R01AA016837（JCB）とP20AA017828（AGDとJCB）：これらの研究は、国立衛生研究所、国立アルコール依存症とアルコール乱用研究所からの補助金によってサポートされていました。

アッセイの前日に実行するための手順1. <ol><li>新鮮な線虫の増殖培地へのL4段階のワームをピック（NGM）プレートはOP50 E.の芝生を播種20 CO / Nにおける大腸菌 、文化、それらを。各アッセイ条件は、10ワームが必要です。ワームのO / N損失を可能にするためにワームの過剰を選ぶ。 <ol><li>最初の日の成人のみアッセイ動物;多くの変異体は野生型よりも遅い速度で成長する。試験した全ての動物は最初の日の成人になるように発達の遅れを持っている株でピッキングのタイミングを調整します。 </li></ol></li></ol> 2.手順アッセイの日に実行する方法<ol><li>アッセイのための準備： <ol><li>標準播種していない60×15ミリメートルNGMプレート上でアッセイを行う。蓋をオフにして、2時間37℃で使用する全てのプレートを乾燥させる。それぞれの実験試験のために、4乾燥したNGMプレートを使用します。これらは、0 MMと400 mMのエタノールアッセイプレートとそれに付随する順化プレートになります。 注意：NGMプレートの使用はここに重要です。プレートの組成の違いは、特にそれらのオスモル濃度は、強く行動にエタノールの用量応答に影響を与えることができる、これは、少なくとも部分的には、動物20によって蓄積されたエタノール量の変化に起因する。 NGM寒天は160ミリオスモルである。 </li><li>乾燥させた後、アッセイに使用される非シードNGMプレートの各計量および体重を記録します。空のプレートの重量に基づいて、プレート内でのメディアの音量を決定します。ボリュームの寒天の重量の変換を近似するために、メディアは等量の水と同じ重さと仮定する。 注：私達の最も一貫した結果は、元の10ml容量が8.3〜8.9ミリリットルの間の乾燥後の体積を有することを十分に脱水したNGM培地で見出されている。 2時間の乾燥時間の代替は、プレートがインキュベータの違いを考慮して、この容量範囲に達するまで乾燥させることである。 </li><li> 4銅リング（1の内径を溶かす。6センチメートル）炎で鉗子でworms.Grasp各リングの異なる遺伝子型または治療群のための囲い、熱として作用するプレートの表面に（ブンゼンバーナーからの強い炎がうまく機能）約3秒。まだ「スキップ」からそれを防ぐために、鉗子でリングを保持している間すぐにプレートにリングを置きます。 <ol><li>リングはリング上のいくつかの点で鉗子で軽く押し下げて、寒天の表面に対して平らに載ることを確認してください。リングを配置する場合、追加の3つのリングのための余地を残すように注意してください。 </li><li>すべての4つのカメラの視野内になるように互いにできるだけ近くにそれらを配置するように注意しながら、プレートの表面に3つの追加の銅リングを溶かす。 注：寒天で良好なシールを作るには、アッセイの間のリングでワームを保つために不可欠である。板の上に周りのスキップリングが寒天で正しいシールを作る可能性は低いとワームは穴を掘ることを可能にするとワームを可視化を妨げる寒天を、傷跡があります。 </li><li>各アッセイプレート乾燥し、播種していないと何エタノールを受信しませんする必要があります添付「順化」のプレートを準備。これらのプレート上の4つの銅リングを置きます。 </li></ol></li><li>リング自体の視野内に書き込まないように注意しながら、次のリングで使用するワーム株とそれぞれのリングに、プレートの下にラベルを付けます。それに付随する順化プレートとアッセイプレート上のラベルと一致。 </li><li>最終濃度が0mMのまたは400mMのエタノール（体積に対する重量）となるように各アッセイプレートに追加する100％エタノールの量を計算する。各実験（n = 1 の場合 ）、1 0mMの一つの400mMエタノール板が存在する。順化プレートはエタノールを受信しません。プレートの表面のまわりでそれをピペットで、エタノールを追加します。プレートをシールするために実験用フィルムを使用し、それが2時間ベンチ上に平衡化させる。 </li><li> 1.5時間が経過すると、アッセイの順応ステップ、ステップ2.2を開始する。 </li></ol></li><li>アッセイプレート：歩行運動アッセイを実施<ol><li>慎重に順化板上の銅リングの中心に各実験群の10ワームを転送する。ワームのピックで軽くこすることによって、この時点で寒天上に表示されている任意の食品を削除します。同株は、臨床試験で同じ順序でプレート上に置かれないように、実験群は、実験的試験を横切るプレート上に置かれる順序を変化させる。 注：目標は、順応プレート上の食品がアッセイプレートに移された場合、ワームは、食品の周りに集約され、運動に対する薬物の効果が隠されるため、食品の最小限の量でプレートに動物を転送することである。 </li><li>これはワームが穴を掘ることができますし、アッセイを妨害するように、ピックと寒天の表面を壊さないように注意してください。室温で30分間ワームをインキュベートする。 </li><li>各プレートのイニシエーションの間に適切な間隔があることを確認します。経験豊富な実験者は、&lt;1.5分で4輪用の40の動物、10 /リングを移動させることができますが、2分までの任意の間隔が許容される。標準的なアッセイは、10〜12分であり、0 MMおよび400 mMのエタノールの両方の曝露の30-32分で記録映画を持っています。 </li><li>第二のムービーが開始しなければならない前に、最初のムービーファイルの保存を可能にするために、約2分30秒離れて400 mMの露光用の0 mMの曝露と順化板に順化プレートを開始します。 </li><li> 30分間の順応期間の後、アッセイプレートに順応プレートからワームを転送する。それらは各プレートの補完の間のタイミングを追跡する、順応プレートに添加したのと同じ順序でアッセイプレートにワーム（0 mM以下の400mMエタノール）を転送する。気化エタノールの損失を最小限にするために実験用フィルムでプレートを密封する。 </li><li> U薄い刃の平坦化ワームにすくい運動は、平坦化されたピックの上にワームを収集するために選ぶSE。それはピックにワームを接着するのに役立ちますように、一般的にワームを搬送する際に用いられる細菌、を使用せずにアッセイプレートに播種していない順化プレートからワームの転送を実行します。 注意：プレートの最初のウォームをプレートに加え、最後のワームよりも長いエタノールにさらさ​​れるので、動物がこの段階で転送される速度が非常に重要であり、以前の時点でいくつかの時間依存効果を示し得る。これは株は最初の実験の反復全体のプレート上に配置されて回転させるための主な理由である。 </li></ol></li><li>歩行アッセイを実行します。ビデオ撮影<ol><li>そのような2048x2048 7.4と0.5倍の顕微鏡対物レンズ、0.8倍の倍率とカメラとして、視野（約42x42 mm 2の正方形）のすべての4輪の同時イメージングを可能にし、顕微鏡/カメラの組み合わせを使用して、81、m個の画素CCD。 </li><li>強度閾値ステップで物体認識を助ける視野を横切っての照明にも使用する（下記参照）。 3「X3」バックライトはうまく動作します。 </li><li>イメージメディア側を上に配置プレート上のワームの光源を送信した伝統的な顕微鏡と比較してバックライトを使用する際に失われたコントラストを生成し（蓋ダウン）、。 </li><li>移動するワームのタイムラプスムービーをキャプチャする画像解析ソフトウェアを準備します。 2分（1​​20フレーム）ムービーとして、1秒毎に12ビットグレースケール画像をキャプチャするためのソフトウェアを設定します。まだ十分な画像解像度を維持しつつ、出力ファイルのサイズを低減するために、1024×1024ピクセルの画像をキャプチャする2×2ビニングモードを使用する。 </li><li>映画を記録します。最後のワームがそのプレート上に配置した10分後に最初のプレート（0 mMのエタノール）の120フレームの動画撮影を開始します。ムービーファイルを保存します。 </li><li>第二のプレート（400 mMのエタノール）を記録します。このプロセスを繰り返します最後にワーム30分後に始まる両プレートは、各露光のために30〜32分の時間点を捕捉する第一プレート（0 mMのエタノール）上に置いた。 注：分析すべき次のプレートの記録を開始する前に、各キャプチャセッション後の画像ファイルを保存するのに十分な時間を確保してください。 </li><li>アーカイブされた映画の未来プルーフ用の8ビット256グレースケールのTIFFファイルに各ムービーのコピーを変換し、これらの映画が開かれ、そのようなImageJの28など、他のパブリックドメインのオープンソースイメージングソフトウェアプログラムによって分析されることを可能にする。 注：ここで説明する画像解析ソフトウェアは、独自のファイル形式を使用しています。 </li></ol></li><li>イメージプロ（ImagePro）ソフトウェアを使用して映画の分析。 <ol><li>キャプチャされたら、画像-Proソフトウェアまたはその同等Plusを使用して映画を分析する。 注：他のオブジェクトトラッキングソフトウェアの様々な利用可能で正常に複数C.を追跡するために使用されたこと1時間29などで虫オブジェクト識別ステップは同様の原理に基づいているソフトウェアは、合理的に、ここで説明したものに代替できた。記載されている方法は、画像プロプラスソフトウェアのバージョン6.0から6.3と7.0であって、イメージ·プロプラスソフトウェアの新しいバージョンでは、マイナーな違いがある場合がございます。 </li><li> 2分（1​​20フレーム）のセグメントに映画を分析します。まず、背景を平坦とウォームオブジェクトのコントラストを向上させるために画像にフィルタを適用する。次のようにフィルタを選択：メニュー&gt;プロセス&gt;フィルタ&gt;強化&gt;フラット化：パラメータ：背景=ダーク。 WIDTH = 20 Pixのを備えています。 </li><li>フィルタリングステップの後に映画を再保存が、常にそのフィルタリングされていない形でオリジナルのムービーを保持します。 <ol><li>配置され、銅リングとオーバーラップするような大きさの関心（ROI）の円形領域とは別に、各環における動物の運動を分析します。コマンド...メニュー&gt;メジャー&gt;トラックオブジェクトとワームを特定し、追跡する。これはトラッキングDが表示されますATA表ウィンドウ。追跡オプションボタンは、特定のトラックが除外されるように、任意の実験的なアーティファクトを制限することができます。 </li></ol></li><li>自動追尾]タブで、次のパラメータを使用します。トラックパラメータ：速度制限（検索半径）= 400ミクロン/フレーム、加速限界=オート、最小の総トラック長を=400μmで、優勢なモーションタイプ=混沌。トラックパラメータ内のオブジェクトは：部分トラック= YES、最小長= 21フレーム、トラッキング予測深さ= 1フレームを許可します。 </li><li>追跡プロセスを開始するには、自動的にすべてのトラックを探すカウント/サイズオプション]ダイアログボックスと追跡ダイアログボックスを開き、ボタンをクリックして機能する。分析用のワームオブジェクトを強調するために、軽量化背景ピクセルを無視するワームピクセルのグレースケール強度を使用して重要なしきい値ステップを提供してカウント/サイズ]ダイアログボックス、内の強度範囲の選択のためのマニュアルのオプションを選択します。 <ol><li>強度閾値SLIを調整しますDERをすべて暗いオブジェクトを強調包括的な範囲を作成するには（下限値を設定する上限、1を設定するには、1）。 0-4,095の規模0-1,500の範囲は、より細かいチューニングのための良い出発点である。 </li><li>そのような銅リング、プレート上の任意の破片のような単一のワームオブジェクトより大きく、小さいオブジェクトを除外するためにサイズのフィルタを適用します。カウント/サイズオプション]ダイアログボックスの2尺度との姿勢の様々な個々のワームのためにサイズをカバーこれを行うには、サイズのパラメータ選択&gt;計測メニュー項目を設定します。 （エリア範囲：28,000-120,000μm2で、境界範囲：600-2,500ミクロン）。 </li><li>変異株を分析するプレート上の他の動物よりも有意に小さい、または大きい場合、設定を変更する必要がないように、最初の動物を追跡​​する前に、株の異なるサイズに対応するために、物体認識のためのフィルタ設定の範囲を広げる半ば分析。 </li></ol> &lt;/ LI&gt; <li>追跡ダイアログボックスで[続行]をクリックしてトラッキング処理を完了します。視覚自動フィルタの設定に基づいて、それを排除する正当な理由がない限り、すべてのワームが表現されていることを確実にするために映画の中の各ワームの進行に出力トラックを比較する。手動でサイズのフィルタ基準を満たして確認された非ワームのオブジェクトの存在によって生産されたトラックを削除します。 </li><li>各フレーム間の各ワームの速度を計算するためのソフトウェアを使用します（距離はフレーム間の1秒あたりのオブジェクトの重心のために旅し）とにおけるワームの人口のためにすべてのトラック全体で各トラックの平均速度と平均速度を表示銅リング。この最終的な平均は実験的な臨床試験の面ではn = 1であると考えています。統計分析とデータアーカイブのためのスプレッドシートプログラムにデータをエクスポートします。 </li><li>データは、プレート上の第一のリングのために記録された後、次のリングにROIを移動させパラメータを変更することなく、追尾処理を繰り返す。 </li><li> ：を通して移動の相対速度を算出する</li><li>相対速度（％）=未処理（400 mM）の速度/（0 mM）の速度×100。 注：別の遺伝子操作は、多くの場合、動物の基礎歩行速度を変える。動物の歩行速度に対するエタノールの効果を決定するために、異なる遺伝子型または条件にわたってこれらの効果を比較することができるようにするために、相対速度を算出する。 </li></ol></li></ol>

