This work is supported in part by American Heart Association Scientist Development Grant and NARSAD Young Investigator Award to Yingwei Mao.

注：動物に関わるすべてのプロトコルはIACUCの＃44057、ペンシルベニア州立大学の動物保護ガイドラインに従って追跡しました 1.レンチウイルス生産注：トランスフェクションの前日には、LentiX-293細胞は、80％の集密度になるようにしてください。 <ol><li>ただ、トランスフェクションの前にDME​​Mで細胞を洗浄し、室温で5分間、ペニシリン（100 IU / ml）およびストレプトマイシン（100μg/ ml）を含むDMEM / 10％FBS 10mlにインキュベートします。 </li><li> 3の比率（1μgのDNA：PEIの3μL）1 DMEM mlの1分間ボルテックスで1にDNAとポリエチレンイミン（PEI）（1mg / ml）を希釈します。 DNAの量はDNAの濃度に依存しました。室温で10分間インキュベートします。 <ol><li>例えば、皿当たりPEIの60μlのベクタープラスミド10μgを、psPax2 145μgのプラスミド、水疱性口内炎ウイルス（VSV）を5μgからなるDNAプラスミド20μgのを、使用しています。 </li></ol></li><lI&gt; 1分間ボルテックスすることにより再びDNAとPEI溶液を混ぜます。室温で10分間インキュベートします。 </li><li> DMEM（100ミリメートル皿中の10ミリリットルの培地のためのすなわち 1ミリリットル）の全培養液の1/10ボリュームを追加します。皿にドロップすることにより、DNA-PEI混合物の低下の1ミリリットルを追加し、培養培地になるまで周りの皿を旋回DNAとよく混合されます。 </li><li>室温で6時間インキュベートし、上清を除去します。培地の5ミリリットルを追加します。 </li><li>トランスフェクション後48時間では、50mlチューブ中で4℃で5分間、627×gでウイルス上清を回収し、スピン。超遠心管に0.45μmのシリンジフィルターを通してウイルス上清30mlのをフィルタリングします。 </li><li>チューブのバランスをとるために滅菌水を追加し、パラフィルムの小片でチューブをカバーしています。 4℃で120分間、11249×gでチューブをスピン。真空チップを用いて液体を除去します。 </li><li>冷PBS100μlのチューブを追加します。静かに4°CO / Nでチューブを揺すります。 </li><li>ウイルス、ピペットTを再懸濁するために、彼はPBSを先端でペレットに触れないように注意しながら、ペレット10回以上のステップ1.8で追加されました。これが完了するまで、ペレットを再懸濁されることはありません。 </li><li> -80℃で液体窒素とストアにフラッシュ凍結、チューブあたり10〜20μlのでウイルスを等分。 </li></ol> 2.定位注射楽器の2.1）準備<ol><li>ハサミ、平滑末端の鉗子、ニードルホルダー、メス、綿棒、および滅菌インジケータと密封されたパック内の布、および手術前にオートクレーブを置きます。さらに、10％ポビドンヨード、70％のエチルアルコール、吸収性縫合糸、加熱パッド、人工涙液、ガラスビーズ滅菌器、ドリル、ドリルビット、2使い捨て注射器、注射器、電気かみそり、鎮痛薬（ケトプロフェン）を得、麻酔（アベルチン）、手袋、噴射ポンプと定位装置。 </li><li> 0.2＆を使用して、新鮮な1.25％アベルチン溶液その日、無菌フード内のフィルタを作成します＃181;滅菌シリンジフィルターをM、および無菌の血清バイアルに入れます。 200ミリリットルの水に溶解し、その後、tert-アミルアルコール5mlに2,2,2-トリブロモアルコール2.5gのを混ぜます。 5. 15未満のpHを保ちます</li></ol>マウスの2.2）準備<ol><li>マウス（375ミリグラム/ kg）の重量に基づいて、アベルチン管理します。15は、腹腔内（IP）注射によってアベルチンでマウスを注入し、その後完全に麻酔をかけたまで戻しケージに配置します。 </li><li>乾燥を防ぐために、IP注射を介して鎮痛剤（ケタプロフェン、5ミリグラム/ kg）を、所定の位置にマウスの目に人工涙液を与えます。 </li><li>マウスは彼らの足をつまんで完全に眠っていることを確認してください。マウスは足のピンチに応答する場合には、（50μLの用量で）より多くの麻酔薬を与えます。電気かみそりを使用して、マウスの頭部を剃ります。 （典型的には、ちょうど耳の後ろから、鼻のトップへ）上で動作する領域、および周辺エリアを剃ります。 </li><li>マウスIを配置定位装置NTO。前部クランプに前歯をラッチし、クランプを下げ、顎が完全に安全であるように、それを締めます。 </li><li>完全に頭を安定させるために外耳道に耳バーを挿入します。内耳に損傷を与える可能性が、あまりにも遠くに耳棒を挿入しないように注意してください。完成したら、マウスの本体は、ヘッドの位置を中断することなく、わずかに移動させることができるようになります。 </li><li>作業中はマウスの体温を調整するために、マウスの下に加熱パッドを配置します。 </li><li>徹底的に手術領域を清掃してください。綿棒を使用して、手術部位の途中から始まり、外側に移動し、円を描くように、10％ポビドンヨードをこします。そして、同じように手術部位に70％のエチルアルコールをこするために綿棒を使用しています。 