用する。<ol>
<li>日(ツァイトゲバー時間(ZT)0-12)実験のために、日のインキュベーターからハエを収集します。</li>
			<li>行動実験の直前に、収集したハエバイアルを1日の保育器から取り出します。</li>
			<li>夜間(ZT 13-24)実験では、夜間インキュベーターからハエを収集します。</li>
			<li>行動実験の直前に、収集したフライバイアルを夜間保育器から取り出し、アルミホイルで包み、赤いランプの下の暗い部屋の箱に入れます。 注: 夜間実験では温度嗜好行動アッセイが暗闇の下で行われるため、ハエへの光暴露は行動実験が終わるまで防ぐ必要があります。 注: 実験が行われる日にハエを二酸化炭素にさらしてはいけません。</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>定常闇 (DD) 実験
	<ol>
<li>
DDの日
		<ol>
<li>DD日の実験には追加のインキュベーターが必要であり、残りの原稿の「遷移」インキュベーターと呼ばれています。遷移インキュベーターは、DD条件を経験するハエが実験のために容易にアクセスできるように、暗闇の中でアクセス可能な部屋に配置されなければならない。遷移インキュベーターのライトスケジュールの例では、午後 1 時から午後 7 時までのライトは ON、午後 7 時から午後 1 時にライト OFF が発生します (図 1)。</li>
			<li>一日の保育器で育てられたハエを収集します。フライバイアルをトランジションインキュベーターに設置し、ライトが点灯する午後1時から午後7時の間に配置します。このようにして、ハエは午後7時まで適切に光にさらされ、その時点でライトは遮断されます。</li>
			<li>翌日、午後1時前、暗い条件下で、移行インキュベーターからフライバイアルを取り出し、アルミホイルで包み、箱に入れます。箱を任意のインキュベーターにもう1日保管してください。</li>
		</ol>
</li>
		<li>
DDナイト
		<ol>
<li>赤いランプの下で暗闇の中で夜の保育器で上げられたハエを収集します。夜間保育器のライトがオンのときにハエを追加収集します。</li>
			<li>ライトがOFFであるときはいつでも暗闇の中でアルミホイルで収集されたバイアルをラップし、箱にバイアルを置きます。任意のインキュベーターに箱をあと2日間保管してください(図1B)。 注: 夜間実験では温度嗜好行動アッセイが暗闇の下で行われるため、ハエへの光暴露は行動実験が終わるまで防ぐ必要があります。</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>コンスタントライト(LL)実験
	<ol>
<li>
LLの日
		<ol>
<li>LL日の実験には追加のインキュベーターが必要です。このインキュベーターは、LL条件(25°C、800ルクス)を維持し、ライトはオンにします。</li>
			<li>一日の保育器で育てられたハエを収集します。フライバイアルを「日中」のいつでもLLインキュベーターに入れます。</li>
		</ol>
</li>
		<li>
LLナイト
		<ol>
<li>夜間の保育器で育てられたハエを集める。夜間インキュベーターのライトがオンになっている間に、夜間インキュベーターからLLインキュベーターにフライバイアルを移します。 注: たとえば、夜間のインキュベーターでは、午前 7 時にライトが OFF になります。午前7時前に夜間インキュベーターからLLインキュベーターにフライバイアルを移し、さらに4日間LLインキュベーターにバイアルを保管します。 注: LL条件の 4 日目では、Locomotor 活動の振動は15,16で廃止され、TPR は依然として持続3です。</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. 温度嗜好行動アッセイの装置
<ol><li>プレキシガラスカバー(29cm x 19.2cm)(図4)をアルミニウム板に置きます。</li>
	<li>プレートとカバーの間の空気温度を監視します。6つの温度プローブは、1つの車線内のカバーの内側の様々な位置に取り付けられています(図2)。 注: プローブがアルミニウム板またはプレキシガラスカバーに接触していないことを確認してください。気温は18~32°Cの勾配に設定する必要があります。</li>
	<li>25°C/65-75%RHに維持された環境室に装置を置きます。この部屋は、外の光から遮断する必要があります。環境室は、通常、一定の温度と湿度を維持するためにファンが装備されています。 注: ファンからの空気は、装置上の安定した温度勾配を乱す可能性があります。これを防ぐために、装置の周囲を覆う透明シートを使用します。</li>
	<li>温度計と湿度計を用意して、環境室の温度と湿度を確認します。 注: 光はショ ウジョウバエ3の温度設定に影響を与えます。同じ強度の光を装置に均一に供給する必要があります。環境室の照明の強度は約800ルクスです。 注意:動作実験が行われたら、CO2 タンクから接続されたチューブを配置するか、装置の上部の穴の近くに供給して、ハエを麻酔して取り除きます。</li>
</ol>3. 使用装置の準備
<ol><li>プレートの表面に温度勾配を正しく設定するために、装置を30分以上オンにする(図3)。</li>
	<li>ハエがカバーの壁や天井を登るのを防ぐために、行動装置のカバーに撥水剤を塗ります。余分な撥水剤を拭き取り、蓋を25〜30分間放置して乾燥させます。</li>
	<li>アルミニウム板の結露を取り除きます。プレキシガラスカバーをアルミニウムプレートに置き、6つのCクランプで固定します(図2)。 注:必要に応じて、カバーがうまく密封されることは非常に重要です。</li>
	<li>カバーは少なくとも15分間放置します。アルミニウム板とカバーの間の空気温度勾配は18-32 °Cから作成される。</li>
</ol>4. 温度設定挙動アッセイ
<ol><li>フライを、カバーの各車線の中央にある小さな穴を通して、装置のアルミニウム板とプレキシガラスカバーとの間の空間に積み込む(図2 および 図4)。ハエが逃げるのを防ぐためにカバースリップで穴を覆います。</li>
	<li>暗い状態の場合は、環境室のすべてのライトをオフにします。赤いランプは、ハエが装置に置かれたときに使用することができます。動作実験が完了するまで、ハエが赤いランプ以外のライトにさらされないようにします。</li>
	<li>各試験では、20〜25個の成体ハエを使用してください。行動アッセイは30分間行われる。フラッシュの有無にかかわらず、いくつかの写真を撮ります。実験中に多くの音や突然の動きをしないように注意してください。</li>
	<li>装置上の6つのプローブの温度をすべて記録します。室温と湿度をメモしてください。</li>