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	<li>Prescott, C. A., Kendler, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+environmental+contributions+to+alcohol+abuse+and+dependence+in+a+population-based+sample+of+male+twins.">Genetic and environmental contributions to alcohol abuse and dependence in a population-based sample of male twins.</a> Am. J. Psychiatry. 156, 34-40 (1999).</li><li>Schuckit, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+the+risk+for+alcoholism.">Genetics of the risk for alcoholism.</a> Am. J. Addict. Article Review. 9, 103-112 (2000).</li><li>Heath, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+differences+in+alcohol+sensitivity+and+the+inheritance+of+alcoholism+risk.">Genetic differences in alcohol sensitivity and the inheritance of alcoholism risk.</a> Psychol. Med. 29, 1069-1081 (1999).</li><li>Rodriguez, L. A., Wilson, J. R., Nagoshi, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+psychomotor+sensitivity+to+alcohol+predict+subsequent+alcohol+use.">Does psychomotor sensitivity to alcohol predict subsequent alcohol use.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 17, 155-161 (1993).</li><li>Schuckit, M. A., Smith, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+8-year+follow-up+of+450+sons+of+alcoholic+and+control+subjects.">An 8-year follow-up of 450 sons of alcoholic and control subjects.</a> Arch. Gen. Psychiatry. 53, 202-210 (1996).</li><li>Kalu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heritability+of+level+of+response+and+association+with+recent+drinking+history+in+nonalcohol-dependent+drinkers.">Heritability of level of response and association with recent drinking history in nonalcohol-dependent drinkers.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 36, 522-529 (2012).</li><li>Davis, S. J., Scott, L. L., Hu, K., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+single+residue+in+the+BK+potassium+channel+required+for+activation+by+alcohol+and+intoxication+in.">Conserved single residue in the BK potassium channel required for activation by alcohol and intoxication in.</a> C. elegans. J. Neurosci. 34, 9562-9573 (2014).</li><li>Raabe, R. C., Mathies, L. D., Davies, A. G., Bettinger, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Omega-3+Fatty+Acid+Eicosapentaenoic+Acid+Is+Required+for+Normal+Alcohol+Response+Behaviors+in+C.+elegans.">The Omega-3 Fatty Acid Eicosapentaenoic Acid Is Required for Normal Alcohol Response Behaviors in C. elegans.</a> PLoS ONE. 9, e105999 (2014).</li><li>Topper, S. M., Aguilar, S. C., Topper, V. Y., Elbel, E., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+disinhibition+of+behaviors+in+C.+elegans.">Alcohol disinhibition of behaviors in C. elegans.</a> PLoS ONE. 9, e92965 (2014).