The work was funded by the Fund for Medical Research and Education, Wayne State University, Detroit, MI.

1.細胞培養<ol><li>シード3×10 75センチメートルフラスコ中の完全増殖培地10の10ミリリットルで5 HUVEC細胞。 </li><li> 70〜80％コンフルエンスまで5％CO 2中37℃で細胞をインキュベートします。 </li></ol> 2.細管形成アッセイ<ol><li> 4℃で氷の上で一晩増殖因子低減（GFR）は、細胞外マトリックスまたは通常の細胞外マトリックスのいずれかを解凍します。 注：「細胞外マトリックス」簡潔にするために、以後GFRと正常細胞外マトリックスの両方を参照するために使用されます。それらを準備するためのプロセスは同じです。 </li><li>氷上で96ウェル培養プレートを維持し、よく予め冷却したチップを使用してあたりチルド細胞外マトリックスの50μlを添加します。唯一の正常な細胞外マトリックスを含む5ウェルの三重を準備します。のみGFR細胞外マトリックスを含む5ウェルの別の三連を準備します。 </li><li> 30分間、37℃で96ウェルプレートをインキュベートします。 </li><li> HUVECをを洗います一度リン酸緩衝溶液を用いて、カルシウムとマグネシウム（PBS）なし、および1ミリリットルを0.05％トリプシン-EDTAを追加します。ほとんどの細胞は切り上げになるまで細胞分ごとにチェックし、1-5分間37℃で皿をインキュベートします。一度フラスコをタップすることで細胞を取り除きます。 <ol><li> 5 mlのに基礎培地を追加し、1％ウシ胎児血清（FBS）を用いて（ 例えば、（何もせずに、すなわち、内皮細胞増殖培地、補充物）を加えました）。ピペットでフラスコ内の細胞を収集し、15mlチューブに移します。 5分間、200×gで細胞を遠心分離し、上清を捨てます。 </li><li> 、2ミリリットル基礎培地で再懸濁血球計数器を用いて細胞をカウントし、2-3×10 5細胞/ mlに細胞濃度を調整します。 </li></ol></li><li> 11μM、5.6μM、1.1μM、0.56μMおよび0μM（コントロール）：基礎培地中でCXCR2阻害剤SB225002の以下の10倍の濃度の100μlのを準備します。 </li><li>各5 MICRにHUVEC懸濁液300μLをピペットocentrifugeチューブ。阻害剤濃度の33μLを加える（11μM、5.6μM、1.1μM、0.56μMおよび0μM）1チューブにHUVECを、と渦を含む各。 </li><li>細胞外マトリックスの個々のウェルに細胞懸濁液（1〜1.5×10 4細胞）のそれぞれのピペットを50μl。三連で各懸濁液をプレートし、37℃、5％CO 2で4〜16時間インキュベートします。 </li><li> 4-16時間後、よく倒立顕微鏡カメラ11（元の倍率×100）を使用して、あたりに形成されたチューブの4写真を撮ります。 </li></ol> 3.細管破壊アッセイ<ol><li>管形成アッセイ（2.3から2.1ステップ）と同じ仕様に応じて、細胞外マトリックス、プレートを準備します。 </li><li>手順で説明したように、2.4GHz管形成アッセイ、アリコートの2.4.2を細胞外マトリックスを含む96ウェルプレートにウェル当たり50μlのでHUVEC懸濁液を準備します。 注：プレートに十分な井戸秒薬物処置あたり3ウェルがあることO。 </li><li> 37℃、5％CO 2で4時間、細胞外マトリックス上で細胞を増殖させます。薬物治療を開始する前に画像を取ります。 </li><li>管形成アッセイのステップ2.5で説明したようにCXCR2阻害剤SB225002の2倍の濃度を用意し、HUVECをを含む96ウェルプレートのウェルあたり各濃度の50μlを添加します。三連で各濃度をプレート。 </li><li> 37°C、5％CO 2で別の2-12時間プレートをインキュベート。各ウェル倒立顕微鏡カメラ（100×元の倍率）11を使用して形成されたチューブの4つの画像を取ります。 </li></ol> 4.定量化データ<ol><li>顕微鏡カメラソフトウェアを使用して、4つのランダムな顕微鏡視野内のチューブの総管長を測定することにより、画像内に捕捉管形成を評価します。 </li><li>顕微鏡カメラのソフトウェアで画像を開き、「注釈および測定をクリック9 ;. 「長さ」セクションで、「シンプルライン」ツールを選択します。次に右クリックし、チューブの長さに沿って線を引き、画像をクリックしてください。 注：ソフトウェアが自動的にピクセル単位の線の長さを計算し、ファイルにデータを配置します。 </li><li> 「シンプルライン」ツールを選択することで、画像内のすべての管ラインのための手順を繰り返します。次に右クリックし、チューブの長さに沿って線を引き、画像をクリックしてください。 注：ソフトウェアは、各ラインの長さを記録し、データを画面に表示します。 </li><li>画像内のすべてのチューブを測定した後、「エクスポート」をクリックし、[スプレッドシートに長さ &#39;を選択しました。 注：長データをスプレッドシートにエクスポートされます。 </li><li>総管の長さを取得するには、スプレッドシートからチューブの長さのすべてを追加します。計算し、チューブの平均の長さを記録します。 注：四つの反復は、平均値と決定された標準偏差で推奨されています。 </li></ol>細胞外マトリックスの文化から5.回復の細胞<ol><li>培養チューブ形成アッセイを行うには、十分な細胞数が得られないであろう、96ウェルプレートのように大規模に（セクション2を参照します）。 12ウェルプレートの場合は、細胞外マトリックスの500μlのとHUVEC細胞懸濁液（1.5×10 5細胞）の500μLを使用しています。 </li><li>チューブを形成するために、4-16時間、細胞をインキュベートします。その後、細胞培養培地を吸引します。カルシウムとマグネシウムを含まない冷たい1×1mlのPBSで細胞を洗浄します。 </li><li>文化への氷冷PBS-2.5 mMのEDTA緩衝液の1ミリリットルを加え、氷上で10分間続けます。 </li><li>冷たい15mlチューブに移すその後、カットオフ、および、氷冷PBS-2.5 mMのEDTAの4ミリリットルとよく洗う先端で千μlのピペットチップを使用して、皿から細胞と細胞外マトリックス混合物を除去し、チューブに入れ。 </li><li> 1-4時間氷上にチューブを入れて、外のすべてのまで、チューブを数回転倒マトリックスが溶解されています。 </li><li> 0℃で、1620×gで10分間遠心</li><li>氷上の1.ml管に1ミリリットルの冷PBSで細胞ペレットを再懸濁します。 </li><li>遠心分離を再び0℃で3,000×gで5分間、その後、上清を廃棄。 </li><li> -80℃で細胞を保管してください。 </li></ol>