2回繰り返します。 </li></ol> 2.3）最初の切開<ol><li>マウスが準備されると、滅菌機器バッグを開きます。トウチ前に手袋を変更楽器をngの。無菌布を取り出し、布の上に機器​​を配置します。あらゆる楽器は未滅菌表面に接触した場合、それを滅菌する15秒間ガラスビーズ滅菌器を使用しています。 </li><li>非利き手で利き手と平滑末端の鉗子にメスを取ります。平滑末端の鉗子にそっと握り、マウスの皮膚を使用し、メスを用いて切開します。約1.5cm（鼻側）に耳の上に切開を開始し、耳の下の約0.5cmにまで及びます。 （ 図1）、ブレグマを露出するために、マウスの頭の中央に垂直に切開を拡張します。 </li><li>ブレグマが可視化された後、静かに頭蓋骨の表面を覆う任意の血液を除去するために滅菌綿棒を取ります。ヘッド側に皮膚をプッシュするために、2つの綿のヒントを参考にしてください。 </li></ol> 2.4）機器のセットアップ<ol><li>任意の血液を頭蓋骨の表面から除去され、そしてブレグマが明確に可視化された後、注射器（コンを準備10 8 TU / mlで、1マイクロリットルの容量）のセント。ヒュームフードでは、注入されるウイルスを注射器を埋めます。気泡が内部にないことを確認してください。それは完全に確保されていることを確認して、定位装置に注射器を置きます。 </li><li>無菌の注射針の先端がブレグマの交点と耳のラインに設定されているように、それは、右の頭蓋骨の表面を超えるまでゆっくりとシリンジを下げます。ゼロとしてこの点を設定し、この点からの座標を決定します。 </li><li>関心のある脳の領域に応じて、定位座標を変化させます。脳地図4を利用して、これらの座標を決定します。座標が決定されると、これらの座標と一致するように、注射器の針を動かします。座標を使用して歯状回をターゲット：M / L = +/- 1ミリメートル、A / P = -1.82 mmです。穴が掘削される必要がある場所を視覚化するために頭蓋骨の上に右に針を下ろします。 </li><li>少しシリンジを上げ、ドリルを取り、ドリル双方向を配置T右側頭骨に対して約45°の角度でターゲットドリルサイト以上。掘削を開始し、頭蓋骨は方法を提供するまでの掘削を続けます。頭蓋骨の方法を提供すると、抵抗の低下を検出することができます。皮質の損傷を防止するために、脳内にドリルしないように注意してください。 </li><li>滅菌綿棒を取り、穴からの血を拭い。 </li><li>先端が右脳（ない頭蓋骨）の表面上に位置するように、シリンジを下げます。 D / vの脳アトラス座標に基づいて、所望の深さまで下げ0にシリンジ（深さ）座標を設定します。歯状回に到達するには、-1.79 mmのD / Vに設定します。 </li><li> 0.2μL/分の速度で注入を開始します。注射器は、所望の深さよりも低いスリップしないことを保証するために監視します。この問題が発生した場合は、そっと再び所望の深さまで注射器を上げます。 </li><li>注入が完了した後、任意の残存ウイルスが吸収されたことを確認するために、約2分待ち。ゆっくりとシリンジを上げ、任意のリチウムを除去するために、綿棒を使用注射部位から一口分。 </li><li>他の半球のために繰り返します。 </li></ol> 2.5）縫合<ol><li>そのパッケージとグリップから針ホルダを使用して針を滅菌縫合糸と針を外します。離れて針ホルダから針の尖ったエッジに直面しています。非利き手で平滑末端の鉗子を保持し、グリップには、マウスの皮膚を、それを使用しています。利き手で始まります。 </li><li>優しく皮膚を通して縫合糸をプッシュして切開の反対側の皮膚をつかむために平滑末端の鉗子を使用しています。約0.75インチが残るまでを通して縫合材料を引き出します。 </li><li>針を放し、そして、その後、針ホルダの周りに1時間を縫合糸をラ​​ップ針ホルダーを0.75インチ残りの縫合糸をつかみ、そしてを通して縫合糸を引っ張るように平滑末端の鉗子を使用し、針と針ホルダーように彼らは元​​々にあったものにヘッドと反対の側に終わります。これは、結び目を形成すべきです。 </li><li>この手順を繰り返しますさらに3回、針ホルダは、各時間に終わるヘッドの側面を交互に。 </li><li>縫合糸をカットし、手順を繰り返し2.5.1-2.5.3切開が閉じられるまで。 </li></ol> 2.6）術後ケア<ol><li>静かにマウスの耳のバーを削除し、前方クランプからそのあごを削除します。 </li><li>それがウェイクアップし、独自に動き回るまで加熱パッド上でマウスを保管してください。毎日マウスを監視し、そのような、グルーミング食べたり飲んでいないような痛みの兆候、のために維持し、目。必要と認めたときに追加の鎮痛剤を与えます。 </li></ol> 3.オープンフィールドテスト 3.1）の設定<ol><li> 50センチメートル高い壁で、寸法50センチメートル×50 CMと空の角、プラスチックアリーナを得る（が、わずかに大きくすることができます）。実験の開始に先立って、70％のエチルアルコールでアリーナを清掃してください。エチルアルコールが完全に舞台上にマウスを置く前に乾燥していることを確認します。 </li><li>にアリーナを配置床、照明は影とグレアを最小限にするために設定されていることを確認してみてください。 </li><li>トラッキングソフトウェアを使用する場合は、（マウスの明確な見解を持つように十分離れて完全包含するように、全体の舞台が、十分に近い）、オープンフィールドの真上にオープンフィールドの上に約1.5フィートのカメラを置きます。 </li><li>ゾーンを設定するには16。ボックス（X 30センチメートル30cmの約領域）の中央にゾーンを設定し、サイドパネルのゾーン1]タブをクリックします。 <ol><li>上部パネルの形状のアウトラインを選択し、中央ゾーンの周囲を概説します。ゾーンの追加]を選択し、中央ゾーンの内側をクリックしてください。プログラムのプロンプトを使用して、（これは、この手順のための「中心」と呼ばれる）ゾーンに名前を付けます。行動試験を手で記録される場合は、フィールドの底部は、テープを使用して、マークされた10センチ×10cmの正方形に分割されていることを確認してください。 </li></ol></li><li>設定が正しい、とマウスが簡単にVISIになるようにソフトウェアを設定します画面にBLE。試験領域（照明）およびマウスの色に適合するように、マシン上の検出の設定を調整することによって、これを達成します。 注：設定が正しい場合、システムは、任意の影や尿/糞便をマウスだけを追跡し、しないでください。特定のソフトウェアの設定は、アリーナの照明、マウスの色に依存します。 </li></ol> 3.2）順化とテスト<ol><li>その周囲にそれらを順応させるために試験前行動部屋1時間に実験用マウスを移動します。順化のための彼らのケージにマウスを残します。 </li><li>行動タスクテープにカメラの電源を入れ、マウスが壁に直面しているように、舞台の中央前方に向かってマウスを置きます。 </li><li> 5分間のタイマーを設定し、競技場から離れます。可能な場合は、誤ってマウスに影響を与えないように、部屋を出ます。 </li><li> 5分がアップしたら、マウスを削除し、そのケージに配置します。 </li><li>徹底的に次のマウスに進む前に、フィールドを一掃するために70％のエチルアルコールを使用してください。エチルアルコールが完全に乾燥していることを確認します。 </li></ol> 3.3）得点<ol><li>すべての4つの足は、x 30センチメートル途中30センチメートル内にあるときに、フィールドの中央にあるように、マウスを検討してください。 </li><li>マウスを中心に費やす時間の量を定量化。あるいは、（例えば、Noldusのethovisonとして）追跡ソフトウェアを使用して、この時間を決定します。 <ol><li>これを行うには、分析]タブに移動し、分析·プロファイルの下に「動き」をクリックしてください。現在設定されているカテゴリを削除し、[場所]タブの下の「ゾーン内」を選択します。中央ゾーンを選択します。次に、結果を表示する（結果]タブの下の）「解析出力」を選択します。各試験のために不動に費やされる時間の一覧表が表示されます。 </li></ol></li><li>それ以外の場合は、手でOFTスコア。オープンフィールドは、OPEの底に概説25 10センチメートル×10センチの正方形を持っている必要がありますNフィールド（ステップ3.1.3に概説されるように）。アリーナの中心部へのエントリの数に加えて、マウスを中心に費やす時間の量を定量化する。16 注：センター30センチ×30センチメートルエリアはオープンフィールドの中心と考えられています。マウスは、すべての4つの足が30×30センチエリア内にあるかどうか中心領域に生息すると考えられています。 </li></ol> 4.強制水泳試験注：行動のタスク間の5日間の最小値を許可します。 4.1）の設定<ol><li> 2 L明確なバケツを取得し、22℃の水で満たします。テーブルの上にバケツを置き、照明は影とグレアを最小限にするために設定されていることを確認してみてください。 </li><li>トラッキングソフトウェアを使用する場合は、直接オーバーヘッドバケットのカメラを置きます。 </li><li>マウスが画面上で簡単に表示されるようにソフトウェアを設定します。 </li></ol> 4.2）順化とテスト<ol><li>行動ROに実験用マウスを移動します周囲を順応するためのテストの前にOM 1時間。順化のための彼らのケージにマウスを残します。 </li><li>テープへのカメラの行動タスクをオンにします。静かに、バケツの水の中央にマウスを置きます。でマウスを落とさないことを確認します。マウスをゆっくり下げ、そのフロント足が最初に水に触れるようにします。水没から自分の頭を防ぐために注意してください。 </li><li> 6分間のタイマーを設定し、行動の領域から離れます。 </li><li> 6分がアップしたら、バケツからマウスを削除し、そのケージに戻ってマウスを置く前に、余分な水分を拭き取ってください。 </li></ol> 4.3）得点<ol><li>トラッキングソフトウェアを使用する場合はNoldusによって示唆されるように、水泳対フローティング時間を定量化するために、（これはデフォルトの設定でなければならない）、11％パーセントの不動を設定します。 </li><li>トラッキングシステムを使用して定量化するために、分析]タブに移動し、分析·プロファイルの下で運動をクリックしてください。に、現在設定されているカテゴリを削除し、移動状態を選択（個人の行動の下で）左サイドパネル。 11％の不動を設定します。 </li><li> [結果]タブの下で、トラックの可視化を選択します。結果を表示する（結果]タブの下の）分析出力を選択します。各試験のために不動に費やされる時間の一覧表が表示されます。 </li><li>手の採点場合、マウスはマウスが不動に費やす時間の水泳や登山、と量を消費する時間を測定します。また、初めての不動のレイテンシを測定します。結果のセクションにある図2を参照してください。 </li></ol>

