The authors thank Dr. Lynda Partridge for the provision of advice and laboratory facilities.

細胞株の1）準備： <ol><li>馬のFcεRIαを表現するRBL-2H3.1細胞株の開発： <ol><li>単層細胞株についての基本的な組織培養技術を用いて、pEE6プラスミドを使用して、親RBL-2H3.1細胞をトランスフェクト、ウマFcεRIα遺伝子（GenBank：Y18204.1）を有する28。 1.2×10 7細胞ml -1の濃度で細胞の0.8ミリリットルにプラスミドDNA2μgのμlの-1を追加します。その後すぐに氷上で10分間インキュベート0.4cmのelectrocuvetteを使用して、250V、960μFで細胞をエレクトロポ。 </li><li>その後、蛍光IgE抗体とそれらをタグ付けすることによって、FACSを通して残りの生きた細胞をソートし、ジェネティシンG418硫酸0.4グラムを含む培地を使用して形質転換細胞を選択します。捜査2、3のための馬FcεRIα細胞株を発現している結果としてRBL-2H3.1を使用してください。 </li></ol></li><li>プレ検定抗体感作性： <ol><li&gt;を収穫コンフルエントペトリ皿から馬FcεRIα細胞に発現RBL-2H3.1。 5×10 5細胞mlの細胞密度に培養培地中に再懸濁細胞を、その後洗浄する-1。 </li><li> 1 ngのml -1の最終的な濃度に懸濁した細胞への関心のIgEを追加した列1-6で96ウェルプレートに100μlの細胞をプレートし、37℃+ 5％CO 2 + 90％でインキュベート16時間、相対湿度。インキュベーション時間の後、および放出アッセイを行う前に、ウェルの集密度及び細胞接着のために顕微鏡下で、ウェルをチェックしてください。 </li></ol></li></ol> 2）放出アッセイ： <ol><li>細胞を洗浄する。 <ol><li>穏やかな細胞洗浄を可能にするために、37℃の温放出緩衝液（25mMのPIPES、120mMの塩化ナトリウム、5mMの塩化カリウム、0.04 mMの塩化マグネシウム、および1mM塩化カルシウム）。 </li><li> 、細胞培地を除去するためにプレートをフリックと暖かい100μlを加えることにより、細胞を洗浄37℃で、放出緩衝液。二回繰り返します。 </li></ol></li><li>抗原チャレンジ： <ol><li> 0.1、0 ngのmlと-1の抗原の段階希釈（NIP-HSAまたはDNP-HSA）を調製NGミリリットル-1、1 ngのmlで-1、10 ngのmlを-1、100 ngのmlで-1、千ngのミリリットル-1 10,000 ngのリリース·バッファ内ミリリットル-1および37℃で温めて。 </li><li>第二の細胞の洗浄後、メディアを破棄し、抗原溶液100μlで置き換え。同じ行のウェル（例えばA1-6）が同じ抗原濃度がそれらに追加されていることを確認してください。 </li><li> 0 ngのml -1の抗原を添加することにより、行Aにおける負の制御を設定します。陽性対照として使用する細胞を溶解するために、行H細胞におけるトリトン緩衝液（5％トリトンX-100）に続く行（BG）ダウン増大抗原濃度を追加する。細胞がそのメディエーターを放出できるように20分間37℃でインキュベートする。 </li></ol></li><li>個々のウェルコントロールの設定： <ol><li>インキュベーション後、プレートのもう半分（井戸A1-6井戸A7-12へ、等）への細胞上清50μlを移す。上清の残りを50μlを破棄して、列1-6のセル内の全メディエーターの割合として列7-12に各ウェルにリリースメディエーターの量の測定を可能にするためにトリトン-X緩衝液50μlと交換。 </li></ol></li><li>酵素基質： </li><li> 50（クエン酸緩衝液に添加することにより2mMのにまで希釈されたDMSO中で調製した50 mMの4-ニトロフェニルN-アセチルβ-Dグルコサミニド0.2 Mクエン酸、0.2 M酢酸ナトリウム、pH 4.5）βヘキソサミニダーゼ基質のμlを添加するすべてのウェルにβヘキソサミニダーゼ酵素による4-ニトロフェノールへの基質の変換を容易にします。 2時間、37℃でプレートをインキュベートする。 </li></ol><img alt="図2.4.1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig241.jpg" widt時間= &quot;400&quot; /&gt; <ol start="5"><li>反応を停止する。 <ol><li>各追加150μlのトリス緩衝液（1 Mトリス-HCl、pHを9）により反応を停止ならびに緩衝液の高いpHは、反応を停止させ、黄色に4-ニトロフェノールをオン。 </li></ol></li><li>結果を読み込むと分析する： <ol><li>黄色の吸光度を測定するために405nmでプレート分光光度計を用いてプレートをお読みください。以下の式を用いて放出βヘキソサミニダーゼの割合を算出した。 </li></ol></li></ol><img alt="図2.6.1" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig261.jpg" width="100" /><ol start="2"><li>平均値を行ごとに取得された後、各ウェルにこの数式を適用します。 A1およびA7が96ウェルプレートのウェルの位置を表す。 agai（総メディエーター放出に相当）βヘキソサミニダーゼ放出の割合のグラフをプロットします抗原濃度2,3 NST。 </li></ol>