	<li>二酸化炭素ガスで装置内のハエを麻酔し、クランプを緩め、プレキシガラスカバーを取り外し、プレートからハエを取り除きます。各実験の後、ハエは廃棄されます。プレートから凝縮や水分を拭き取ります。プレートのカバーを交換し、次の実験に備えてクランプで締めます。</li>
	<li>1 日を通して温度の好みの表現を持つために、24 時間の期間は 8 つのタイム ゾーン、4 つの時間帯、日の 4 つ、夜の 4 つに分割されます。たとえば、これらのZTまたはCT 1-3、4-6、7-9、10-12、13-15、16-18、19-21、22-24を使用します。 注: マスキング効果によって生じる表現型の変化は、ライトがON(ZT0)またはOFF(ZT12)になった直後に予想されるため、これらの時間(ZTまたはCT 0-1、11.5-13および23.5-24)の間の温度の好みの挙動は調べません。結果を統計的に健全にするには、各タイムゾーンで少なくとも5回の試行を行う必要があります。</li>
</ol>5. データ分析
<ol><li>温度勾配を次のように計算する:プレキシガラスカバーの上面と下側の端に配置された2つの定規に基づいて、温度プローブが配置される場所を決定します(図2A)。</li>
	<li>温度プローブ間の温度勾配は線形であると推定される。温度プローブの位置と、それに対応する記録された温度に基づいて、写真上の適切な位置の温度の各程度を表す線を描きます。各度間隔で見つかったハエの数を数えます。壁やカバーの天井にハエを除外します。</li>
	<li>各車線の各温度範囲におけるハエの割合を計算します。平均優先温度は、次に示すように、各区間のハエと温度の割合の積を合計して計算されます。 ハエx 18.5 °C +ハエの18.5 °C +%x 19.5 °C + ハエの%x 20.5 °C...+ハエx 31.5 °C +ハエx 32.5°Cの%</li>
	<li>各タイムゾーンでの平均優先温度を計算する:温度優先動作は、各タイムゾーン(ZT 1-3、4-6、7-9、10-12、13-15、16-18、19-21、および22-24)の間に>5回実行されます。各時間帯における平均好ましい温度を算出するために、各試験の平均好ましい温度を一緒に平均した。s.e.m. エラー バーは、試行間の誤差と同じです。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Krauchi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thermophysiological+cascade+leading+to+sleep+initiation+in+relation+to+phase+of+entrainment.">The thermophysiological cascade leading to sleep initiation in relation to phase of entrainment.</a> Sleep Med. Rev. 11, 439-451 (2007).</li><li>Krauchi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+sleep-wake+cycle+reconsidered+from+a+thermoregulatory+point+of+view.">The human sleep-wake cycle reconsidered from a thermoregulatory point of view.</a> Physiol. Behav. 90, 236-245 (2007).</li><li>Kaneko, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+Rhythm+of+Temperature+Preference+and+Its+Neural+Control+in+Drosophila.">Circadian Rhythm of Temperature Preference and Its Neural Control in Drosophila.</a> Curr. Biol. 22, 1851-1857 (2012).</li><li>Allada, R., Chung, B. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+organization+of+behavior+and+physiology+in+Drosophila.">Circadian organization of behavior and physiology in Drosophila.</a> Annu. Rev. Physiol. 72, 605-624 (2010).</li><li>Garrity, P. A., Goodman, M. B., Samuel, A. D., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Running+hot+and+cold:+behavioral+strategies,+neural+circuits,+and+the+molecular+machinery+for+thermotaxis+in+C.+elegans+and+Drosophila..">Running hot and cold: behavioral strategies, neural circuits, and the molecular machinery for thermotaxis in C. elegans and Drosophila..</a> Genes Dev. 24, 2365-2382 (2010).</li><li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila.">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li><li>Hong, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+signalling+in+mushroom+bodies+modulates+temperature+preference+behaviour+in+Drosophila.">cAMP signalling in mushroom bodies modulates temperature preference behaviour in Drosophila.</a> Nature. 454, 771-775 (2008).</li><li>Dillon, M. E., Wang, G., Garrity, P. A., Huey, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Thermal+preference+in+Drosophila.">Review: Thermal preference in Drosophila.