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The authors have nothing to disclose.

成功定位注射は三つの要因に依存している：、生きているマウスを維持する座標の正しいゼロ点（ブレグマの交点と耳間のライン上の針の先端）を設定し、ゼロ点に右の深さを設定する（針の先端をちょうど）脳組織の外側に触れます。マウスの生存率は重要です。手術の生存は、マウスが適切に麻酔し、適切な鎮痛を受けていることを確認することによって支援することができます。疼痛?...

それは、遺伝的に操作が容易であるため、マウスは広く神経生物学で使用されています。遺伝子ノックアウト技術は、研究者がそれぞれの遺伝的要因がマウスの行動を整形する方法を調査することができます。また、CRE-のloxPシステムは、異なる組織における遺伝子機能を研究する研究者を可能にする、マウスに特異的な遺伝子ノックアウトタイプ-組織および細胞のための貴重なツールを提供しています。1しかし、実際には、CREプロモーターの発現パターンを制御するのが困難です、これまでに多くの確立されたCREドライバは地域特異的発現を達成していない。2,3 あるいは、定位注射は、成体マウスの特定の脳領域を標的とする方法です。のcDNAまたはshRNAを発現する遺伝子操作されたウイルスを注入することにより、遺伝子発現の領域に特異的な変調を達成することができます。各マウスの脳の大きさは変化するが、特定の脳領域の位置は、定位COORDIを用いて決定することができます臀部は、マウス脳の頭蓋骨のランドマークから設定します。最も一般的に使用されるランドマークはブレグマ、ラムダ、および耳間のラインです。脳アトラスから得られた座標を使用して、各脳領域の4つの正確な位置は、前後（A / P）によって識別することができ、内側-外側（M / L）、および背腹（D / V）がから軸ブレグマ/耳のラインの交差点。典型的には、注射は、蛍光顕微鏡検査によって確認することができるように、赤色、または緑色蛍光タンパク質（RFP又はGFP）のいずれかでタグ付けされたマウスの脳に注入したウイルス。 マウスの行動評価は、精神疾患の基礎研究のために特に必要です。患者における精神障害の症状は、典型的には、異常行動を伴います。これらの人間の行動の一部は、進化的に保存され、直接マウスに模倣し、観察することができます。たとえば、うつ病の行動的絶望を測定することにより、マウスでモデル化することができます。 OFTうつ病を持つ人々彼らがこれまでに役立ちます何もしないかのようにアンは、最終的に自殺につながる可能性が症状を感じています。げっ歯類では、これは、水のプールに浮遊対水泳マウス（放棄とみなす）の時間を測定する、強制水泳試験（FST）を使用してモデル化することができます。このパラダイムは、抗うつ薬との表現型を救出することによって検証されている。抗うつを受けた7,8,9マウスは、未処理対照と比較して不動大幅に少ない時間を過ごすことになります。別の行動試験、オープンフィールド試験（OFT）は、マウスにおいて運動を評価するために設計されており、さらにマウスで気になる表現型を分析するために使用することができる。5,6-このテストは、それらが接近しているときに、マウスをより安全に感じることを前提としています新規オープンフィールド内の壁に。彼らは好奇心の強い動物であるように、野生型マウスは、最終的には、新しい環境を探索します。ただし、フィールドの中央に少ない時間を費やしては、マウスがイニシアを克服することができなくなりますように、マウスに不安を示していますLの恐怖が新しい環境によってもたらされます。マウスの不安は、オープンフィールドの中央で費やす時間の量により定量されるように、多くの精神障害に存在するヒトでの臨床不安、と比較することができます。 行動パラダイムと定位注射の組合せは、対象の脳の領域に特異的な遺伝子の発現を改変するための新規な方法です。マウスの行動に変調遺伝子発現の効果が決定され得ます。脳全体のノックアウトとは対照的に、この方法は、それが、特定の脳領域を標的として特に有用です。また、定位注射は、典型的には、成人、野生型マウスで行われ、従って、内因性遺伝子の発現は、発生段階を通じて維持されています。遺伝子は、開発の胚または出生後の段階での生存のために必要とされている場合、このメソッドは、交絡の影響を回避します。一つの主要な制限は、実験用マウスはthroug行く必要があるということですHマウスの頭蓋骨を持っている侵襲手術は、オープンされます。さらに、遺伝子変調度は、ウイルスの力価及び効率によって決定されます。ウイルスは、特別な機器を必要とする定位座標を使用して適切な領域に注入する必要があります。正しい注射部位の確認のみ死後に完成させることができます。 この方法は、以前に様々な神経疾患における特定の遺伝子の関与を試験するために使用されてきました。例えば、（ドーパミンを合成することを可能にする）Thの遺伝子を標的ウイルス媒介性RNAiは、黒質緻密部に注入し、そして運動行動分析を行った。10別の研究では、関連して、マウスの挙動を評価するために、レンチウイルス、サイレンシングDISC1の定位注射を使用しました統合失調症に。 DISC1のノックダウンは、新規性に応じて増加した運動につながった（類似統合失調症における陽性症状）、およびより大きな不動FST 11は、同様に、追加の研究は、5-HT 1Bの過剰発現は、OFTに増加した探索行動に、この方法を用いて、抗不安表現型と一致つながったことがわかった。12定位注射はCRE-loxP配列マウスで組換えを誘導するためにCREウイルスを提供することができます。この方法は、選択的扁桃体におけるY2受容体と分界条床核を削除するために使用されました。行動分析の際に、これらのマウスは、遺伝子は、中央扁桃体に削除された抗うつ表現型に見つけましたが、された遺伝子が基底外側扁桃体や分界条床核に削除された表現型がない。13このように、この技術を動物行動の遺伝的影響を研究するためのユニークなツールを提供します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="608">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:107px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Stereotactic Apparatus item 51725</td>
			<td style="width:107px;">Stoelting co.</td>
			<td align="right" style="width:119px;">51725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Quintessential stereotaxic pump&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Stoelting co.</td>
			<td align="right" style="width:119px;">53311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Injection Styringe, 65 RN</td>
			<td style="width:107px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7633-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM</td>
			<td style="width:107px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D5796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">PEI&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Polysciences Inc.</td>
			<td align="right" style="width:119px;">23966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scissors</td>
			<td style="width:107px;">Fine Surgical Tools</td>
			<td style="width:119px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Blunt end forceps</td>
			<td style="width:107px;">Fine Surgical Tools</td>
			<td style="width:119px;">11002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Needle holder&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Fine Surgical Tools</td>
			<td style="width:119px;">12001-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Drill</td>
			<td style="width:107px;">Ram Products Inc</td>
			<td style="width:119px;">Microtorque control box, Tech2000 handpiece</td>
			<td>with pedal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass bead sterilizer</td>
			<td style="width:107px;">Inotech&#160;</td>
			<td style="width:119px;">IS-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absorbable sutures&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Unify</td>
			<td style="width:119px;">M-K518r19</td>
			<td>Absorbable, reverse cutting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:107px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89031-270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Heating pad</td>
			<td style="width:107px;">Gaymar</td>
			<td style="width:119px;">T-pump TP-500 PN11184-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Artificial tears</td>
			<td style="width:107px;">Rugby</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0536-6550-91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable syringe</td>
			<td style="width:107px;">BD Syringe</td>
			<td align="right" style="width:119px;">309623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cloth</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gloves&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Ansell</td>
			<td style="width:119px;">Senseitouch #7823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Avertin or other anesthetic</td>
			<td style="width:107px;">see recipe citation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ketoprofen or other analgesic</td>
			<td style="width:107px;">see veternarian&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tracking software</td>
			<td style="width:107px;">Noldus</td>
			<td style="width:119px;">Ethovision XT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tracking Camera</td>
			<td style="width:107px;">Noldus</td>
			<td style="width:119px;">Media Recorder</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applying stereotactic injection technique to study genetic effects on animal behaviors