</li><li>Bhandari, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloride+intracellular+channels+modulate+acute+ethanol+behaviors+Drosophila,Caenorhabditis+elegans+and+mice.">Chloride intracellular channels modulate acute ethanol behaviors Drosophila,Caenorhabditis elegans and mice.</a> Genes Brain Behav. 11, 387-397 (2012).</li><li>Davies, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+central+role+of+the+BK+potassium+channel+in+behavioral+responses+to+ethanol+in+C.+elegans.">A central role of the BK potassium channel in behavioral responses to ethanol in C. elegans.</a> Cell. 115, 655-666 (2003).</li><li>Davies, A. G., Bettinger, J. C., Thiele, T. R., Judy, M. E., McIntire, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+variation+in+the+npr-1+gene+modifies+ethanol+responses+of+wild+strains+of+C.+elegans.">Natural variation in the npr-1 gene modifies ethanol responses of wild strains of C. elegans.</a> Neuron. 42, 731-743 (2004).</li><li>Kapfhamer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+RAB-3/A+in+Caenorhabditis+elegans+and+the+mouse+affects+behavioral+response+to+ethanol.">Loss of RAB-3/A in Caenorhabditis elegans and the mouse affects behavioral response to ethanol.</a> Genes Brain Behav. 7, 669-676 (2008).</li><li>Speca, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+role+of+unc-79+in+ethanol+responses+in+lightweight+mutant+mice.">Conserved role of unc-79 in ethanol responses in lightweight mutant mice.</a> PLoS Genet. 6, e1001057 (2010).</li><li>Thiele, T. E., Badia-Elder, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+neuropeptide+Y+in+alcohol+intake+control:+evidence+from+human+and+animal+research.">A role for neuropeptide Y in alcohol intake control: evidence from human and animal research.</a> Physiol. Behav. 79, 95-101 (2003).</li><li>Treistman, S. N., Martin, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BK+Channels:+mediators+and+models+for+alcohol+tolerance.">BK Channels: mediators and models for alcohol tolerance.</a> Trends Neurosci. 32, 629-637 (2009).</li><li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+GWASs+and+human+protein+interaction+networks+identifies+a+gene+subnetwork+underlying+alcohol+dependence.">Integrating GWASs and human protein interaction networks identifies a gene subnetwork underlying alcohol dependence.</a> Am. J. Hum. Genet. 93, 1027-1034 (2013).</li><li>Kendler, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomewide+association+analysis+of+symptoms+of+alcohol+dependence+in+the+molecular+genetics+of+schizophrenia+(MGS2)+control+sample.">Genomewide association analysis of symptoms of alcohol dependence in the molecular genetics of schizophrenia (MGS2) control sample.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 35, 963-975 (2011).</li><li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autosomal+linkage+analysis+for+the+level+of+response+to+alcohol.">Autosomal linkage analysis for the level of response to alcohol.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 29, 1976-1982 (2005).