<ol>
	<li>Sharma, B., Nawandar, D. M., Nannuru, K. C., Varney, M. L., Singh, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+CXCR2+enhances+chemotherapeutic+response,+inhibits+mammary+tumor+growth,+angiogenesis,+and+lung+metastasis.">Targeting CXCR2 enhances chemotherapeutic response, inhibits mammary tumor growth, angiogenesis, and lung metastasis.</a> Mol Cancer Ther. 12 (5), 799-808 (2013).</li><li>Birbrair, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type-2+pericytes+participate+in+normal+and+tumoral+angiogenesis.">Type-2 pericytes participate in normal and tumoral angiogenesis.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 307 (1), 25-38 (2014).</li><li>Ferrara, N., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+as+a+therapeutic+target.">Angiogenesis as a therapeutic target.</a> Nature. 438 (7070), 967-974 (2005).</li><li>Speyer, C. L., Hachem, A. H., Assi, A. A., Johnson, J. S., DeVries, J. A., Gorski, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabotropic+glutamate+receptor-1+as+a+novel+target+for+the+antiangiogenic+treatment+of+breast+cancer.">Metabotropic glutamate receptor-1 as a novel target for the antiangiogenic treatment of breast cancer.</a> PLoS One. 9 (3), 88830 (2014).</li><li>Gu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Apurinic/Apyrimidinic+Endonuclease+siRNA+Inhibits+the+Angiogenesis+Induced+by+X-Ray+Irradiation+in+Lung+Cancer+Cells.">Human Apurinic/Apyrimidinic Endonuclease siRNA Inhibits the Angiogenesis Induced by X-Ray Irradiation in Lung Cancer Cells.</a> International Journal of Medical Sciences. 10 (7), 870-882 (2013).</li><li>Manjunathan, R., Ragunathan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+chorioallantoic+membrane+as+a+reliable+model+to+evaluate+osteosarcoma-an+experimental+approach+using+SaOS2+cell+line.">Chicken chorioallantoic membrane as a reliable model to evaluate osteosarcoma-an experimental approach using SaOS2 cell line.</a> Biol Proced Online. 17, 10 (2015).</li><li>Nidhyanandan, S., Boreddy, T. S., Chandrasekhar, K. B., Reddy, N. D., Kulkarni, N. M., Narayanan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphodiesterase+inhibitor,+pentoxifylline+enhances+anticancer+activity+of+histone+deacetylase+inhibitor,+MS-275+in+human+breast+cancer+in+vitro+and+in+vivo.">Phosphodiesterase inhibitor, pentoxifylline enhances anticancer activity of histone deacetylase inhibitor, MS-275 in human breast cancer in vitro and in vivo.</a> Eur J Pharmacol. 764, 508-519 (2015).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper+improves+the+anti-angiogenic+activity+of+disulfiram+through+the+EGFR/src/VEGF+pathway+in+gliomas.">Copper improves the anti-angiogenic activity of disulfiram through the EGFR/src/VEGF pathway in gliomas.</a> Cancer Lett. Aug. , (2015).</li><li>Park, H. J., Zhang, Y., Georgescu, S. P., Johnson, K. L., Kong, D., Galper, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+vein+endothelial+cells+and+human+dermal+microvascular+endothelial+cells+offer+new+insights+into+the+relationship+between+lipid+metabolism+and+angiogenesis.">Human umbilical vein endothelial cells and human dermal microvascular endothelial cells offer new insights into the relationship between lipid metabolism and angiogenesis.</a> Stem Cell Rev. 2 (2), 93-102 (2006).</li><li>de Wit, C., Fautz, C., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+quantitative+PCR+for+retrovirus-like+particle+quantification+in+CHO+cell+culture.">Real-time quantitative PCR for retrovirus-like particle quantification in CHO cell culture.</a> Biologicals. 28 (3), 137-148 (2000).</li><li>Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+human+endothelial+cells+for+derived+from+umbililcal+veins.+Identification+by+morphologic+and+immunologic+criteria.">Culture of human endothelial cells for derived from umbililcal veins. Identification by morphologic and immunologic criteria.</a> J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