定位注射は、マウスにおける標的脳領域に高力価のレンチウイルスを提供する有用な技術です。レンチウイルスは、脳組織への重大な損傷を与えることなく、比較的着目領域における遺伝子発現を過剰発現またはノックダウンすることができます。回復後、注射したマウスは、オープンフィールド試験（OFT）および強制水泳試験（FST）などの様々な行動タスクにテストすることができます。 OFTは、マウスは、新規オープンフィールドの中央に費やす時間の量を測定することにより、マウスにおける運動や気になる表現型を評価するために設計されています。もっと気になるのマウスは、対照と比較して、新規フィールドの中央で有意に少ない時間を過ごすことになります。 FSTは、水の入ったバケツの中に入れたときにマウスが不動費やす時間の量を定量することにより、抗うつ表現型を評価します。抗うつ表現型を有するマウスは、対照動物と比較し有意に少ない時間不動を過ごすことになります。このプロトコルの目的は、STERを使用することです遺伝的要因は、動物の行動を調節する方法を評価する行動試験と一緒にレンチウイルスのeotactic注入。

<html>正確な定位注射は正しい座標を設定に大きく依存しています。ウイルスを注入するために使用される針の先端はブレグマの交点と耳線（ 図1）上で直接設定する必要があります。これは、針が正しく配置されているか否かを確認するために立体顕微鏡を使用すると便利です。顕微鏡で見ると、ウイルスが注入された場合、それはブレグマの交点と耳ラインで直接着陸なるよう...

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Applying Stereotactic Injection Technique to Study Genetic Effects on Animal Behaviors

cDNAを発現するレンチウイルスまたはshRNAの定位注射は、マウスの特定の脳領域における遺伝子発現を調節することができます。ここでは、そのようなオープンフィールド試験（OFT）および強制水泳試験（FST）のような行動のタスク、と定位注射を結合するためのプロトコルを提示します。

定位注入法を適用すると、動物の行動の遺伝的影響を研究するために、

Stereotactic injection is a useful technique to deliver high titer lentiviruses to targeted brain areas in mice. Lentiviruses can either overexpress or ...

applying-stereotactic-injection-technique-to-study-genetic-effects-on

Research

JoVE Journal

Behavior

14.0K ビュー.  The Pennsylvania State University.  cDNAを発現するレンチウイルスまたはshRNAの定位注射は、マウスの特定の脳領域における遺伝子発現を調節することができます。ここでは、そのようなオープンフィールド試験（OFT）および強制水泳試験（FST）のような行動のタスク、と定位注射を結合するためのプロトコルを提示します。 

ビデオ: Applying Stereotactic Injection Technique to Study Genetic Effects on Animal Behaviors

Stereotactic Injection of MicroRNA-expressing Lentiviruses to the Mouse Hippocampus CA1 Region and Assessment of the Behavioral Outcome