</a> J. Therm. Biol. 34, 109-119 (2009).</li><li>Viswanath, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+thermosensor+in+fruitfly+and.">Opposite thermosensor in fruitfly and.</a> Nature. 423, 822-823 (2003).</li><li>Gallio, M., Ofstad, T. A., Macpherson, L. J., Wang, J. W., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coding+of+temperature+in+the+Drosophila+brain.">The coding of temperature in the Drosophila brain.</a> Cell. 144, 614-624 (2011).</li><li>Stevenson, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+importance+of+behavioral+and+physiological+adjustments+controlling+body+temperature+in+terrestrial+ectotherms.">The relative importance of behavioral and physiological adjustments controlling body temperature in terrestrial ectotherms.</a> Am. Nat. 126 (3), (1985).</li><li>Refinetti, R., Menaker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+body+temperature.">The circadian rhythm of body temperature.</a> Physiol. Behav. 51, 613-637 (1992).</li><li>Duffy, J. F., Dijk, D. J., Klerman, E. B., Czeisler, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Later+endogenous+circadian+temperature+nadir+relative+to+an+earlier+wake+time+in+older+people.">Later endogenous circadian temperature nadir relative to an earlier wake time in older people.</a> Am. J. Physiol. 275, 1478-1487 (1998).</li><li>Saper, C. B., Lu, J., Chou, T. C., Gooley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypothalamic+integrator+for+circadian+rhythms.">The hypothalamic integrator for circadian rhythms.</a> Trends Neurosci. 28, 152-157 (2005).</li><li>Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+behaviour+associated+with+altered+homeostasis+and+photosensitivity+of+Drosophila+clock+mutants.">Reciprocal behaviour associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants.</a> J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).</li><li>Qiu, J., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=per+mRNA+cycling+is+locked+to+lights-off+under+photoperiodic+conditions+that+support+circadian+feedback+loop+function.">per mRNA cycling is locked to lights-off under photoperiodic conditions that support circadian feedback loop function.</a> Mol. Cell Biol. 16, 4182-4188 (1996).</li><li>Crocker, A., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+sleep.">Genetic analysis of sleep.</a> Genes Dev. 24, 1220-1235 (1220).</li><li>Hendricks, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rest+in+Drosophila+is+a+sleep-like+state.">Rest in Drosophila is a sleep-like state.</a> Neuron. 25, 129-138 (2000).</li><li>Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlates+of+sleep+and+waking+in+Drosophila+melanogaster.">Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster.</a> Science. 287, 1834-1837 (2000).</li><li>Parisky, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDF+cells+are+a+GABA-responsive+wake-promoting+component+of+the+Drosophila+sleep+circuit.">PDF cells are a GABA-responsive wake-promoting component of the Drosophila sleep circuit.</a> Neuron. 60, 672-682 (2008).</li></ol>