<ol>
	<li>Taudou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+Alpha+Chain+of+Human+Fc&#949;RI+in+Transfected+Rat+Basophilic+Leukemia+Cells:+Functional+Activation+after+Sensitization+with+Human+Mite-Specific+IgE.">Expression of the Alpha Chain of Human Fc&#949;RI in Transfected Rat Basophilic Leukemia Cells: Functional Activation after Sensitization with Human Mite-Specific IgE.</a> Int Arch Allergy Immunol. 100 (4), 344-350 (1993).</li><li>Sabban, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity Fc&#949;RI Receptor. , (2011).</li><li>Sabban, S., Ye, H., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+in+Vitro+Model+System+for+Studying+the+Interaction+of+EquuscaballusIgE+with+Its+High-Affinity+Receptor+Fc&#949;RI.">Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity Receptor Fc&#949;RI.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 153 (1-2), 6-10 (2013).</li><li>Wilson, A. P. M., Pullar, C. E., Camp, A. M., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+IgE+mediates+stimulus+secretion+coupling+in+rat+basophilic+leukemia+cells+transfected+with+the+a+chain+of+the+human+high-affinity+receptor.">Human IgE mediates stimulus secretion coupling in rat basophilic leukemia cells transfected with the a chain of the human high-affinity receptor.</a> Eur J Immunol. 23, 240-244 (1993).</li><li>Hunter, M. J., Vratimos, A. P., Housden, J. E. M., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+canine-human+Fc+IgE+chimeric+antibodies+for+the+determination+of+the+canine+IgE+domain+of+interaction+with+Fc&#949;RI&#945;.">Generation of canine-human Fc IgE chimeric antibodies for the determination of the canine IgE domain of interaction with Fc&#949;RI&#945;.</a> MolImmunol. 45 (8), 2262-2268 (2008).</li><li>Rashid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Diagnostic+and+therapeutic+applications+of+rat+basophilic+leukemia+cells.">Review: Diagnostic and therapeutic applications of rat basophilic leukemia cells.</a> MolImmunol. 52 (3-4), 224-228 (2012).</li><li>Cohen, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asthma+in+antiquity:+the+Ebers+Papyrus.">Asthma in antiquity: the Ebers Papyrus.</a> Allergy Proc. 13 (3), 147-154 (1992).</li><li>Dudler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+link+between+catalytic+activity,+IgE-independent+mast+cell+activation,+and+allergenicity+of+bee+venom+phospholipase+A2.">A link between catalytic activity, IgE-independent mast cell activation, and allergenicity of bee venom phospholipase A2.</a> J. Immunol. 155, 2605-2613 (1995).</li><li>Machado, D. C., Horton, D., Harrop, R., Peachell, P. T., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+allergens+stimulate+the+release+of+mediators+of+the+allergic+response+from+cells+of+mast+cell+lineage+in+the+absence+of+sensitization+with+antigen-specific+IgE.">Potential allergens stimulate the release of mediators of the allergic response from cells of mast cell lineage in the absence of sensitization with antigen-specific IgE.</a> Eur J Immunol. 26 (12), 2972-2980 (1996).</li><li>Smyth, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+molecular+basis+of+pro-allergenic+effects+of+cigarette+smoke.">Assessment of the molecular basis of pro-allergenic effects of cigarette smoke.</a> Environ Sci Technol. 34 (7), 1370-1374 (2000).</li><li>Okada, H., Kuhn, C., Feillet, H., Bach, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'hygiene+hypothesis'+for+autoimmune+and+allergic+diseases:+an+update.">The 'hygiene hypothesis' for autoimmune and allergic diseases: an update.</a> ClinExpImmunol. 160 (1), 1-9 (2010).</li><li>Eder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+environmental+and+genetic+factors+on+allergen-specific+immunoglobulin-E+levels+in+sera+from+Lipizzan+horses.">Influence of environmental and genetic factors on allergen-specific immunoglobulin-E levels in sera from Lipizzan horses.</a> Equine Vet J. 33 (7), 714-720 (2001).</li><li>Cook, W. R., Rossdale, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+syndrome+of+'Broken+Wind'+in+the+horse.">The syndrome of 'Broken Wind' in the horse.</a> Proceedings of the Royal Society of Medicine. 56, 972-977 (1963).</li><li>Eyre, P., Lewis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+systemic+anaphylaxis+in+the+horse.">Acute systemic anaphylaxis in the horse.</a> Br. J. Pharmacol. 48 (3), 426-437 (1973).</li><li>Wagner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgE+in+horses:+occurrence+in+health+and+disease.">IgE in horses: occurrence in health and disease.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 132 (1), 21-23 (2009).</li><li>Hellberg, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Equine+insect+bite+hypersensitivity:+immunoblot+analysis+of+IgE+and+IgG+subclass+responses+to+Culicoidesnubeculosus+salivary+gland+extract.">Equine insect bite hypersensitivity: immunoblot analysis of IgE and IgG subclass responses to Culicoidesnubeculosus salivary gland extract.</a> Vet. Immunol. Immunopathol. 113 (1-2), 99-112 (2006).