このアッセイを行う場合には、特に断らない限り、常に氷上または4℃で細胞外マトリックスを維持するために不可欠です。細胞外マトリックスは、4℃以上加温する場合には重合し、そしてアッセイが台無しにされます。細胞外マトリックスと接触するもの（ 例えば、ピペットチップ、プレート）は、前述の理由で予備冷却されることを保証することも重要です。各ウェルに播種した細胞の数が重要である、あまりにも少数の細胞は、対照試料において予想されるウェブを与えることはありませんあまりにも多くの細胞が大きな細胞塊または単分子層を形成し、アッセイは有効になりません。このアッセイの成功のもう一つの重要な要因は、HUVECの細胞継代数です。継代数は常にそうしないと強固な管形成が発生しないことがあり、10以下となるようにして下さい。また、1は、使用される細胞培養培地の有効期限が切れていないか、または細胞が生存可能でないことを確認する必要があります。 Alternatively、1は、媒体とそのコンポーネントを分取し、有効期限後に一定期間保持するために-20℃で保存することができます。もちろん、有効期限前に媒体を使用することが好ましいです。 すべての手順と同様に、内皮細胞管形成アッセイを実施するにはいくつかの欠点があります。一つの大きな問題は、内皮細胞および支持マトリックスの異なるタイプがあるため、アッセイの結果は、細胞およびマトリックスの種類が使用されるに応じて大きく変化することができる、ということです。使用内皮細胞（HUVEC、HAECsまたはHMVECをは）彼らは不死化細胞と比較して変動を取得し、持っている高価であり、主要な細胞です。初代細胞は、使用のために制限された通路を有し、したがって長期の血管新生実験14には適していません。信頼性の高いデータの場合、1は常にアッセイのための同じタイプを使用する必要があります。 インビトロアッセイの他のように、管形成アッセイの結果は、詐欺であるべきです二次元の組織培養の制御された人工的な条件からの結果は、常に生体の複雑な生物系に反映されない可能性があるため、 生体内で確定。このタイプのアッセイは、唯一の内皮細胞のチューブ形成を実証するために使用することができ、セルを形成する他の非内皮チューブをテストするために使用されるべきではないことを覚えておくことも重要です。 このアッセイは、化合物の血管新生の可能性を定量化するためのかなり簡単かつ迅速な方法です。また、単独として、それは、化合物が実際に血管形成プロセスに影響を与えることによって、特定のメカニズムに関する情報が得られない、更なる実験のためのプラットフォームを形成します。しかし、様々な細胞外マトリックスの使用は、さらに一般的に使用されていない研究課題のためのフレームワークを作成する方法の例です。の成分を標的とする特異的阻害剤を含む化合物の具体的な生化学的機構を研究するアプローチがあります血管新生経路。別のアプローチは、内皮細胞からRNAを抽出し、アッセイにおいて観察された増殖挙動を引き起こす可能性がある遺伝子発現の変化を分析するためにRT-PCR（リアルタイムPCR）12を使用することができます。この方法の将来のアプリケーションは、血管新生経路の具体的な手順のためのノックダウンアッセイを作成するためのHUVECをトランスフェクト含まれます。リンパ管経路を研究するためにこのアプローチを適用する可能性があります。細胞外マトリックス成分を変更することによって、癌において血管新生を支持マトリックスおよび細胞プロセスの相互作用をさらに解明することができます。これらの特定の条件下で内皮細胞からのRNAおよびタンパク質の抽出は、データを画像化するために対応する追加の定量化データを提供します。