開示するものは何もありません。

ここでは、温度嗜好動作装置の詳細とTPR動作の分析を図示する。 ショウジョウバエ は、クロック制御TPRの顕著で堅牢で再現性の高い機能を発揮します。しかし、我々のデータは、少なくとも2つの要因、周囲光と年齢がTPR行動性の型を著しく乱していることを示唆している。
我々は光がショ ウジョウバエの温度の好みに大きく影響することを観察する。LD?...

温度はユビキタスな環境の手掛かりです。動物は、有害な温度を避け、快適なものを求めるために様々な行動を示します。 ショウジョウバエ は、堅牢な温度嗜好行動6,7を示す。ハエが18〜32°Cの温度勾配に放出されると、ハエは暖かく、寒い温度の両方を避け、最終的に朝3で25°Cの好ましい温度を選択します。温温センサは、一組の温度感覚ニューロン、ACニューロン、 ショウジョウバエ 一過性受容体電位(TPR)チャネル、TRPA16,9を発現する。第3アンテナセグメントをアブラブルすると、寒温度回避の欠如が発生するため、冷温センサは第3のアンテナセグメントに位置しています。最近、TRPPタンパク質ブリビド(Brv)が10を同定した。Brvは第3のアンテナセグメントで表現され、コールド検出を媒介するので、Brvは温度嗜好の挙動にとって重要な、可能な冷感感分子である。要するに、ハエは暖かく寒い温度を避け、好ましい温度を見つけるために、これらの2つの温度センサーを使用しています。
哺乳類は体温を調節するために熱を発生させるが、外生は一般的に体温を周囲温度11に適応させる。いくつかのエクトタームは、そのBTR12を調節するためのエクトテアムのための戦略であると考えられている毎日のTPR行動を示すことが知られている。ハエがTPRを示したかどうかを判断するために、24時間のスパンの間に様々な点で温度嗜好挙動解析を繰り返した。ショ ウジョウバエ は、朝は低く、夕方には高く、ヒト13のBTRと同様のパターンに従う毎日のTPRを示すことがわかりました。
ショウジョウバエでは、脳内に約150個のクロックニューロンがあります。運動活動を調節するクロックニューロンは、MとEの発振器と呼ばれます。しかし興味深いことに、MとEのオシレータはTPRを調節せず、代わりに、脳内のDN2クロックニューロンがTPRを調節するが、運動活動は行わないことを示した。これらのデータは、TPRが運動活動とは無関係に規制されていることを示している。特に、哺乳類のBTRは、運動活動から独立して調節される。ラットにおけるアブレーション研究は、BTRが、運動活動14を制御するものとは異なるパラベントリーゾーンニューロンのサブセットを標的とする特定のSCNニューロンを介して制御されることを示している。したがって、我々のデータは、飛行TPRと哺乳類BTRの両方が運動活動から独立して調節される概日時計依存温度リズムを示すので、哺乳類のBTRとフライTPRが進化的に保存される可能性を考慮する。
ここでは、ショ ウジョウバエにおけるTPR行動アッセイの分析方法の詳細を説明する。この方法は、TPRの分子機構と神経回路だけでなく、脳が異なる環境キューと内部生物学的時計をどのように統合するかを調査することを可能にする。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="578">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:172px;">Bright Lab Jr. Safelight</td>
			<td style="width:109px;">Amazon</td>
			<td style="width:153px;">#B00013J8UY</td>
			<td style="width:144px;">Red light for dark rooms</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:172px;">Rain X</td>
			<td style="width:109px;">SOPUS products</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">Water repellent: Apply the plexiglass cover</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:172px;">C-Clamp</td>
			<td style="width:109px;">Home Depot</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:172px;">Temperature/hygrometer</td>
			<td style="width:109px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">15-077-963</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:172px;"></td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:172px;">Peltier devices</td>
			<td style="width:109px;">TE Technology, Inc.</td>
			<td style="width:153px;">HP-127-1.4-1.15-71P</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:172px;">Thermometer</td>
			<td style="width:109px;">Fluke</td>
			<td style="width:153px;">Fluke 52II</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:172px;">Bench top controller</td>
			<td style="width:109px;">Oven Industries</td>
			<td style="width:153px;">5R6-570-15R and 5R6-570-24R</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:172px;">Temperature sensor probe</td>
			<td style="width:109px;">Oven Industries</td>
			<td style="width:153px;">TR67-32</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:172px;">Generic 480 Watt ATX power supply</td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:172px;">MCR220-QP-RES Dual 120 mm Radiator with reservoir&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:172px;">MCP350 In-Line 12V DC pump</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:172px;">MCW50 graphics Card liquid cooler</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:172px;">Scythe Kaze-Jyuni SY1225SL12SH fan</td>
			<td style="width:109px;">Crazy PC</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design and analysis of temperature preference behavior and its circadian rhythm in drosophila