</li><li>Schaffartzik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Equine+insect+bite+hypersensitivity:+what+do+we+know.">Equine insect bite hypersensitivity: what do we know.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 147 (3-4), 113-126 (2012).</li><li>K&#252;nzle, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgE-bearing+cells+in+bronchoalveolar+lavage+fluid+and+allergen-specific+IgE+levels+in+sera+from+RAO-affected+horses.">IgE-bearing cells in bronchoalveolar lavage fluid and allergen-specific IgE levels in sera from RAO-affected horses.</a> J Vet Med A PhysiolPatholClin Med. 54 (1), 40-47 (2007).</li><li>Tahon, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+allergy+tests+compared+to+intradermal+testing+in+horses+with+recurrent+airway+obstruction.">In vitro allergy tests compared to intradermal testing in horses with recurrent airway obstruction.</a> Vet ImmunolImmunopathol. (1-2), 85-93 (2009).</li><li>Wagner, B., Radbruch, A., Rohwer, J., Leibold, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+anti-equine+IgE+antibodies+with+specificity+for+different+epitopes+on+the+immunoglobulin+heavy+chain+of+native+IgE.">Monoclonal anti-equine IgE antibodies with specificity for different epitopes on the immunoglobulin heavy chain of native IgE.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 92 (1-2), 45-60 (2003).</li><li>Wilson, A. D., Harwood, L., Torsteinsdottir, S., Marti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+monoclonal+antibodies+specific+for+native+equine+IgE+and+their+application+to+monitor+total+serum+IgE+responses+in+Icelandic+and+non-Icelandic+horses+with+insect+bite+dermal+hypersensitivity.">Production of monoclonal antibodies specific for native equine IgE and their application to monitor total serum IgE responses in Icelandic and non-Icelandic horses with insect bite dermal hypersensitivity.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 112 (3-4), 156-170 (2006).</li><li>McAleese, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+expression+of+the+extra-cellular+part+of+the+alpha+chain+of+the+equine+high-affinity+IgE+receptor+and+its+use+in+the+detection+of+IgE.">Cloning and expression of the extra-cellular part of the alpha chain of the equine high-affinity IgE receptor and its use in the detection of IgE.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 110 (1-2), 187-191 (2006).</li><li>Ledin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+therapeutic+antibody+responses+against+IgE+in+dogs,+an+animal+species+with+exceptionally+high+plasma+IgE+levels.">Generation of therapeutic antibody responses against IgE in dogs, an animal species with exceptionally high plasma IgE levels.</a> Vaccine. 24 (1), 66-74 (2006).</li><li>Siraganian, R. P., Hook, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histamine+release+and+assay+methods+for+the+study+of+human+allergy.">Histamine release and assay methods for the study of human allergy.</a> Manual of Clinical Immunology. , (1980).</li><li>Neuberger, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hapten-specific+chimaericIgE+antibody+with+human+physiological+effector+function.">A hapten-specific chimaericIgE antibody with human physiological effector function.</a> Nature. 314 (6008), 268-270 (1985).</li><li>Bingham, B. R., Monk, P. N., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+Protein+Phosphorylation+and+Ca2++Mobilization+in+a+low+secreting+variant+of+the+rat+basophilic+leukemia+cell+line.">Defective Protein Phosphorylation and Ca2+ Mobilization in a low secreting variant of the rat basophilic leukemia cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 269 (30), 19300-19306 (1994).</li><li>McAleese, S. M., Halliwell, R. E., Miller, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+sequencing+of+the+horse+and+sheep+high-affinity+IgE+receptor+alpha+chain+cDNA.">Cloning and sequencing of the horse and sheep high-affinity IgE receptor alpha chain cDNA.</a> Immunogenetics. 1 (51), 878-881 (2000).</li><li>Hongtu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+structure/function+relationship+in+canine+and+human+IgE+as+the+basis+for+the+development+of+rational+therapeutic+intervention+strategies+in+allergic+disease.">Study of the structure/function relationship in canine and human IgE as the basis for the development of rational therapeutic intervention strategies in allergic disease.</a> , (2010).</li><li>Sabban, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+pan-anti-allergy+vaccine.">Towards a pan-anti-allergy vaccine.</a> JIBTVA. 2 (2), 15-27 (2013).</li><li>Moran, G., Burgos, R., Araya, O., Folch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+bioassay+to+detect+reaginic+antibodies+from+the+serum+of+horses+affected+with+recurrent+airway+obstruction.">In vitro bioassay to detect reaginic antibodies from the serum of horses affected with recurrent airway obstruction.</a> Vet Res Commun. 34, 91-99 (2010).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests in this paper.