</li><li>Alaimo, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+metabolism+and+osmolarity+modify+behavioral+responses+to+ethanol+in+C.+elegans.">Ethanol metabolism and osmolarity modify behavioral responses to ethanol in C. elegans.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 36, 1840-1850 (2012).</li><li>Morgan, P. G., Sedensky, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+affecting+sensitivity+to+ethanol+in+the+nematode,+Caenorhabditis+elegans.">Mutations affecting sensitivity to ethanol in the nematode, Caenorhabditis elegans.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 19, 1423-1429 (1995).</li><li>Mitchell, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+concentration-dependent+effects+of+ethanol+on+Caenorhabditis+elegans+behaviour.">The concentration-dependent effects of ethanol on Caenorhabditis elegans behaviour.</a> Pharmacogenomics J. 7, 411-417 (2007).</li><li>Vidal-Gadea, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+selects+distinct+crawling+and+swimming+gaits+via+dopamine+and+serotonin.">Caenorhabditis elegans selects distinct crawling and swimming gaits via dopamine and serotonin.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108, 17504-17509 (2011).</li><li>Bettinger, J. C., Leung, K., Bolling, M. H., Goldsmith, A. D., Davies, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+environment+modulates+the+development+of+acute+tolerance+to+ethanol+in+Caenorhabditis+elegans.">Lipid environment modulates the development of acute tolerance to ethanol in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS ONE. 7, e35129 (2012).</li><li>Davies, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+genes+influence+toluene-+and+ethanol-induced+locomotor+impairment+in+C.+elegans.">Different genes influence toluene- and ethanol-induced locomotor impairment in C. elegans.</a> Drug Alcohol Depend. 122, 47-54 (2012).</li><li>Newlin, D., Thomson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+challenge+with+sons+of+alcoholics:+a+critical+review+and+analysis.">Alcohol challenge with sons of alcoholics: a critical review and analysis.</a> Psychol. Bull. 108, 383-402 (1990).</li><li>Ponomarev, I., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+to+assess+initial+sensitivity+and+acute+functional+tolerance+to+hypnotic+effects+of+ethanol.">A novel method to assess initial sensitivity and acute functional tolerance to hypnotic effects of ethanol.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 302, 257-263 (2002).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9, 671-675 (2012).</li><li>Husson, S. J., Costa, W. S., Schmitt, C., Gottschalk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keeping+track+of+worm+trackers.">Keeping track of worm trackers.</a> WormBook. , (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

C.で利用可能なシンプルな神経生物学と遺伝的ツール虫は、ワームの行動に対するエタノールの影響の分子基盤を研究するために優れたモデルにする。ここでは、エタノール8,10,20,24,25に対する急性行動応答のいくつかの分子および環境メディエーターを同定するために使用されたアッセイを記載する。この方法は、二つの異なるエタノール応答挙動の表現型、初期感度?...