概日時計は、睡眠、運動活動、体温(BTR)リズム1、2を含む人生の多くの側面を調節します。我々は最近、ハエの好ましい温度が日中に上昇し、夜3の間に落ちる温度好みリズム(TPR)と呼ばれる新しいショウジョウバエ概日出力を同定した。驚くべきことに、TPRおよび運動活動は、別個の概日ニューロン3を介して制御される。ショウジョウバエ・ロコモ運動活性は、よく知られた概日行動の出力であり、多くの保存された哺乳類の概日時計遺伝子および機構4の発見に強い貢献を提供している。したがって、TPRを理解することは、未知の分子および細胞概日メカニズムの同定につながります。ここでは、TPRアッセイの実行および分析方法について説明します。この技術は、TPRの分子および神経機構を解剖するだけでなく、異なる環境信号を統合し、動物の行動を調節する脳機能の基本的なメカニズムに関する新しい洞察を提供する。さらに、最近発表されたデータは、フライTPRが哺乳類のBTR3と特徴を共有していることを示唆している。ショウジョウバエは、体温が典型的に行動的に調節される外因性である。したがって、TPRは、これらのハエの5〜8でリズミカルな体温を生成するために使用される戦略である。ショウジョウバエTPRのさらなる探求は、動物の体温制御の基礎となるメカニズムの特徴付けを促進すると考えています。

温度設定リズムの例を図5に示します。行動手順が正常に行われた場合、ハエは朝の低温と夕方の高温を好むTPRを示す必要があります。日中の温度嗜好の中で〜1〜1.5°Cの上昇は、一日の間に観察されるべきであり、遺伝的背景に関係なく、w1118、ywおよび広東Sハエが昼間3の間に同様の温度嗜好を示していることを示した。 
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Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

我々は最近、ハエの好ましい温度が日中に上昇し、夜の間に落ちる新しい ショウジョウバエ 概日出力、温度好みリズム(TPR)を同定した。TPRは、別の概日出力、運動活動から独立して規制されています。ここでは、 ショウジョウバエにおけるTPRの設計と分析について説明します。

ショウジョウバエにおける温度嗜好挙動とその概日リズムの設計と解析

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a ...

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Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

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8.0K ビュー.  Cincinnati Childrens Hospital Medical Center. 我々は最近、ハエの好ましい温度が日中に上昇し、夜の間に落ちる新しい ショウジョウバエ 概日出力、温度好みリズム(TPR)を同定した。TPRは、別の概日出力、運動活動から独立して規制されています。ここでは、 ショウジョウバエにおけるTPRの設計と分析について説明します。

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High-resolution Measurement of Odor-Driven Behavior in Drosophila Larvae

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral paradigm, the experimenter usually assumes that the rapid diffusion of odorant molecules from the source leads to the creation of a stable gradient in the dish. To establish a quantitative correlation between sensory inputs and behavioral responses, it is necessary to achieve a more thorough characterization of the odorant stimulus conditions. In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

ショウジョウバエの幼虫の匂い駆動型の動作の高分解能測定

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral ...