要約すると、この調査の結果は、馬FcεRIαを表現するRBL-2H3.1細胞は馬のIgEで感作し、抗原によって挑戦されたとき、彼らは内部のメディエーターの合計量の4.88パーセント±36.68パーセントのピークメディエーター放出を与えることを示した馬FcεRIαを発現していないRBL-2H3.1親細胞に比べて細胞、。 したがって、このアッセイは、in vitroでの馬のアレルギー反応を調査...

アレルギーは、数千年前から知られている。喘息治療はエーベルス·パピルス（〜1550 BCE）として知られている古代エジプトの医学のテキストで説明して7を治療するための薬草療法を検討した。 今日アレルギーはTヘルパー細胞2型（TH 2）免疫系のアームはアレルゲンと呼ばれる、環境抗原に応答して、免疫グロブリンE（IgE）抗体の産生を操縦するI型過敏性反応、に分類される。 IgEの合成を高めるタバコの煙やディーゼル排気微粒子中の粒子がそうであるように、これらは9、インターロイキン-4およびインターロイキン13 8を含む一般的に免疫系の細胞と相互作用し、炎症誘発性サイトカインの合成および分泌を刺激する多様な物質である10。 過去50年間で先進国におけるアレルギー症状の上昇はの効果の組み合わせに起因している「衛生仮説」11によって提案されたように、TH 2サイトカインによって支配プロファイルに対する免疫応答をシフトするために組み合わせる環境汚染物質、より衛生的な環境へのトレンド、。 上述したように、人間がアレルギーに悩まさ唯一の哺乳類ではありません。注目すべき馬と犬はまた、古典的なアレルギー反応を開発することができますし、12の調査によると、人間のように、馬アレルギーは遺伝的要因と環境的要因に起因する、ことを示している。結果として、これらの動物は、一度臨床症状がで設定したアレルギーの遺伝的および環境的な原因、病気への感作からの進行、および可能な介入戦略との間の相互作用を研究するための優れたモデルを提示 1887年に、Stömmerは、馬の心血管系に対するヒスタミンの効果がある、人間と馬の喘息13の間の類似性を記述した最初の人だった人間14のものと非常に類似している。馬はまた、年間15米1150億ドルの賭け売上高は720億ドル、米国の価値がある競馬産業の礎である。 ほとんどの現代的な競走馬以降1878からレディアン·ブラントによって繁殖アラビア馬の数が少ないの子孫である。現代の競走馬は、一般的にパフォーマンス能力を選択するために近交系されている。彼らは、アレルギー反応をマウントするそれらの感受性であるそのうちの一つ、遺伝性疾患になりやすいです。彼らはまたも、最も深刻なアレルギー人間16よりも1000倍高い血清IgEレベルを持っている。馬アレルギー反応は、通常、虫刺され過敏症（IBH）17、18として明示されている。IBH結果は皮膚炎に起因刺されに属ヌカカで昆虫を形成する。ウマのアレルギー性​​疾患の別の形態は、これは肺と気道で明らかにされて、再発性気道閉塞（RAO）である。それは、喘鳴やラボによって特徴づけられるOR演算呼吸。 RAOは、一般的に胞子を成形することに応答して発生し、別の調査がこの20を確認していないが、高アレルゲン特異的IgEレベルは、一つの研究19にRAOに罹患している馬に記録された。 ウマアレルギーに関する研究の試みモニタリングにおける、および抗ウマのIgEモノクローナル抗体（mAb）21,22を開発することによって、馬のIgEを中和することを中心に展開し、さらに23による研究では、馬の高親和性Fc受容体のαの細胞外ドメインの生産を議論ウマ血清IgEを検出し、定量する試みで、チェーン（FcεRIα）受容体。 Ledin 24による関連研究では、自己/非自己免疫原を使用して免疫系をプライミングすることにより、血清IgEを中和することを目的とした新しいアプローチについて説明します。すべてのこれらの研究は、しかし、それらのプロトコルの安全性と有効性を試験するための効果的なアッセイを欠いていた。この記事では、我々は今そのようなアッセイsysを提示βヘキソサミニダーゼ放出馬システム、関連する診断および治療戦略の研究に適用可能なTEMは、細胞メディエーターの脱顆粒の指標として、ウマFcεRIαを表現するRBL-2H3.1細胞で評価した。このプロトコルは、異なる種由来のIgEに対する高親和性受容体のIgE結合ドメインをコードする遺伝子でトランスフェクトしたRBL細胞の工学を記述する先の刊行物25、4、5、2、3に基づいている。プロトコルは、結果は、三連の実験の平均値±標準偏差として提示されているβヘキソサミニダーゼ放出アッセイを実行する方法について説明します。 放出アッセイは、最初Siraganianによって開発され、人間のアレルギーを研究するために25をフックした。博士ルーベンSiraganian率いる研究室グループは、RBL細胞株を開発した。これらのRBL細胞は、ヒトFcεRIαを表現するために開発され、プロトコルが4によって出版された。最後のピースアッセイのハプテン4-ヒドロキシ-3-を標的IgEの可変領域をマウス遺伝子の下流に、その重鎖遺伝子をクローニングすることにより、IgE抗体の産生を記載しノイバーガー26の論文でのpSVプラスミドの開発に付属 - ニトロフェナセチル（NP）、得られたキメラ抗体は、完全に機能した。また、RBL細胞の表面上のその受容体をクローニングしながら、同じハプテンを対象とした全てのIgEを開発する能力は、好塩基球細胞の脱顆粒を測定するための有用なプロトコル作るアッセイの標準化をもたらした。 アッセイは、長所と短所を持っています。このアッセイの利点は、任意の哺乳動物系で使用される適応性である、我々の研究室は、ヒト、イヌおよびウマのシステムにおいて脱顆粒をテストするためにそれをこのように使用されており、これは、生物のIgEの合成およびその受容体をクローニングすることによって、単純に達成可能であるRBL細胞の表面上に。 一方、アッセイの短所は、RBL細胞は、それらを同じアッセイ内の脱顆粒のレベルの変化を与えること、熱的、機械とPH変化に非常に敏感であるということです。それは、このように強くアッセイは常に三重に繰り返された後、平均がそれらから取られることをお勧めします。また、RBL細胞は、彼らのメンテナンスが煩雑になっ、延長時間（&gt; 10週間）27組織培養で残っている場合、非放出表現型へシフトする傾向がある。彼らはまた、光学顕微鏡からは見えませんし、細胞の形態を変化させないマイコプラズマ細菌による感染症になりやすいですが、劇的に彼らの脱顆粒レベルを変更します。このように定期的なマイコプラズマ試験が必要とされている。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>RBL-2H3.1 Expressing Equine Fc&#949;RI&#945;</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Produced in the lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equine IgE anti NIP-HSA</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Produced in the lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Plate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS3595</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi Channel Pipette</td>
			<td>Anachem</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Galaxy R</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4Hydroxy-5-iodo-3-nitrophenylacetic acid</td>
			<td>Cambridge Research Biochemicals</td>
			<td>N-1070-1</td>
			<td>NIP-OH was conjugated with Human Serum Albumin to make NIP-HSA in the lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dinitrophenyl Conjugated to Human Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A6661</td>
			<td>Abbreviated DNP-HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Spectrophotometer</td>
			<td>Anthos Labtec HT2</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1851</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7653</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2670</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C1016</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton x100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-nitrophenyl N-acetyl-&#946;-D-glucosaminide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N9376</td>
			<td>Stock solution called &#946;-hexosaminidase substrate was 50mM prepared in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>251275</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7670</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5941</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of an in vitro model system for studying the interaction of equus caballus ige with its high-affinity receptor fc&#949;ri