生存に必要な栄養素を得るために、悪性腫瘍は、患者の血流へのアクセスを必要とします。そのアクセスを得るために、腫瘍細胞は、このように、血管新生2として知られている正常な生理学的プロセスをハイジャック、腫瘍への新しい血管の成長を刺激する化学的信号を放出します。これは、転移（ すなわち、他の臓器への癌の広がりが）発生する可能性があること、血管新生を介して作成血管を通してです。血管形成のプロセスは、癌のような多種多様の進行に非常に重要であるので、抗癌治療の研究3で魅力的な標的です。 血管形成を定量するために使用される一つの方法は、細胞外マトリックス上に配置されたときに管を形成するための内皮前駆細胞の能力を測定することです。これらの管の形成は、環境条件（ 例えば、存在または指定された共同の欠如をテストし、血管新生において重要な初期段階であるため、mpound）を刺激または阻害することができる管形成は、血管新生を阻害するために標的とすることができる具体的な手順についての洞察を提供します。内皮細胞のチューブ形成アッセイは、チューブを形成する細胞の能力を測定する最も広く使用されている4 のin vitro方法の一つです。これは、比較的少数の部品と短い培養期間5を必要とする 、シンプルなアッセイです。おそらく最も重要な、しかし、このタイプのアッセイから得られたデータは定量化可能であるということです。 管形成アッセイの使用の例は、成長因子低減（GFR）は、細胞外マトリックス対細胞外マトリックス上で成長した血管内皮細胞の管の開発を比較することを含みます。ラミニン、IV型コラーゲン、成長因子およびプロテオグリカンは、細胞外マトリックスは、肉腫細胞、およびその主要な構成要素から単離された基底膜様材料です。いくつかの化合物は、内管を形成する細胞の能力に異なる効果を有します減少した成長因子および減少ヘパラン硫酸プロテオグリカン（HSPGは）ある環境。 HSPGにはかなりGFR細胞外マトリックスに低減され、細胞外マトリックスの成分です。一例として、仮説は、このようなのHSPGが豊富な管形成を中断するためにかなり弱い能力を有する遮断CXCR2受容体を、SB225002、血管新生阻害剤は、次いで、細胞外マトリックス及びGFR外マトリックスにおける管形成活性の比較であることがある場合HSPGの制御を介した血管新生阻害の可能性を探る重要。 一般的に、血管新生に対する化合物の効果を決定するために使用される他のアッセイは、 インビボの方法です 。この顕著な例は、鶏の卵を使用して、ニワトリ漿尿膜（CAM）アッセイ6であり、in vivoでのマトリゲルは、マウスを用いた血管新生アッセイ7を差し込みます。 インビボ方法は、トンで血管新生を測定しながら、HREE寸法およびインビトロ管形成アッセイに比べ、人体の多くの代表的なものであるが、それらは、かなり多くの時間を必要とする欠陥を被るとかなり実行するのが困難です。 CAMアッセイおよび細胞外プラグアッセイの両方が比較して、管形成アッセイは一日で行うことができますが、実行するには、少なくとも8週取ると、それは動物の使用を必要としません。 なお、本報告書で使用された内皮細胞はヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）であることに留意することが重要です。これらの細胞は、血管芽及び血管の成長に重要な役割を果たし、そしてインビトロおよびインビボ実験9の両方において抗血管形成活性を評価するために使用される癌で内皮細胞に十分に類似しています。このような一次微小血管内皮細胞などの他の細胞を使用してもよいです。 より低い有する以外ことに留意することも重要です正常な細胞外マトリックスと比較した場合のHSPG、GFR外マトリックスのレベルは、多くの成分のレベルが低下しています。これには、これらに限定されない：EGF、IGF-1、PDGFおよびTGF-β。血管新生に関連して、これらの化合物の重要性を研究するものを行う実験は、GFR外マトリックスを使用してに興味があるかもしれません。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EGM-2 complete growth medium (EGM-2 bullet kit CC-3162 )</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9525043</td>
			<td>HUVEC complete growth medium: EGM-2 base medium mixed with BBE (Bovine Brain Extract), hEGF (Human Epidermal Growth Factor), Hydrocortisone, GA-1000 (Gentamicin, Amphotericin-B), 2% FBS (Fetal Bovine Serum), VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor), hFGF-&#946; (Human Fibroblast Growth Factor Beta), R3-IGF-1 (Long R Insulin-like Growth Factor One), Ascorbic Acid, and Heparin.&#160; Aliquot the medium and its components and store them at -20 oC, warm&#160; in 37 oC&#160; before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATRIGEL MATRIX 10ML Growth Factor Reduced (GFR); 10mL; LDEV-Free</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>CB-40230&#160;</td>
			<td>Growth Factor Reduced (GFR) extracellular matrix, keep in&#160;&#160; -20 oC , warm in 4 &#176;C&#160; before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATRIGEL MATRIX 10ML ; 10mL; LDEV-Free</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>CB-40234&#160;</td>
			<td>extracellular matrix, keep in&#160;&#160; -20 oC, warm in 4 &#176;C&#160; before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB225002</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>559405</td>
			<td>CXCR2 inhibitor, keep in&#160;&#160; -20 oC, warm in room temperature&#160; before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary human umbilical vein endothelial cells (HUVEC)&#160;</td>
			<td>ScienCell Research Laboratories&#160;</td>
			<td>8000</td>
			<td>culture it according reference&#160; 10.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.05%-EDTA phenol red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25300-054</td>
			<td>keep in 4 oC, warm&#160; in 37 oC&#160; before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon ECLIPSE Ti</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Inverted Research Microscope.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements AR 4.20.02 64 bit</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Inverted Research Microscope software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graph-pad Prism 5</td>
			<td>GraphPad Software, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>scientific 2D graphing and&#160;statistics software, to calculate IC50.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

strategic endothelial cell tube formation assay: comparing extracellular matrix and growth factor reduced extracellular matrix

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by hijacking the process of angiogenesis, in which new blood vessels are formed from existing blood vessels. The CXCR2 (chemokine (C-X-C motif) receptor 2) receptor is a transmembrane G-protein-linked molecule found in many cells that is closely associated with angiogenesis1. Specific blockade of the CXCR2 receptor inhibits angiogenesis, as measured by several assays such as the endothelial tube formation assay. The tube formation assay is useful for studying angiogenesis because it is an excellent method of studying the effects that any given compound or environmental condition may have on angiogenesis. It is a simple and quick in vitro assay that generates quantifiable data and requires relatively few components. Unlike in vivo assays, it does not require animals and can be carried out in less than two days. This protocol describes a variation of the extracellular matrix supporting endothelial tube formation assay, which tests the CXCR2 receptor.