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an entire gene expression pathway by inducing destruction and/or inhibiting translation of these targets. Several miRNAs play key roles in maintaining neuronal structure and function and in higher-level brain functions, and methods are sought for manipulating their levels for exploring these functions. Here, we present a direct in vivo method for examining the cognitive consequences of enforced miRNAs excess in mice by stereotactic injection of miRNA-encoding virus particles. Specifically, the current protocol involves injection into the hippocampal CA1 region, which contributes to mammalian memory consolidation, learning, and stress responses, and offers a convenient injection site. The coordinates are measured according to the mouse bregma and virus perfusion is digitally controlled and kept very slow. After injection, the surgery wound is sealed and the animals recover. Lentiviruses encoding silencers of the corresponding mRNA targets serve to implicate the specific miRNA/target interaction responsible for the observed effect, with na&iuml;ve mice, mice injected with saline and mice injected with "empty" lentivirus vectors as controls. One month post-injection, the animals are examined in the Morris Water Maze (MWM) for assessing their navigation learning and memory abilities. The MWM is a round tank filled with colored water with a small platform submerged 1 cm below the water surface. Steady visual cues around the tank allow for spatial navigation (sound and the earth's magnetic field may also assist the animals in navigating). Video camera monitoring enables measuring the route of swim and the time to find and amount the platform. The mouse is first taught that mounting the hidden platform offers an escape from the enforced swimming; it is then tested for using this escape and finally, the platform is removed and probe tests examine if the mouse remembers its previous location. Repeated tests over several consecutive days highlight improved performance of tested mice at shorter latencies to find and mount the platform, and as more direct routes to reach the platform or its location. Failure to show such improvement represents impaired learning and memory and/or anxiety, which may then be tested specifically (e.g. in the elevated plus maze). This approach enables validation of specific miRNAs and target transcripts in the studied cognitive and/or stress-related processes.

MicroRNAs have significant roles in brain structure and function. Here we describe a method to enforce hippocampal miRNA over-expression using stereotactic injection of an engineered miRNA-expressing lentivirus. This approach can serve as a relatively rapid way to assess the in vivo effects of over-expressed miRNAs in specific brain regions.

の定位注入マイクロRNA発現マウス海馬CA1領域にレンチウイルスと行動アウトカムの評価

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an ...

行動学

A Within-subjects Experimental Protocol to Assess the Effects of Social Input on Infant EEG

Despite the importance of social interactions for infant brain development, little research has assessed functional neural activation while infants socially interact. Electroencephalography (EEG) power is an advantageous technique to assess infant functional neural activation. However, many studies record infant EEG only during one baseline condition. This protocol describes a paradigm that is designed to comprehensively assess infant EEG activity in both social and nonsocial contexts as well as tease apart how different types of social inputs differentially relate to infant EEG. The within-subjects paradigm includes four controlled conditions. In the nonsocial condition, infants view objects on computer screens. The joint attention condition involves an experimenter directing the infant's attention to pictures. The joint attention condition includes three types of social input: language, face-to-face interaction, and the presence of joint attention. Differences in infant EEG between the nonsocial and joint attention conditions could be due to any of these three types of input. Therefore, two additional conditions (one with language input while the experimenter is hidden behind a screen and one with face-to-face interaction) were included to assess the driving contextual factors in patterns of infant neural activation. Representative results demonstrate that infant EEG power varied by condition, both overall and differentially by brain region, supporting the functional nature of infant EEG power. This technique is advantageous in that it includes conditions that are clearly social or nonsocial and allows for examination of how specific types of social input relate to EEG power. This paradigm can be used to assess how individual differences in age, affect, socioeconomic status, and parent-infant interaction quality relate to the development of the social brain. Based on the demonstrated functional nature of infant EEG power, future studies should consider the role of EEG recording context and design conditions that are clearly social or nonsocial.

This novel protocol is designed to assess the neural bases of social interaction in infants. The paradigm is designed to tease apart how various social inputs such as language, joint attention, and face-to-face interaction relate to infant neural activation. Infant EEG power is recorded during both social and nonsocial conditions.

幼児EEGに関する社会入力の効果を評価するために、被験者内実験プロトコール

Despite the importance of social interactions for infant brain development, little research has assessed functional neural activation while infants ...

Testing Animal Anxiety in Rats: Effects of Open Arm Ledges and Closed Arm Wall Transparency in Elevated Plus Maze Test

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral science, conflicting outcomes are often provided from different laboratories. To identify reasons for the different outcomes, we previously focused on arm features, which differ between laboratories, most notably the presence/absence of ledges at the sides of open arms and the transparency/opaqueness of closed arm walls. In a previous report, we used a custom designed container to compare rat behavior on different combinations of open and closed arm designs under otherwise identical experimental conditions, and showed that differences in arm features interfere with experimental outcomes. In brief, open arm ledges significantly increased anxiety-like behavior in rats, while transparent arms may also have decreased this behavior. Furthermore, we verified a higher detection sensitivity of the effect of an anxiolytic drug in a combination of no-ledged open arm + opaque walled closed arm compared with a combination of ledged open arm + transparent walled closed arm. In this report, we introduce our protocol for the elevated plus maze test, together with discussion of the key results from the previous report and our experimental experience. We believe this report will provide useful information for researchers who have employed or who plan to use the elevated plus maze in their studies.