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated allergic reactions. As a consequence of the high affinity binding between IgE and Fc&#949;RI, along with the continuous production of IgE by B cells, allergies usually persist throughout life, with currently no permanent cure available. Horses, especially race horses, which are commonly inbred, are a species of mammals that are very prone to the development of hypersensitivity responses, which can seriously affect their performance. Physiological responses to allergic sensitization in horses mirror that observed in humans and dogs. In this paper we describe the development of an in situ assay system for the quantitative assessment of the release of mediators of the allergic response pertaining to the equine system. To this end, the gene encoding equine Fc&#949;RI&#945; was transfected into and expressed onto the surface of parental Rat Basophil Leukemia (RBL-2H3.1) cells. The gene product of the transfected equine &#945;-chain formed a functional receptor complex with the endogenous rat &#946;- and &#947;-chains 1. The resultant assay system facilitated an assessment of the quantity of mediator secreted from equine Fc&#949;RI&#945; transfected RBL-2H3.1 cells following sensitization with equine IgE and antigenic challenge using &#946;-hexosaminidase release as a readout 2, 3. Mediator release peaked at 36.68% &#177; 4.88% at 100 ng ml-1 of antigen. This assay was modified from previous assays used to study human and canine allergic responses 4, 5. We have also shown that this type of assay system has multiple applications for the development of diagnostic tools and the safety assessment of potential therapeutic intervention strategies in allergic disease 6, 2, 3.