かなりの、健康な内皮チューブ形成を容易に顕微鏡画像で阻害管形成に対比することができます。健康管形成は、毛細血管様構造（ 図1）の組織化されたウェブとして表示されます。比較して、阻害管形成は散乱細胞（ 図2）として現れます。管形成アッセイデータは、キャピラリーチューブ（ 表1）の総管長を測定することによって定量化されます。総管長以外に、分岐点の平均チューブ長さ、チューブの合計数、又は数を測定することができます。構造化管形成は、散乱を阻害し、チューブの成長よりも大きい正味管の長さが得られます。 図3においては、用量反応曲線は、GFR外マトリックスおよびCXCR2の阻害剤SB225002のHUVECの実験条件下でIC 50の計算を可能にします。 細胞外マトリックス、成長因子低減（GFR）は、細胞外マトリックスのUBE形成 T 図1 内皮 。2つの画像は、細胞外マトリックス（A）及びGFR外マトリックス（B）に成功した管形成を示します。チューブの相互接続されたネットワークは、明らかに、チューブの成長はこれらのHUVECで健康であることを示しています。スケールバー=10μmである。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54074/54074fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/54074/54074fig2.jpg" /> 上の因子減少（GFR）CXCR2阻害剤SB225002（5.6μM）による細胞外マトリックス外と成長。管形成の 図2. 阻害 2つの画像は、チューブを表示します細胞外マトリックス（A）及びGFR外マトリックス（B）上のCXCR2阻害剤SB225002（5.6μM）によって阻害された形成。この画像で見られるHUVEC細胞の単離された塊は、細胞が相互に接続するために必要なチューブを形成することができなかったことを示します。スケールバー=10μmである。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54074/54074fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/54074/54074fig3.jpg" /> 成長因子低減（GFR）は、細胞外マトリックスの 図3 の用量応答曲線は、X軸は管の長さを示し、Y軸は、CXCR2の阻害剤の濃度を示します。用量応答曲線は、GFR外マトリックスのCXCR2阻害剤に対するHUVEC応答は用量依存性であることを示しています。 IC 50（半最大阻害剤Y濃度）は、例えば、ソフトウェア13を使用し、細胞外マトリックスの用量応答曲線と比較することができることにより算出しました。 IC 50は、50％の応答を低下させる阻害剤の濃度です。エラーバーは標準偏差を表します。 <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> （GFR）は、細胞外マトリックスおよび阻害剤 （4がそれぞれを複製する） 成長因子低減 </td><td> 総チューブの長さの平均（ピクセル）（1 ピクセル= 0.34ミクロン） </td><td> 標準偏差 </td><td> P値 </td></tr><tr><td> GFR細胞外マトリックス制御</td><td> 2447 </td><td> 168.174 </td><td></td></tr><tr><td> GFR細胞外マトリックス+ 0.56μMのSB225002 </td><td> 1422.5 </td><td> 185.4218 </td><td> 0.000395 </td></tr><tr><td>GFR細胞外マトリックス+ 1.1μMのSB225002 </td><td> 1004 </td><td> 126.1784 </td><td> 2.14×10 -5 </td></tr><tr><td> GFR細胞外マトリックス+ 5.6μMのSB225002 </td><td> 519.25 </td><td> 129.6368 </td><td> 4.19×10 -6 </td></tr><tr><td> GFR細胞外マトリックス+ 11μMSB225002 </td><td> 393.75 </td><td> 212.6857 </td><td> 1.21×10 -5 </td></tr></tbody></table> 表1.様々な条件の下で成長因子減少（GFR）は、細胞外マトリックス上の総管の長さを定量化する。CXCR2阻害剤の濃度を変えGFR細胞外マトリックス上で成長したサンプルで記録された合計チューブの長さを使用して、テーブルの一部。データは、CXCR2の阻害剤は、管形成を阻害しないことを示しています。 、四複製、標準偏差の平均値、及びP値と関連した値が含まれます。表示するピクセル単位で測定エクスポートされたデータ。 IC 50は、統計ソフトウェア13を用いて算出することができます。 （1ピクセル= 0.34ミクロン）

Watch this Scientific Journal Video about Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix at JoVE.com

Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

This manuscript describes a tube formation assay to quantify the effects of a given compound or condition on angiogenesis by using endothelial cell tube formation in a controlled environment.

戦略的な内皮細胞管形成アッセイ：細胞外マトリックスおよび成長因子の比較は、細胞外マトリックスを削減しました

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by ...

strategic-endothelial-cell-tube-formation-assay-comparing

Research

JoVE Journal

Medicine

13.3K ビュー.  Wayne State University School of Medicine. This manuscript describes a tube formation assay to quantify the effects of a given compound or condition on angiogenesis by using endothelial cell tube formation in a controlled environment.

ビデオ: Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

Isolation of Cardiomyocyte Nuclei from Post-mortem Tissue

Identification of cardiomyocyte nuclei has been challenging in tissue sections as most strategies rely only on cytoplasmic marker proteins1. Rare events in cardiac myocytes such as proliferation and apoptosis require an accurate identification of cardiac myocyte nuclei to analyze cellular renewal in homeostasis and in pathological conditions2. Here, we provide a method to isolate cardiomyocyte nuclei from post mortem tissue by density sedimentation and immunolabeling with antibodies against pericentriolar material 1 (PCM-1) and subsequent flow cytometry sorting. This strategy allows a high throughput analysis and isolation with the advantage of working equally well on fresh tissue and frozen archival material. This makes it possible to study material already collected in biobanks. This technique is applicable and tested in a wide range of species and suitable for multiple downstream applications such as carbon-14 dating3, cell-cycle analysis4, visualization of thymidine analogues (e.g. BrdU and IdU)4, transcriptome and epigenetic analysis.

Cardiac nuclei are isolated via density sedimentation and immunolabeled with antibodies against pericentriolar material 1 (PCM-1) to identify and sort cardiomyocyte nuclei by flow cytometry.

事後組織から心筋細胞核の分離

Identification of cardiomyocyte nuclei has been challenging in tissue sections as most strategies rely only on cytoplasmic marker proteins1. Rare events ...

医学

Matrix-assisted Autologous Chondrocyte Transplantation for Remodeling and Repair of Chondral Defects in a Rabbit Model

Articular cartilage defects are considered a major health problem because articular cartilage has a limited capacity for self-regeneration 1. Untreated cartilage lesions lead to ongoing pain, negatively affect the quality of life and predispose for osteoarthritis. During the last decades, several surgical techniques have been developed to treat such lesions. However, until now it was not possible to achieve a full repair in terms of covering the defect with hyaline articular cartilage or of providing satisfactory long-term recovery 2-4. Therefore, articular cartilage injuries remain a prime target for regenerative techniques such as Tissue Engineering. In contrast to other surgical techniques, which often lead to the formation of fibrous or fibrocartilaginous tissue, Tissue Engineering aims at fully restoring the complex structure and properties of the original articular cartilage by using the chondrogenic potential of transplanted cells. Recent developments opened up promising possibilities for regenerative cartilage therapies.
The first cell based approach for the treatment of full-thickness cartilage or osteochondral lesions was performed in 1994 by Lars Peterson and Mats Brittberg who pioneered clinical autologous chondrocyte implantation (ACI) 5. Today, the technique is clinically well-established for the treatment of large hyaline cartilage defects of the knee, maintaining good clinical results even 10 to 20 years after implantation 6. In recent years, the implantation of autologous chondrocytes underwent a rapid progression. The use of an artificial three-dimensional collagen-matrix on which cells are subsequently replanted became more and more popular 7-9.
MACT comprises of two surgical procedures: First, in order to collect chondrocytes, a cartilage biopsy needs to be performed from a non weight-bearing cartilage area of the knee joint. Then, chondrocytes are being extracted, purified and expanded to a sufficient cell number in vitro. Chondrocytes are then seeded onto a three-dimensional matrix and can subsequently be re-implanted. When preparing a tissue-engineered implant, proliferation rate and differentiation capacity are crucial for a successful tissue regeneration 10. The use of a three-dimensional matrix as a cell carrier is thought to support these cellular characteristics 11.
The following protocol will summarize and demonstrate a technique for the isolation of chondrocytes from cartilage biopsies, their proliferation in vitro and their seeding onto a 3D-matrix (Chondro-Gide, Geistlich Biomaterials, Wollhusen, Switzerland). Finally, the implantation of the cell-matrix-constructs into artificially created chondral defects of a rabbit's knee joint will be described. This technique can be used as an experimental setting for further experiments of cartilage repair.