Rats' anxiety-like behavior tested by the elevated plus maze varies highly depending on the testing environment. Here we show how apparatus settings, especially arm structure, affect behavior on the maze, and we explain a reliable protocol to detect effects of anxiolytic drugs. This report will contribute to anxiety research.

ラットにおける動物の不安をテスト: 腕が開いて棚とクローズド アームの効果壁透明性高架十字迷路試験

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral ...

Assessment of Social Transmission of Food Preferences Behaviors

Olfactory recognition deficits are suggested to be able to serve as clinical marker to differentiate Alzheimer&#39;s disease (AD) subjects from healthy aging groups. For example, olfactory dysfunction in AD can present as impairment in olfactory recognition, emerging during early stages of the disease and worsening while the disease progresses. The social transmission of food preferences (STFP) task is based on a rudimentary form of communication between rodents concerning distant foods dependent on the transmission of olfactory cues. Healthy wild-type mice would prefer to eat a novel, flavored food that was previously cued by a conspecific, and this food preference would be hampered in transgenic AD mice, such as the APP/PS1 model. Indeed, a strong preference for the cued food in C57Bl6/J mice of 3 months of age was found, and this was reduced in 3 months old transgenic APP/PS1 mice. In summary, STFP task could be a powerful measure to be integrated in present subclinical detection assays of AD.

This paper presents a protocol for the investigation of social transmission of food preference in mice. The advantages and possible applications for this procedure, for instance, in detecting early changes in AD mouse models, are highlighted. To conclude, interpretation of the results in light of critical details are discussed.

食品の好み行動の社会的伝達の評価

Olfactory recognition deficits are suggested to be able to serve as clinical marker to differentiate Alzheimer&#39;s disease (AD) subjects from healthy ...

Tickling, a Technique for Inducing Positive Affect When Handling Rats

Handling small animals such as rats can lead to several adverse effects. These include the fear of humans, resistance to handling, increased injury risk for both the animals and the hands of their handlers, decreased animal welfare, and less valid research data. To minimize negative effects on experimental results and human-animal relationships, research animals are often habituated to being handled. However, the methods of habituation are highly variable and often of limited effectiveness. More potently, it is possible for humans to mimic aspects of the animals&#39; playful rough-and-tumble behavior during handling. When applied to laboratory rats in a systematic manner, this playful handling, referred to as tickling, consistently gives rise to positive behavioral responses. This article provides a detailed description of a standardized rat tickling technique. This method can contribute to future investigations into positive affective states in animals, make it easier to handle rats for common husbandry activities such as cage changing or medical/research procedures such as injection, and be implemented as a source of social enrichment. It is concluded that this method can be used to efficiently and practicably reduce rats&#39; fearfulness of humans and improve their welfare, as well as reliably model positive affective states.

This article demonstrates the standardized application of playful handling, a tickling technique designed to mimic rat rough-and-tumble play. This technique is effective at reducing fearful reactions to humans and generating positive affect when rats are handled for common husbandry activities and medical and research procedures such as injection.

くすぐり、ラットを処理するときに肯定的な影響を誘発するためのテクニック

Handling small animals such as rats can lead to several adverse effects. These include the fear of humans, resistance to handling, increased injury risk ...

Using a Classroom-Based Deese Roediger McDermott Paradigm to Assess the Effects of Imagery on False Memories

Associated word list procedures can elicit false memories in predictable ways by inducing associative processing, thus making it harder to monitor the accuracy of memories. The purpose of the method presented here was to induce false memories using lists of either semantically or phonologically related words and to assess the effects of imagery instructions on the recall and recognition of those false memories. To do this, we used a modified version of the Deese Roediger McDermott (DRM) paradigm. We adapted word lists from previous DRM studies to suit imagery procedures and created an automated presentation to present the word lists in classroom settings. We then recruited undergraduate classes and instructed some of the classes to create mental images of the list words as they were being presented, while instructing the other classes to simply remember the words. The automated presentation presented word lists to participants, one word at a time, alternating between phonologically and semantically related lists. Participants used paper-pencil recall packets to immediately recall list items, complete a distractor activity, and take a subsequent final recognition test. Often, participants immediately recalled and later recognized words that were related to the list items but were not actually presented; these are known as critical lures and indicate a false memory. The protocol detailed here describes a four-step procedure - list presentation, immediate recall, distractor phase, and final recognition - that can assess the effects of list type and imagery instruction within the DRM paradigm on memory. The automated nature of the list presentation provides the ability to systematically vary variables of interest, and the paper and pencil method of data collection affords an easily accessible method for collecting data in classroom settings. The protocol also offers options to modify the procedure to a more traditional DRM paradigm without imagery and/or list type manipulations. The use of this protocol can provide results relevant to both classroom learning and cognitive science principles.

The method presented here induced false memories using lists of related words and also assessed the effects of imagery instructions on the recall and recognition of those false memories. This protocol details a modified version of the Deese Roediger McDermott (DRM) paradigm.

偽りの記憶のイメージの効果を評価するために教室ベース Deese Roediger マクダーモット パラダイムを使用してください。

Associated word list procedures can elicit false memories in predictable ways by inducing associative processing, thus making it harder to monitor the ...