親RBL-2H3.1細胞およびウマFcεRIα受容体遺伝子でトランスフェクトされたものが最初にマウスIgE抗DNP-HSAで感作し、DNP-HSA抗原でチャレンジした。マウスIgEは、両方の細胞株における内因性ラット受容体に結合し、したがってメディエーター（ 図1 A）を放出するために、両方の細胞株の放出生存度を試験するための対照として働く。これは重要な検査であり、細胞培養における延長（...

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Development of an &lt;em&gt;in vitro&lt;/em&gt; model system for studying the interaction of &lt;em&gt;Equus&lt;/em&gt; &lt;em&gt;caballus&lt;/em&gt; IgE with its high-affinity receptor Fc&amp;#949;RI

The current study describes the development and applications of a genetically engineered assay system based on the transfection of rat basophilic leukemia cells with the equine Fc&#949;RI&#945; gene. Transfected cells express a functional receptor where the release of mediators of the allergic response can be activated by IgE and antigen.

開発<em&gt; in vitroで</emとの相互作用を研究するための&gt;モデル系<em&gt;エクウス</em&gt;<em&gt; caballus</emその高親和性受容体FcεRIとした&gt;のIgE

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated ...

development-an-vitro-model-system-for-studying-interaction-equus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor Fc&#949;RI

12.3K ビュー.  King Abdulaziz University. The current study describes the development and applications of a genetically engineered assay system based on the transfection of rat basophilic leukemia cells with the equine FcεRIα gene. Transfected cells express a functional receptor where the release of mediators of the allergic response can be activated by IgE and antigen.