我々 は開発の eNOSTag GFP ライン、Joost 兼 Ren の動物の仕事と彼のテクニカル サポートおよび彼らの助けのための動物の介護の寄付なし・ ヴァン ・ Haperen、リニ ・ デ ・ Crom を感謝したいです。顕微鏡施設エラスムス光イメージング センターの一部であるし、我々 は彼らのサービスの OIC のスタッフに感謝したいと思います。この研究はオランダのがん学会、「Vereniging Trustfonds」エラスムス大学ロッテルダム、"スティヒティング エラスムス Heelkundig Kankeronderzoek"から DDHK 2000-2224 の助成金によって支えられた、我々 は彼らの寛大な寄付のための委員会メンバーに感謝。

<ol>
	<li>Massoud, T. F., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+in+living+subjects:+seeing+fundamental+biological+processes+in+a+new+light.">Molecular imaging in living subjects: seeing fundamental biological processes in a new light.</a> Genes Dev. 17, 545-580 (2003).</li><li>Ellenbroek, S. I., van Rheenen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+hallmarks+of+cancer+in+living+mice.">Imaging hallmarks of cancer in living mice.</a> Nat Rev Cancer. 14, 406-418 (2014).</li><li>Brown, E., Munn, L. L., Fukumura, D., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+tumors.">In vivo imaging of tumors.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2010 (7), (2010).</li><li>Palmer, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+optical+molecular+imaging+and+analysis+in+mice+using+dorsal+window+chamber+models+applied+to+hypoxia,+vasculature+and+fluorescent+reporters.">In vivo optical molecular imaging and analysis in mice using dorsal window chamber models applied to hypoxia, vasculature and fluorescent reporters.</a> Nat. Protocols. 6, 1355-1366 (2011).</li><li>Seynhaeve, A. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+transport+pathways+in+tumor+vessels:+role+of+tumor+type+and+microenvironment.">Regulation of transport pathways in tumor vessels: role of tumor type and microenvironment.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 4607-4612 (1998).</li><li>Minchinton, A. I., Tannock, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+penetration+in+solid+tumours.">Drug penetration in solid tumours.</a> Nat Rev Cancer. 6, 583-592 (2006).</li><li>Koning, G. A., Eggermont, A. M., Lindner, L. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+and+manipulation+of+the+tumor+cell-stromal+interface:+&amp;#34;ways+to+make+chemotherapy+effective&amp;#34;.">TNF and manipulation of the tumor cell-stromal interface: &amp;#34;ways to make chemotherapy effective&amp;#34;.</a> Front Biosci. 13, 3034-3045 (2008).