生物学

Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development can be addressed. The zebrafish is useful for genetic studies due to several advantageous characteristics, including small size, high fecundity, short lifecycle, and ease of care. Lens development occurs rapidly in zebrafish. By 72 hpf, the zebrafish lens is functionally mature [3]. Abundant genetic and molecular resources are available to support research in zebrafish. In addition, the similarity of the zebrafish eye to those of other vertebrates provides basis for its use as an excellent animal model of human defects[4-7]. Several zebrafish mutants exhibit lens abnormalities, including high levels of cell death, which in some cases leads to a complete degeneration of lens tissues [8]. To determine whether lens abnormalities are due to intrinsic causes or to defective interactions with the surrounding tissues, transplantation of a mutant lens into a wild-type eye is performed. Using fire-polished metal needles, mutant or wild-type lenses are carefully dissected from the donor animal, and transferred into the host. To distinguish wild-type and mutant tissues, a transgenic line is used as the donor. This line expresses membrane-bound GFP in all tissues, including the lens. This transplantation technique is an essential tool in the studies of zebrafish lens mutants.

Lens development involves interactions with other tissues. Several zebrafish eye mutants are characterized by an abnormally small lens size. Here we demonstrate a lens transplantation experiment to determine whether this phenotype is due to intrinsic causes or defective interactions with tissues that surround the lens.

レンズゼブラフィッシュでの移植とアイ変異体の解析への応用

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle microtubules to prevent anaphase onset until the chromosomes are properly connected. Cells use this mechanism to prevent aneuploidy or genomic instability, and hence cancers and other human diseases like birth defects and Alzheimer's1. A number of the SAC components such as Mad1, Mad2, Bub1, BubR1, Bub3, Mps1, Zw10, Rod and Aurora B kinase have been identified and they are all kinetochore dynamic proteins2. Evidence suggests that the kinetochore is where the SAC signal is initiated. The SAC prime regulatory target is Cdc20. Cdc20 is one of the essential APC/C (Anaphase Promoting Complex or Cyclosome) activators3 and is also a kinetochore dynamic protein4-6. When activated, the SAC inhibits the activity of the APC/C to prevent the destruction of two key substrates, cyclin B and securin, thereby preventing the metaphase to anaphase transition7,8. Exactly how the SAC signal is initiated and assembled on the kinetochores and relayed onto the APC/C to inhibit its function still remains elusive.
Drosophila is an extremely tractable experimental system; a much simpler and better-understood organism compared to the human but one that shares fundamental processes in common. It is, perhaps, one of the best organisms to use for bio-imaging studies in living cells, especially for visualization of the mitotic events in space and time, as the early embryo goes through 13 rapid nuclear division cycles synchronously (8-10 minutes for each cycle at 25 &deg;C) and gradually organizes the nuclei in a single monolayer just underneath the cortex9.
Here, I present a bio-imaging method using transgenic Drosophila expressing GFP (Green Fluorescent Protein) or its variant-targeted proteins of interest and a Leica TCS SP2 confocal laser scanning microscope system to study the SAC function in flies, by showing images of GFP fusion proteins of some of the SAC components, Cdc20 and Mad2, as the example.

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

The kinetochore is where the SAC initiates its signal monitoring the mitotic segregation of the sister chromatids. A method is described to visualize the recruitment and turnover of one of the kinetochore proteins and its coordination with the chromosome motion in Drosophila embryos using a Leica laser scanning confocal system.

リビングでの動的動原体タンパク質の挙動と染色体の動きを図解して有糸分裂チェックポイントを勉強<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;合胞体胚

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and validated a method for CORT extraction and analysis from rhesus monkey hair and subsequently adapted this method for use with human scalp hair. In contrast to CORT &#34;point samples&#34; obtained from plasma or saliva, hair CORT provides an integrated measure of hypothalamic-pituitary-adrenocortical (HPA) system activity, and thus physiological stress, during the period of hormone incorporation. Because human scalp hair grows at an average rate of 1 cm/month, CORT levels obtained from hair segments several cm in length can potentially serve as a biomarker of stress experienced over a number of months.
In our method, each hair sample is first washed twice in isopropanol to remove any CORT from the outside of the hair shaft that has been deposited from sweat or sebum. After drying, the sample is ground to a fine powder to break up the hair&#39;s protein matrix and increase the surface area for extraction. CORT from the interior of the hair shaft is extracted into methanol, the methanol is evaporated, and the extract is reconstituted in assay buffer. Extracted CORT, along with standards and quality controls, is then analyzed by means of a sensitive and specific commercially available enzyme immunoassay (EIA) kit. Readout from the EIA is converted to pg CORT per mg powdered hair weight. This method has been used in our laboratory to analyze hair CORT in humans, several species of macaque monkeys, marmosets, dogs, and polar bears. Many studies both from our lab and from other research groups have demonstrated the broad applicability of hair CORT for assessing chronic stress exposure in natural as well as laboratory settings.