Alcohol use disorders (AUD) are widespread and produce serious health, social, and economic problems. In humans, the susceptibility to developing an AUD is heavily influenced by both genetics and the environment1,2. A strong physiological predictor of abuse liability is the initial level of response (LR) to alcohol (ethanol) that is exhibited by na&#239;ve drinkers3-5. This LR phenotype is influenced by genetics and non-genetic components6. Determining the molecular mechanisms that influence the LR to ethanol is an important goal of the study of ethanol response behaviors.
The nematode, Caenorhabditis elegans, has been increasingly used as a model for studying the effects of ethanol on behavior7-9. There is strong molecular conservation in the machinery of nervous system function between worms and mammals, and several genes that have been shown to influence the LR to ethanol in worms have been shown to influence LR to ethanol in mammals10-16, and have been implicated in abuse liability in humans17-19. 
Ethanol intoxicates worms, which is reflected in a decrease in their locomotion speed. Several different laboratories have developed behavioral assays that differ in several ways, for example, the locomotion behavior that they study (crawling versus swimming11,12,14,20,21) or in the composition of the solutions in which the assays are performed (nematode growth medium versus Dent&#8217;s saline20,22). Interestingly, these diverse assays have yielded somewhat different dose response profiles for the effects of ethanol. These results have pointed to important differences in the underlying behaviors of crawling and swimming9,23, as well as a role for the environmental variable osmolarity in ethanol responses20, and have highlighted the importance of describing experimental detail of the various assays.
An assay to measure the acute effects of ethanol on crawling behavior is presented here. This assay has been used extensively to study the genetic and environmental influences on the LR to ethanol8,10,20,24,25. The mammalian LR phenotype is a composite of at least two components, initial sensitivity to ethanol and acute functional tolerance to ethanol26,27. In worms, the LR phenotype has been shown to be separable into these two components through the use of this behavioral assay. The influences of genetic and environmental manipulations on both phenotypes can be examined using this single assay. Importantly, these two phenotypes are genetically separable.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>C. elegans strains</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 x15 mm Petri plates, triple vented</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>628161</td>
			<td>Other plate brands will suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NGM agar</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>NaCl (3g/L), agar (17g/L), peptone (2.5g/L), 1 mL cholesterol (5mg/mL in ethanol), 1 mL (1M) MgSO4, 1 mL (1M) CaCl2, 25 mL (1M) KPO4, pH=6, 975 mL H2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>e.g. Fisher Scientific #10300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37&#176;C Incubator</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For drying agar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital balance</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For determining plate weights and agar volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper rings</td>
			<td>Plumbmaster</td>
			<td>STK#35583 (48 cap thread gasket)</td>
			<td>1.6 cm inner diameter, 1.8 cm outer diameter copper rings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCD camera</td>
			<td>QImaging</td>
			<td>RET-4000R-F-M-12</td>
			<td>This camera has a large field of view.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope with C-mount and 0.5X objective</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ6</td>
			<td>Discontinued model, M60 is current equivalent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Schott</td>
			<td>A08923</td>
			<td>3&#8221;x3&#8221;&#160; backlight for even illumination across the field of view</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging and tracking software</td>
			<td>Media Cybernetics</td>
			<td>ImagePro-Plus v6.0-6.3</td>
			<td>Newer versions of the software have tracking functions.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an assay for measuring the effects of ethanol on the locomotion speed of caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

いくつかの異なる遺伝子型とその対になったコントロールからの代表的なデータ（ 図1）は、8,24 を提示されている。データは、具体的にアッセイした動物において、そのハイライトの違いを選択した。曝露の10分での効果の程度は、 図1B-Gの左軸に示されている株の初期感度と考えられている。 10分での対照よりも大きな相対速度を有する変異株は、...

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An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

の歩行速度に対するエタノールの効果を測定するためのアッセイ<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

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An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

8.5K ビュー.  Virginia Commonwealth University. C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay. 