</li><li>Brouckaert, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor-alpha+augmented+tumor+response+in+B16BL6+melanoma-bearing+mice+treated+with+stealth+liposomal+doxorubicin+(Doxil)+correlates+with+altered+Doxil+pharmacokinetics.">Tumor necrosis factor-alpha augmented tumor response in B16BL6 melanoma-bearing mice treated with stealth liposomal doxorubicin (Doxil) correlates with altered Doxil pharmacokinetics.</a> Int J Cancer. 109, 442-448 (2004).</li><li>Hoving, S., Seynhaeve, A. L., van Tiel, S. T., Eggermont, A. M., ten Hagen, L. 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A., Egeblad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+drug+responses+in+the+tumor+microenvironment+in+mouse+models+of+breast+cancer.">Live imaging of drug responses in the tumor microenvironment in mouse models of breast cancer.</a> J Vis Exp. , e50088 (2013).</li><li>van Vliet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MR+angiography+of+tumor-related+vasculature:+from+the+clinic+to+the+micro-environment.">MR angiography of tumor-related vasculature: from the clinic to the micro-environment.</a> Radiographics. 25, S85-S97 (2005).</li><li>Dicheva, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+thermosensitive+liposomes:+a+novel+dual+targeted+heat-triggered+drug+delivery+approach+for+endothelial+and+tumor+cells.">Cationic thermosensitive liposomes: a novel dual targeted heat-triggered drug delivery approach for endothelial and tumor cells.</a> Nano Lett. 13, 2324-2331 (2013).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+intratumoral+nanoparticle+extravasation+and+penetration+by+mild+hyperthermia.">Improved intratumoral nanoparticle extravasation and penetration by mild hyperthermia.</a> J Control Release. 167, 130-137 (2013).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

腫瘍治療効果と同様、腫瘍と腫瘍血管の開発は非常にダイナミックなプロセスであると生体評価は時間と空間依存的にこれらのプロセスの正しい評価をするための洗練されたツールです。生細胞マーカー、トランスジェニック動物の作成と画像診断法の進歩の増加する供給、生体イメージングは、ますます人気になっています。組織がまだ日常的に使用されているし細胞や構造を識別するために使用できるマーカーの数多く、ティッシュが不利な点ダイナミックなプロセスを調査するとき。組織の郭清が必要、静的な情報のみを提供します。固定組織の品質に影響を与える細胞間相互作用を損なうスライスします。また、ダイナミックなプロセスを調査するとき異なっているとしばしば推定時点で組織郭清動物の大規模な量が必要です。生体イメージングと XYZ 空間次元や時間の余分な次元を作る別の選手の適切な位置決め可能な空間と時間、同じ動物で評価できます。したがって、最適な時間ポイントが逃されない、実験ごとに使用される動物の数を大幅に削減します。第二に、組織抽出を最適化するために生体の評価と確立期間を推定できます。第三に、容器の成長の目的の段階を intravitally 識別して全体マウント組織としてステンド グラスします。
本稿に記載されている生体の設計は、皮下脂肪の溜まりモデルと専用の多光子共焦点顕微鏡背血管内皮細胞、変更された蛍光ラベルを表現するトランスジェニック動物の組み合わせを使用します。