An experimental technique for the treatment of chondral defects in the rabbit's knee joint is described. The implantation of autologous chondrocytes seeded on a matrix is a well-accepted method for the remodeling and repair of articular cartilage lesions providing satisfying long-term results. Matrix-assisted autologous chondrocyte transplantation (MACT) offers a standardized and clinically established implantation method.

ウサギモデルにおける軟骨欠陥の改造と修理のためのマトリックス支援自家軟骨細胞移植

Articular cartilage defects are considered a major health problem because articular cartilage has a limited capacity for self-regeneration 1. Untreated ...

Focus Formation: A Cell-based Assay to Determine the Oncogenic Potential of a Gene

Malignant transformation of cells is typically associated with increased proliferation, loss of contact inhibition, acquisition of anchorage-independent growth potential, and the ability to form tumors in experimental animals1. In NIH 3T3 cells, the Ras signal transduction pathway is known to trigger many of these events, what is known as Ras transformation. The introduction of an overexpressed gene in NIH 3T3 cells may promote morphological transformation and loss of contact inhibition, which can help determine the oncogenic potential of that gene of interest. An assay that provides a straightforward method to assess one aspect of the transforming potential of an oncogene is the Focus Formation Assay (FFA)2. When NIH 3T3 cells divide normally in culture, they do so until they reach a confluent monolayer. However, in the presence of an overexpressed oncogene, these cells can begin to grow in dense, multilayered foci1 that can be visualized and quantified by crystal violet or Hema 3 staining. In this article we describe the FFA protocol with retroviral transduction of the gene of interest into NIH 3T3 cells, and how to quantify the number of foci through staining. Retroviral transduction offers a more efficient method of gene delivery than transfection, and the use of an ecotropic murine retrovirus provides a biosafety control when working with potential human oncogenes.

The Focus Formation Assay provides a straightforward method to assess the transforming potential of a candidate oncogene.

フォーカス形成：細胞ベースのアッセイ遺伝子の発癌性を決定するために、

Malignant transformation of cells is typically associated with increased proliferation, loss of contact inhibition, acquisition of anchorage-independent ...

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from cirrhosis to cardiovascular diseases). There is no effective treatment and the in vitro tools available do not mimic the in vivo situation rendering the progress of the out of control wound healing process still enigmatic.
To date, 2D and 3D cultures of fibroblasts derived from DD patients are the main experimental models available. Primary cell cultures have many limitations; the fibroblasts derived from DD are altered by the culture conditions, lack cellular context and interactions, which are crucial for the development of fibrosis and weakly represent the derived tissue. Real-time PCR analysis of fibroblasts derived from control and DD samples show that little difference is detectable. 3D cultures of fibroblasts include addition of extracellular matrix that alters the native conditions of these cells. 
As a way to characterize the fibrotic, proliferative properties of these resection specimens we have developed a 3D culture system, using intact human resections of the nodule part of the cord. The system is based on transwell plates with an attached nitrocellulose membrane that allows contact of the tissue with the medium but not with the plastic, thus, preventing the alteration of the tissue. No collagen gel or other extracellular matrix protein substrate is required. The tissue resection specimens maintain their viability and proliferative properties for 7 days. This is the first &#8220;organ&#8221; culture system that allows human resection specimens from DD patients to be grown ex vivo and functionally tested, recapitulating the in vivo situation.

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Dupuytren&#8217;s disease (DD) is a fibroproliferative disease of the palm of the hand. Here, we present a protocol to culture resection specimens from DD in a three-dimensional (3D) culture system. Such short-term culture system allows preservation of the 3D structure and molecular properties of the fibrotic tissue.

人間デュピュイトラン<em&gt;エクスビボ</em筋線維芽細胞と細胞外マトリックス相互作用の研究のために&gt;文化

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from ...

Mammosphere Formation Assay from Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines

Similar to healthy tissues, many blood and solid malignancies are now thought to be organised hierarchically, with a subset of stem-like cancer cells that self-renew while giving rise to more differentiated progeny. Understanding and targeting these cancer stem cells in breast cancer, which may possess enhanced chemo- and radio-resistance compared to the non-stem tumor bulk, has become an important research area. Markers including CD44, CD24, and ALDH activity can be assessed using fluorescence activated cell sorting (FACS) to prospectively isolate cells that display enhanced tumorigenicity when implanted into immunocompromised mice: the mammosphere assay has also become widely used for its ability to retrospectively identify sphere-forming cells that develop from single stem cell-like clones. Here we outline approaches for the appropriate culturing of mammospheres from cell lines or primary patient samples, their passaging, and calculations to estimate sphere forming efficiency (SFE). First we discuss key considerations and pitfalls in the appropriate planning and interpretation of mammosphere experiments.