Cortisol (CORT) accumulates in the growing hair shaft of humans and nonhuman primates. We describe methods for extracting and analyzing hair CORT with high precision and sensitivity. Measurement of hair CORT is particularly well-suited for assessing chronic stress over periods of weeks to months.

ヒトおよびサル毛髪から抽出およびコルチゾールの分析

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both the female and male germ lines of Drosophila have contributed greatly to the current understanding of meiosis as well as stem cell biology. Excellent protocols are available in the literature for the isolation and imaging of Drosophila ovaries&#160;and testes3-12. Herein, methods for the dissection and preparation of Drosophila testes for microscopic analysis are described with an accompanying video demonstration. A protocol for isolating testes from the abdomen of adult males and preparing slides of live tissue for analysis by phase-contrast microscopy as well as a protocol for fixing and immunostaining testes for analysis by fluorescence microscopy are presented. These techniques can be applied in the characterization of Drosophila mutants that exhibit defects in spermatogenesis as well as in the visualization of subcellular localizations of proteins.

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Methods for isolating and preparing Drosophila testes samples (live and fixed) for imaging by phase-contrast and fluorescence microscopy are described herein.&#160;

精子形成細胞学的分析：ライブとの固定の準備<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;精巣

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Rapid Analysis of Circadian Phenotypes in Arabidopsis Protoplasts Transfected with a Luminescent Clock Reporter

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable biotic and abiotic stress. Conversely, disruption of circadian timekeeping severely compromises plant health and reduces agricultural crop yields. It is therefore imperative that we understand the intricate regulation of circadian rhythms in plants, including the factors that affect motion of the transcriptional clockwork itself.
Testing circadian defects in the model plant Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) traditionally involves crossing specific mutant lines to a line rhythmically expressing firefly luciferase from a circadian clock gene promoter. This approach is laborious, time-consuming, and could be fruitless if a mutant has no circadian phenotype. The methodology presented here allows a rapid initial assessment of circadian phenotypes. Protoplasts derived from mutant and wild-type Arabidopsis are isolated, transfected with a rhythmically expressed luminescent reporter, and imaged under constant light conditions for 5 days. Luminescent traces will directly reveal whether the free-running period of mutant plants is different from wild-type plants. The advantage of the method is that any Arabidopsis line can efficiently be screened, without the need for generating a stably transgenic luminescent clock marker line in that mutant background.

The circadian clock regulates about a third of the Arabidopsis transcriptome, but the percentage of genes that feed back into timekeeping remains unknown. Here we visualize a method to rapidly assess circadian phenotypes in any mutant line of Arabidopsis using luminescent imaging of a circadian reporter transiently expressed in protoplasts.

発光時計レポーターとシロイヌナズナプロトプラストトランスフェにおける概日表現型の迅速分析

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable ...

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. To improve the mating efficiency of B. Xylophilus and to increase the chances of mating observation, virgin adults were cultured and used for the investigation. Eggs were obtained by keeping the nematodes in water and allowing the females to lay eggs for 10 min. The second-stage juveniles (J2) were synchronized by incubating the eggs for 24 h at 25 &#176;C in the dark, and the early J4 were obtained by culturing the J2 with grey mold, Botrytis cinerea, for another 52 h. At this time point, most J4 nematodes could be clearly distinguished as being male or female using their genital morphology. The male and female J4 were collected and cultured separately in two different Petri dishes for 24 h to get virgin adult nematodes. A virgin male and a virgin female were paired in a drop of water in the well of a concave slide. The mating behavior was filmed with a video recorder under a stereomicroscope. The whole period of the mating process was 82.8 &#177;3.91 min (mean &#177;SE) and could be divided into 4 different phases: searching, contacting, copulating, and lingering. The mean minutes of duration were 21.8 &#177; 2.0, 28.0 &#177; 1.9, 25.8 &#177; 0.7 and 7.2 &#177; 0.5, respectively. Eleven sub-behaviors were described: cruising, approaching, encountering, touching, hooping, locating, attaching, ejaculating, separating, quiescence, and roaming. Interestingly, obvious intra-sexual competition was observed when one female was grouped with 3 males or one male with 3 females. This protocol is useful and valuable, not only in investigating the mating behavior of B. xylophilus, but also in acting as a reference for ethological studies of other nematodes.