血管内皮細胞は、血管新生中、ステージ21,22の数を通過し、腫瘍のこれらの段階が同時に見る多くの場合ことができます。ENOSTag GFP マウスの線を使用して、個々 の内皮細胞は続くことができるとも糸状のダイナミクスをたどることができます。したがって、intravitally 容器開発を勉強する良いモデルです。既に現在の固有のラベルによって注射蛍光剤は、管腔形成、血流、血管外漏出、および血のクリアランスを評価するために使えます。マウスは 5 h まで継続的に視覚化されます。動物の長期的な評価が可能な動物の麻酔に関するいくつかの注意事項が取られるときで前述されている23。この研究は癌に焦点を当てて、腫瘍組織や細胞が移植されました。しかし、我々 はまた中足骨および萌芽期の肺を試しました。ただし、調査の下で組織の成長速度は制限、肌が再生するを開始する数週間後、成長の遅い腫瘍または組織に問題になることができます。
検証フェーズでは、背の皮下脂肪ウィンドウ商工会議所が大幅に変更された古典的なモデル4と比較。フレームはオートクレーブ合成材料の組み立てられる、光と小さく、大規模なウィンドウ-表示領域で。(図 1Bg、白矢印) 止め輪のフックは、リングを簡単に除去の使用だけです。フックなしリテーナー リングは、これらのイメージングと干渉するときに使用できます。皮膚があまり伸長しないゆるみ、このモデルでは発生しませんし、感染症はまれにしか見られます。これらの変更は動物の不快感を軽減し、動物のプロシージャを大幅に絞り込みます。また、MRI24を使用して腫瘍をイメージングするときは、金属部品は簡単に削除できます。
Intravitally イメージの背に顕微鏡を採用できる皮下脂肪の部屋。主な要件は、顕微鏡ステージと対物レンズの間利用可能なスペースです。画像に影響を与える重要な側面は、運動です。動きの人工物を防ぐためには、(すべての挿入の除去) 後顕微鏡テーブルにフィットし、マウスをサポートするプラットフォームを使用してください。麻酔下では、マウスの呼吸を自由にできるように優れているときマウスを抑制する必要はありません。ただし、ウィンドウはビューのフィールドの最適な固定を与えるプラットフォーム上にボルトで固定 (すなわち腫瘍がウィンドウ チャンバーを介して表示されます)。家畜暖房用電子加熱パッドを使用してプラットフォームを加熱します。このプラットフォームは社内でつくられ、リクエストの詳細を得ることができます。高分解能対物レンズは不可欠な細胞内プロセスを評価するとき、細胞質と核の間で区別することが可能になります。優れた光学分解能 (高 NA) しかし、比較的長いテーパー レンズの使用作動距離 (できれば 2 mm 以上) をお勧めします。溶込み深さおよびラベルの蛍光イメージングの制限です。さらに、退色、光毒性、および彩度は、イメージ投射の間避けなければなりません。
ここでは、統合された共焦点多光子と共焦点顕微鏡は使用されました。多光子は直立、共焦点は倒立顕微鏡です。正立型顕微鏡の利点は、水浸漬レンズの使いです。これらのレンズがある高 NA と長作動距離、(例えば、 20 または 40 倍) の高倍率でも。具体的には、いくつかの企業が販売されている、20 の X NA 1.0 水浸漬レンズを取得することをお勧めします。浸漬のレンズを使用すると、対物レンズと浸漬液が 37 ° C まで加熱する必要ということに注意してください。最高の画像は勧め最適な共焦点設定を使用する (すなわちピンホール 1 風通しの良いユニットでレーザー出力可能なゲイン高すぎない限り低く (特に利得には、ノイズが導入されています) 場合、回線速度最大、およびスキャンの平均で)。露出、彩度、およびイメージの強度の違いは、データの品質を妥協します。彩度、露出オーバーを防ぐためにそれをお勧めします。これは、異なるゲイン設定で画像を取得することによって回避できます。ゲインの変更は、画像の明るさを変更する最も簡単な方法です。必要な場合は、レーザー パワーを調整できます。画像の品質を標準化するには、固定の蛍光強度を持つスライドを使用できます。顕微鏡が最適な状態に設定されている場合でも画質がウィンドウ商工会議所と組織の品質によってのかなりの程度まで決定は念頭にしておかなければなりません。
複数の蛍光マーカーを同時にスキャンするとき裁ち落としを通じて、もう 1 つのチャネルで 1 つの蛍光体が検出されたを避けなければなりません。裁ち落としを通じて最小重複スペクトルと蛍光物質の組み合わせを使用して、シーケンシャル スキャン フレーム間は避けてください。紹介画像は 3 連続したスキャンを使用してスキャンされた (トラック 1: GFP、DID や 488 と 633 レーザー; fluor647 トラック 2: 543 レーザー; mTomato や Doxil、ローダミン トラック 3 と: 405 レーザー ヘキスト)。
腫瘍血管の開発や先端細胞ダイナミクス、管腔形成、血管外漏出、血管損傷のいくつかの段階を評価する可能性を示しています。ENOStag GFP ラインを使用して、破壊された血管床と腫瘍エリア簡単にまだ gfp 粒状の細胞残り物によって検出されます。注射剤は見つかりませんでした、これらの分野の流れの欠如を示します。つまり、化学療法剤を投与では、これらの領域をどちらか届きません。ただし、容器破壊には治療の結果することができます。前処理容器破壊をチェックするため、腫瘍の前評価は、正確な治療評価のための前提条件で、この実験的なデザインを使用して簡単に実行できます。