Floating mammosphere assays can investigate the subset of stem-like breast cancer cells that survive in suspension conditions and show enhanced tumorigenesis when implanted into mice. This protocol provides a convenient in vitro measure of sphere-forming ability, a proxy for in vivo tumorigenesis, while facilitating analysis of the stem-associated transcriptional landscape.

ヒト乳癌組織および細胞株からマンモスフェア形成アッセイ

Similar to healthy tissues, many blood and solid malignancies are now thought to be organised hierarchically, with a subset of stem-like cancer cells that ...

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest signaling pathways shown to be associated with ciliary function was the non-canonical Wnt signaling pathway, also referred to as planar cell polarity (PCP) signaling. One of the best places in which to study the effects of planar cell polarity (PCP) signaling during vertebrate development is the mammalian cochlea. PCP signaling disruption in the mouse cochlea disrupts cochlear outgrowth, cellular patterning and hair cell orientation, all of which are affected by cilia dysfunction. The goal of this protocol is to describe the analysis of PCP signaling in the developing mammalian cochlea via phenotypic analysis, immunohistochemistry and scanning electron microscopy. Defects in convergence and extension are manifested as a shortening of the cochlear duct and/or changes in cellular patterning, which can be quantified following dissection from developing mouse mutants. Changes in stereociliary bundle orientation and kinocilia length or positioning can be observed and quantitated using either immunofluorescence or scanning electron microscopy (SEM). A deeper insight into the role of ciliary proteins in cellular signaling pathways and other biological phenomena is crucial for our understanding of cellular and developmental biology, as well as for the development of targeted treatment strategies.

Primary cilia influence various signaling pathways. The mammalian cochlea is ideal for examining planar cell polarity (PCP) signaling. Cilia dysfunction affects cochlear outgrowth, cellular patterning and hair cell orientation, readouts of PCP. Our goal is to analyze PCP signaling in mouse cochlea via phenotypic analysis, immunohistochemistry and scanning electron microscopy.

繊毛病マウス変異蝸牛における平面セル・-極性表現型の評価

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

Three-Dimensional Culture Assay to Explore Cancer Cell Invasiveness and Satellite Tumor Formation

Mammalian cell culture in monolayers is widely used to study various physiological and molecular processes. However, this approach to study growing cells often generates unwanted artifacts. Therefore, cell culture in a three-dimensional (3D) environment, often using extracellular matrix components, emerged as an interesting alternative due to its close similarity to the native in vivo tissue or organ. We developed a 3D cell culture system using two compartments, namely (i) a central compartment containing cancer cells embedded in a collagen gel acting as a pseudo-primary macrospherical tumor and (ii) a peripheral cell-free compartment made of a fibrin gel, i.e. an extracellular matrix component different from that used in the center, in which cancer cells can migrate (invasion front) and/or form microspherical tumors representing secondary or satellite tumors. The formation of satellite tumors in the peripheral compartment is remarkably correlated to the known aggressiveness or metastatic origin of the native tumor cells, which makes this 3D culture system unique. This cell culture approach might be considered to assess cancer cell invasiveness and motility, cell-extracellular matrix interactions and as a method to evaluate anti-cancer drug properties.

Cancer cells are embedded in a collagen gel and then sandwiched in an acellular fibrin gel to generate a 3D culture system in which the invasiveness and formation of satellite tumors may be monitored.

癌細胞の浸潤や衛星腫瘍形成を探検するための三次元培養アッセイ

Mammalian cell culture in monolayers is widely used to study various physiological and molecular processes. However, this approach to study growing cells ...

Investigating von Willebrand Factor Pathophysiology Using a Flow Chamber Model of von Willebrand Factor-platelet String Formation

Von Willebrand factor (VWF) is a multimeric glycoprotein coagulation factor that mediates platelet adhesion and aggregation at sites of endothelial damage and that carries factor VIII in the circulation. VWF is synthesized by endothelial cells and is either released constitutively into the plasma or is stored in specialized organelles, called Weibel-Palade bodies (WPBs), for on-demand release in response to hemostatic challenge. Procoagulant and proinflammatory stimuli can rapidly induce WPB exocytosis and VWF release. The majority of VWF released by endothelial cells circulates in the plasma; however, a proportion of VWF is anchored to the endothelial cell surface. Under conditions of physiological shear, endothelial-anchored VWF can bind to platelets, forming a VWF-platelet string that may represent the nidus of thrombus formation. A flow chamber system can be used to visually observe the release of VWF from endothelial cells and the subsequent platelet capture in a manner that is reproducible and relevant to the pathophysiology of VWF-mediated thrombus formation. Using this methodology, endothelial cells are cultured in a flow chamber and are subsequently stimulated with secretagogues to induce WPB exocytosis. Washed platelets are then perfused over the activated endothelium. The platelets are activated and subsequently bind to elongated VWF strings in the direction of fluid flow. Using extracellular histones as a procoagulant and proinflammatory stimulus, we observed increased VWF-platelet string formation on histone-treated endothelial cells compared to untreated endothelial cells. This protocol describes a quantitative, visual, and real-time assessment of the activation of VWF-platelet interactions in models of thrombosis and hemostasis.

In this paper, we describe a method to assess endothelial von Willebrand factor release and the subsequent platelet capture under fluid shear stress in response to inflammatory stimuli using an in vitro flow chamber system.

調査フォン Willebrand 因子病態・ フォン ・ フロー チャンバー モデルを用いた Willebrand 因子-血小板文字列生成

Von Willebrand factor (VWF) is a multimeric glycoprotein coagulation factor that mediates platelet adhesion and aggregation at sites of endothelial damage ...