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

パインウッドセンチュウの交配挙動の観察と定量化、<em&gt;マツノザイセンチュウ</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light conditions, which are preferably variable in quantity and quality so that studies under different setups can be conducted. These requirements are met by climatic chambers featuring light emitting diodes (LED) lights, which can &#8211; in contrast to fluorescent lights &#8211; be set to different wavelengths. LEDs are energy conserving and emit virtually no heat even at light intensities, which often constitutes a problem with other light sources. The presented protocol provides a step-by-step guidance of how to program a climatic chamber equipped with variable LED lights as well as describing several approaches for in depth analysis of growth phenotypes. Depending on the experimental set-up various characteristics of the growing plants can be observed and analyzed. Here we describe how to determine fresh weight, leaf area, photosynthetic activity, and stomatal density. We demonstrate that in order to obtain reliable data and draw valid conclusions it is mandatory to use a sufficient number of individuals for statistical evaluation. Taking too few plants for this kind of analysis results in high statistical errors and consequently in less clear interpretations of the data.

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Here, we present a protocol for studying plant growth behavior and especially phenotypes in a reproducible manner. We show how to provide variable and at the same time stable light conditions. Proper analyses depend on sufficient sample numbers and valid statistical evaluations.

異なる光質におけるシロイヌナズナ成長挙動の解析

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light ...

Circadian Entrainment of Drosophila Melanogaster

Nearly universal among organisms, circadian rhythms coordinate biological activity to earth&#39;s orbit around the sun. To identify factors creating this rhythm and to understand the resulting outputs, entrainment of model organisms to defined circadian time-points is required. Here we detail a procedure to entrain many Drosophila to a defined circadian rhythm. Furthermore, we detail post-entrainment steps to prepare samples for immunofluorescence, nucleic acid, or protein extraction-based analysis.

Here, we detail how to synchronize Drosophila to a circadian day. This is the first, and most important step necessary for studying biological rhythms and chronobiology.

ショウジョウバエ・メラノガスターの概日伝播

Nearly universal among organisms, circadian rhythms coordinate biological activity to earth&#39;s orbit around the sun. To identify factors creating this ...

Dissecting, Fixing, and Visualizing the Drosophila Pupal Notum

The pupae of Drosophila melanogaster are immobile for several days during metamorphosis, during which they develop a new body with a thin transparent adult integument. Their immobility and transparency make them ideal for in vivo live imaging experiments. Many studies have focused on the dorsal epithelial monolayer of the pupal&#160;notum because of its accessibility and relatively large size. In addition to the studies of epithelial mechanics and development, the notum has been an ideal tissue to study wound healing. After an injury, the entire epithelial repair process can be captured by live imaging over 6-12 h. Despite the popularity of the notum for live imaging, very few published studies have utilized fixed notum samples. Fixation and staining are common approaches for nearly all other Drosophila tissues, taking advantage of the large repertoire of simple cellular stains and antibodies. However, the pupal notum is fragile and prone to curling and distortion after removal from the body, making it challenging to complement live imaging. This protocol offers a straightforward method for fixing and staining the pupal notum, both intact and after laser-wounding. With this technique, the ventral side of the pupa is glued down to a coverslip to immobilize the pupa, and the notum is carefully removed, fixed, and stained. The notum epithelium is mounted on a slide or between two coverslips to facilitate imaging from the tissue&#39;s dorsal or ventral side.

Dissecting, Fixing, and Visualizing the Drosophila Pupal Notum

The present protocol details the preparation and visualization of fixed tissue of the Drosophila pupal notum. It can be used for either intact or wounded tissue, and the original architecture of the tissue is preserved. The procedures for dissecting, fixing, and staining are all described in this article.

ショウジョウバエの蛹の解剖学的、固定、視覚化

The pupae of Drosophila melanogaster are immobile for several days during metamorphosis, during which they develop a new body with a thin transparent ...