生体顕微鏡を使える可能性の茄多があるし、詳細な議論はこの文書の範囲を超えています。可能なアプリケーションには簡単な洞察力を与えるためには、腫瘍組織の血管 (例えば船舶、分岐や交差の数) と血流、細胞間相互作用の開発化学療法の蓄積に関する研究が含まれますターゲットし細胞内処理と上記のここに示されている例をセルします。分析は、蛍光に基づいている、ウィンドウまたは組織の品質による強度変動の注意してください。また、腫瘍組織は比較的厚く、上下ビューの平面からの蛍光は画像の信号に影響を及ぼします。客観的な測定と定量画像解析法を結合することをお勧めします。例えば、薬物濃度に興味がある、生体顕微鏡観察後ウィンドウから腫瘍を削除してコンテンツ高速液体クロマトグラフィーを用いた共焦点の画像と比較するための薬剤を調べます。
まあこのモデルを使用して、いくつかの注意事項と、腫瘍の反応の評価を実行できます。1 つは、腫瘍が皮膚にで、内側も成長することを実現する必要があります。普及率は全体の腫瘍をカバーするために十分に深い場合、3 D 計測が可能です。このような場合、遠赤色染料を使用してください。としてウィンドウ チャンバーは肌環境の腫瘍にお得な情報をここで説明し、指摘するウィンドウが通常のマウスの体温よりも若干低い温度を維持することが重要です。そのため、皮下脂肪のウィンドウの商工会議所、背と生体研究を確認する右マイクロ環境設定で腫瘍を勉強することをお勧めします。重要なは、背側皮下脂肪室プロセスおよび療法の改善のため機器の基礎を提供するメカニズムの動力学への洞察力。また、体内分布および薬物動態に関する追加情報を取得できます。従来、これらの体内研究は担腫瘍動物の治療と薬剤の吸収を測定する腫瘍/臓器の解剖によって実行されます。この生体モデルを使用して (すなわち、血管内、腫瘍、細胞内、または核) 薬の腫瘍の場所が5,25,26提供できます。だけでなくは、明らかにされるも、時間ウィンドウ--機会の最適な吸収のため薬の場所です。
この資料に記載されている実験的なデザインを使用して、広範なパラメーターを時空設定で評価できます。具体的には、ここでその生体顕微鏡による腫瘍血管の開発と治療反応の動態に重要な洞察を提供していますを紹介します。

生体外で研究プロセスの高分解能運動イメージングを使用すると、生体外で実験は適切なコンテキストで評価を許可されません。例えば、培養プレートで管間質コンパートメントまたは薬剤配達および腫瘍内の分布と腫瘍細胞の相互作用を検討することはできません。動物モデルは人間生理学および病理学を模倣するため。ただし、プロセス、特に細胞内の解像度の縦画像です挑戦。分子イメージング法、磁気共鳴画像 (MRI) など単一光子放射または計算された断層レントゲン写真撮影 (SPECT)、陽電子放出断層レントゲン写真撮影 (ペット)、解像度不足が良い浸透深さがある解剖学的構造を説明するために失敗します。高解像度を提供し、構造のイメージングを可能に光イメージングが、最小限の浸透1に貧しい人々 を伴っています。アプリケーション ウィンドウとの組み合わせで生体顕微鏡の皮脂、背などの技術の部屋または腹部のウィンドウは、高解像度イメージング、生体2,3,4。この技術は、(例えば細胞間相互作用イメージのティッシュで)、適切なコンテキストでプロセスの画像、解像度の光学的限界で時間と数日、上縦画像のこと明確な利点高度な共焦点と多光子顕微鏡。
細胞やタンパク質特異蛍光ラベルとトランスジェニック動物の導入は、体内と体外の実験のための可能性の茄多を開きます。インスタンス、細胞間相互作用、蛋白質の生産および操作または療法への応答を検討することができるため体内のこれらを使用してモデル5,6,7,8.重要なは、配置場所と時間を適切なイメージ投射装置および方法論を決定ことができます。ここでは、生体顕微鏡変更されるの移植腫瘍における注射剤との組み合わせで内皮マーカーを表現する動物の背側皮下脂肪ウィンドウ商工会議所が発表します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1145</td>
			<td>Supplemented with 10% FCS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-versene (EDTA)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-161E</td>
			<td>Make a 0.1% solution in PBS, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Window frames</td>
			<td>Costum made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filler glass 10 mm, 0.55 mm</td>
			<td>Abrisia technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass 12mm, #1 thickness</td>
			<td>Thermo Scientific/VWR</td>