Bio-energetics Investigation of Candida albicans Using Real-time Extracellular Flux Analysis

Mitochondria are essential organelles for the cellular metabolism and survival. A variety of key events take place in mitochondria, such as cellular respiration, oxidative metabolism, signal transduction, and apoptosis. Consequently, mitochondrial dysfunction is reported to play an important role in the antifungal drug tolerance and virulence of pathogenic fungi. Recent data have also led to the recognition of the importance of the mitochondria as an important contributor to fungal pathogenesis. Despite the importance of the mitochondria in fungal biology, standardized methods to understand its function are poorly developed. Here, we present a procedure to study the basal oxygen consumption rate (OCR), a measure of mitochondrial respiration, and extracellular acidification rates (ECAR), a measure of glycolytic function in C. albicans strains. The method described herein can be applied to any Candidaspp. strains without the need to purify mitochondria from the intact fungal cells. Furthermore, this protocol can also be customized to screen for inhibitors of mitochondrial function in C. albicans strains.

Bio-energetics Investigation of Candida albicans Using Real-time Extracellular Flux Analysis

Here, we present a stepwise protocol to investigate the mitochondrial respiration and glycolytic function in Candida Albicans using an extra flux analyzer.

カンジダを使用してリアルタイム細胞フラックス解析のバイオ エネルギー調査

Mitochondria are essential organelles for the cellular metabolism and survival. A variety of key events take place in mitochondria, such as cellular ...

Immunofluorescence Labelling of Human and Murine Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Tissue

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They mature in the bone marrow and are released into the peripheral blood, where they circulate for about 6&#8722;8 h; however, in tissue, they can survive for days. By diapedesis through the endothelium, they leave the blood stream, enter tissues, and migrate towards the site of an infection following chemotactic gradients.&#160;Neutrophils can combat invading microorganisms by phagocytosis,&#160;degranulation, and generation of neutrophil extracellular traps (NETs). This protocol will help to detect NETs in paraffin-embedded tissue. NETs are the result of a process called NETosis, which leads to the release of nuclear, granular, and cytoplasmic components either from living (vital NETosis) or dying (suicidal NETosis) neutrophils. In vitro, NETs form cloud-like structures, which occupy a space several times larger than that of the cells from which they descended. The backbone of NETs is chromatin, to which a selection of proteins and peptides originating from granules and cytoplasm are bound. Thereby, a high local concentration of toxic compounds is maintained so that NETs can capture and inactivate a variety of pathogens including bacteria, fungi, viruses, and parasites, while diffusion of the highly active NET components leading to damage in neighboring tissue is limited. Nevertheless, in recent years it has become apparent that NETs, if generated in abundance or cleared insufficiently, do have pathological potential ranging from autoimmune diseases to cancer. Thus, detection of NETs in tissue samples may have diagnostic significance, and the detection of NETs in diseased tissue can influence the treatment of patients. Since paraffin-embedded tissue samples are the standard specimen used for pathological analysis, it was sought to establish a protocol for fluorescent staining of NET components in paraffin-embedded tissue using commercially available antibodies.

Neutrophil extracellular traps (NETs) are three-dimensional structures generated by stimulated neutrophil granulocytes. It has become clear in recent years that NETs are involved in a wide variety of diseases. Detection of NETs in tissue may have diagnostic relevance, so standardized protocols for labelling NET components are required.

パラフィン埋め込み組織におけるヒトおよびマウス好中球外細胞トラップの免疫蛍光標識

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They ...

戦略的な内皮細胞管形成アッセイ：細胞外マトリックスおよび成長因子の比較は、細胞外マトリックスを削減しました

要約

さらに動画を探す

この動画の章

事後組織から心筋細胞核の分離

ウサギモデルにおける軟骨欠陥の改造と修理のためのマトリックス支援自家軟骨細胞移植

フォーカス形成：細胞ベースのアッセイ遺伝子の発癌性を決定するために、

人間デュピュイトラン

ヒト乳癌組織および細胞株からマンモスフェア形成アッセイ

繊毛病マウス変異蝸牛における平面セル・-極性表現型の評価

癌細胞の浸潤や衛星腫瘍形成を探検するための三次元培養アッセイ

調査フォン Willebrand 因子病態・フォン・フローチャンバーモデルを用いた Willebrand 因子-血小板文字列生成

カンジダを使用してリアルタイム細胞フラックス解析のバイオエネルギー調査

パラフィン埋め込み組織におけるヒトおよびマウス好中球外細胞トラップの免疫蛍光標識

戦略的な内皮細胞管形成アッセイ：細胞外マトリックスおよび成長因子の比較は、細胞外マトリックスを削減しました

要約

さらに動画を探す

この動画の章

事後組織から心筋細胞核の分離

ウサギモデルにおける軟骨欠陥の改造と修理のためのマトリックス支援自家軟骨細胞移植

フォーカス形成：細胞ベースのアッセイ遺伝子の発癌性を決定するために、

人間デュピュイトラン

ヒト乳癌組織および細胞株からマンモスフェア形成アッセイ

繊毛病マウス変異蝸牛における平面セル・-極性表現型の評価

癌細胞の浸潤や衛星腫瘍形成を探検するための三次元培養アッセイ

調査フォン Willebrand 因子病態・ フォン ・ フロー チャンバー モデルを用いた Willebrand 因子-血小板文字列生成

カンジダを使用してリアルタイム細胞フラックス解析のバイオ エネルギー調査

パラフィン埋め込み組織におけるヒトおよびマウス好中球外細胞トラップの免疫蛍光標識

調査フォン Willebrand 因子病態・フォン・フローチャンバーモデルを用いた Willebrand 因子-血小板文字列生成

カンジダを使用してリアルタイム細胞フラックス解析のバイオエネルギー調査