Assessing the Coherence of Parents' Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with parents. This paper focuses on such a method, namely Five-Minute Speech Sample-Coherence (FMSS-Coherence). In this method, a parent is asked to speak for five uninterrupted minutes about her/his child and their relationship. The resulted narrative is coded for coherence, namely the extent to which the parent provides&#160;in the narrative&#160;a clear, consistent, multidimensional and well-supported portrayal of the child. FMSS-Coherence is based on attachment research that shows that the coherence of parents&#8217; narratives is indicative of the quality of the parent-child relationship and child adjustment. It overcomes the limitations of attachment narrative measures which are typically labor intensive. FMSS-Coherence is less nuanced than extant attachment narrative measures. Yet, studies of families from different cultural backgrounds, across different child ages and in the context of typically developing children as well as children with special needs suggest that coherence can be reliably evaluated using the FMSS procedure. Furthermore, parents&#8217; FMSS-Coherence is associated with parenting quality and children&#8217;s socio-emotional adjustment. Thus, it holds promise for researchers and practitioners who seek a relatively time- and cost-effective method for assessing the coherence of parents&#8217; narratives regarding their child.

Assessing the Coherence of Parents&#039; Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

This paper introduces a method for assessing the coherence of parents' short narratives regarding their child and their relationship using the five-minute speech sample procedure.

5分間の音声サンプル手順を用いた子どもに関する親の短い物語の一貫性の評価

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with ...

Applying an eMASS Customization Program as a Research Tool to Evaluate Consumer Benefits

As many scholars and practitioners study personalization and relationship marketing, it is important to provide personalization such as mass customization through marketing technology. The purpose of this study is to examine how to conduct consumer research using an online survey and analysis of data. This study examines consumers&#39;&#160;perceived benefits while customizing a product as well as emotional product attachment, attitudes toward a customization program, and loyalty intentions in the context of online retailing. In addition, this study investigates how consumer responses are different based on individual characteristics such as fashion innovativeness. An online survey company in South Korea recruited 290 female apparel shoppers who purchased apparel online. To enhance external validity, this study used an existing retail website with a well-established mass customization program. After completing the customization program, participants complete the online questionnaire. Structural equation modeling (SEM) and latent mean analyses (LMAs) are then performed for analyses. This study stresses the importance of testing measurement invariance for mean comparisons. Before the SEM and LMA, this study follows the hierarchy of invariance tests (configural invariance test, metric invariance test, and scalar invariance test), which are not considered by traditional approaches such as ANOVA. These statistical analyses provide applicability of the invariance test procedures and LMA to consumer behaviors. The conclusions of mean differences have integrity and validity because they are guided by a sophisticated statistical procedure to ensure measurement invariance.

Presented here is a protocol to examine consumer responses toward mass customization in the context of online retailing. The protocol details the online survey procedure and how to analyze data using structural equation modeling and group differences using latent mean analyses.

消費者の利益を評価するための研究ツールとしてeMASSカスタマイズプログラムを適用する

As many scholars and practitioners study personalization and relationship marketing, it is important to provide personalization such as mass customization ...

An Experimental Paradigm for Measuring the Effects of Ageing on Sentence Processing

Previous studies have found that older adults have greater difficulties in processing syntactically complex sentences than younger adults. However, the exact regions where the difficulties arise have not been fully identified. In this study, a maze task was implemented to investigate how older adults and younger adults differentially processed two types of sentences with different levels of syntactic complexity, namely subject relative clauses and object relative clauses. Participants were asked to choose between two alternatives at each segment of the sentences. The task required participants to engage in a strictly incremental mode of processing. The reading times for each segment were recorded, allowing the quantification of the difficulty of sentence reading. The task allowed us to identify the exact locations of the processing difficulty and thus facilitate a more accurate assessment of the age-related decline in sentence processing. The results indicate that the effect of ageing was found mainly at the head nouns, but not at other regions of the sentences, a finding which suggests that the maze task is an effective method to identify the exact location of the ageing effect on sentence processing. The implications of this experimental paradigm for investigating the effect of ageing on sentence processing are discussed.

Here, we present a protocol to examine the age-related decline in sentence processing using a maze task that allowed us to localize the processing difficulty at each word of the sentences during reading.

老化が文処理に及ぼす影響を測定する実験的パラダイム

Previous studies have found that older adults have greater difficulties in processing syntactically complex sentences than younger adults. However, the ...

The Use of Traditional Fear Tests to Evaluate Different Emotional Circuits in Cattle

Animal temperament is complex and has implications for productivity and economic profitability. Quantifying an animal&#39;s response to differing stimuli may facilitate breeding selections and identify animals that are better suited to specific management strategies. Multiple tests have been developed to evaluate cattle temperament (e.g., exit velocity, chute score, pen score, open field test, startle test, bovine zero maze), but each of these tests evaluates the animal&#39;s response to different stimuli (e.g., isolation, novel environment, startle, willingness to enter an enclosed area). Cattle temperament has been observed to be relatively stable over time. However, the evaluation of temperament has the potential to be influenced by current conditions, previous experiences, and observer bias. Many of these temperament tests have been improperly categorized as fear tests and have also been criticized for being subjective. This paper provides a framework for standardizing behavioral tests for cattle and suggests that these different evaluations assess different aspects of the animal&#39;s overall temperament.

Here, we present a protocol to conduct a variety of behavioral tests in cattle that have been designed to evaluate emotions. A battery of behavioral tests (open field test, startle test, bovine zero maze, exit velocity, pen score, and chute score) were conducted to evaluate different components of animal temperament.

牛の異なる感情回路を評価するための伝統的な恐怖試験の使用

Animal temperament is complex and has implications for productivity and economic profitability. Quantifying an animal&#39;s response to differing stimuli ...