			<td>631-0713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hear removal gel (veet)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for sensitive skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorfine hydrochloride</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>use 0.05 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia unit</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>O2/Isoflurane inhalation unit with an chamber and tubeing+cone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insulin syringe 0.5ml x 12.7mm 29g, green</td>
			<td>BD</td>
			<td>324824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 23G 1 1/4&#34;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4657640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 25G 5/8&#34;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4657853</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures silkan 0.7</td>
			<td>Braun</td>
			<td>1134019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuts</td>
			<td>Jeveka</td>
			<td>934 A2 1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bolts</td>
			<td>Jeveka</td>
			<td>84 A2 1 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope + software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>The space between table and objective need to be wide enough to hold the animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated temperature controlled platform</td>
			<td>Costum made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Window holder</td>
			<td>Costum made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tetramethylrhodamine 2,000,000 MW dextran</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D7139</td>
			<td>100 &#181;g/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa-fluor 647 10,000 MW dextran</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D22914</td>
			<td>100 &#181;g/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H1399</td>
			<td>25 &#181;g/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pegulated nanoparticles</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>ref 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA TCS SP5 Multiphoton Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS AF Software</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy of tumor-associated vasculature using advanced dorsal skinfold window chambers on transgenic fluorescent mice

腫瘍および腫瘍容器開発、腫瘍に対する治療は、非常にダイナミックな生物学的プロセスです。組織では、静的な情報提供し、正しい解釈のために十分ではない多くの場合。生体評価、プロセス、時間、続いては、余分なと多くの場合予期しない情報を提供します。いくつかの画像処理室の開発映像装置への改善と生細胞トレーサー細胞特異的マーカーを表現するトランスジェニック動物の作成、生体顕微鏡をよりよく理解する重要なツールとなっています。生物学的プロセス。時空的に腫瘍血管の開発と治療効果の調査のための実験計画について述べる.このセットアップを使用して、容器開発、先端の細胞と内腔形成、血流、血管外漏出、確立された血管床、血管破壊の段階することができます可視化し、続きます。さらに、治療効果、腫瘍の運命、そして劑のローカライズも行われます。

生体イメージングの主要な属性は、侵襲的介入なしの細胞プロセスの縦方向の可視化です。これは、興味のセルの構成または誘導蛍光マーカーを発現するトランスジェニック動物が使用されます。図 2は、eNOStag 緑の蛍光蛋白質 (GFP)9とローザ mTmG マウス行10で蛍光ラベルの表現を示しています。ENOStag GFP は、GFP をタグとして切り捨てられた eNOS 遺伝子を利用して生産されたマウス ラインです。重要なは、血管内皮細胞の eNOS を高度に発現し、GFP シグナルは th eGolgi と細胞膜 (図 2 a) に示されています。ローザ mTmG マウス 2 色蛍光の膜をターゲットとした Cre 記者の対立遺伝子があります。この行は、広範な細胞 mTomato 蛍光と Cre リコンビナーゼ発現細胞の mGFP を表現し、トレースする血統の使用が大幅に。腫瘍部分は、非組み換えのドナーから移植は、赤い蛍光性主にによって表されます、腫瘍間質部分 (例えば、循環細胞、血管の細胞の膜に血液細胞を浸透し、腫瘍関連線維芽細胞 (図 2 b))。
血管の形成が堅く調整され、これを調査する優秀なモデルは発展途上の網膜12,13。また、腫瘍血管の成長は、網膜血管の開発の原則に近いキネティック プロセスです。しかし、腫瘍血管組織を欠いているし、腫瘍は改造継続的にので、腫瘍関連血管。その利点は、血管新生モデルとして腫瘍を使用する場合、容器開発のすべての段階は、同時に同じ腫瘍でしばしば見つけることが、これには持つことができます。これらが含まれます (図 2); 腫瘍の非血管部分に成長している内皮発芽前には壊れた血管 (図 2 D);確立された血管ベッド (図 2E-私) と成熟し、分岐血管 (図 2 e II)。ただし、血管内皮細胞は、これらの分野でまた見つけることが。血管新生刺激によって刺激され、血管内皮細胞は突出する糸状 (図 2 e III) とスキャンおよび方向の移行 (図 2 e-IV) のこれらの実験を使用して先端のセルに進むことができます。この先端のセルは腫瘍間質に移行し、茎細胞分裂が続きます。単一内皮先端セル、いくつか実験を拡大して、取り消し、随時更新と生体顕微鏡観察 (図 2 f) を使用して追跡することができます。
第二に、新生前部の管腔形成を決定、血液腫瘍、血管外漏出流れ生体顕微鏡を使用できます。既に現在、動物における内因性蛍光シグナル、に応じて異なる蛍光物質を管理できます。血流や血管外漏出は、ヘキスト、蛍光 dextrans または FITC BSA を使用して視覚化できます。血液の流れと粒子の漏出の拡張に関する長い循環が 100 の peg 化ナノ粒子を蛍光ラベル nm を使用ことができます。これらのナノ粒子の調製については、以前の文書5を参照してください。これらの化合物の雇用は、図 3に示されています。ローザ mTmG マウス内皮端細胞は腫瘍組織に侵入はっきり見ることができます。機能的な血流は血管の管の内腔で全身注入されたナノ粒子の紫の蛍光によって示されて (図 3A-私)。ナノ粒子は、茎セル領域 (図 3 a II) 腔の形成を示す血管内皮細胞を密接に達する。全身投与化学療法の配信によって異なります機能血管系腫瘍間質に達するために、図 3B に示すとおり、注射剤、自分のサイズの独立した破壊された血管領域に浸透しません。船を圧縮、または血液うっ滞船。
ほとんどの器官に内皮細胞膜が血と基になる組織の機能的なバリアを形成し、分子の通過が堅く調整されます。しかし、腫瘍関連血管は漏れに知られて、細孔径カットオフは、腫瘍の種類14に大きく依存します。サイズの異なる蛍光共役 dextrans を注入して、血流、透磁率、血管外漏出を評価することができます。ヘキスト (615 Da) 腫瘍組織に急速に拡散させるし、周囲の細胞によってとられる (図 3-私)。注入直後後の 10 KDa (図 3CII) と 2 MDa (図 3 C III) デキストランは血液で発見されます。ただし、10 KDa は、またより小さい分子の機能である内皮細胞膜の透過性を示す腫瘍間質で見られるデキストランは、腫瘍血管に生得的地位。40 分後注入 (図 3 C-IV) デキストラン 10 KDa が血流 (図 3 C V) とデキストラン 2MDa の蛍光強度からオフになって減少 (図 3 C VI) では同様。ただし、大規模な dextrans は、この時間枠の内で大きな分子の透過性の欠如を示す腫瘍の間質が見つかりません。
腫瘍病態、その高い増殖、壊死と非血管分野では血管新生モデルとして腫瘍を使用する場合に非常に有益できます。ただし、これは効果的な療法および調査のための問題を示します。腫瘍関連血管系の不均一性により、全体エリア薬物無料15を残して、投与薬の不均質分布です。ドラッグデリバリー システムを改善するために適用される15,16,17, をすることができますいくつかの戦略と治療の進行は、この生体の設計を使用して調べることができます。腫瘍関連血管は、血管作動物質を使用して薬物配信17を向上させる操作できます。Doxil との組み合わせで血管作動性のエージェントとして腫瘍壊死アルファ (TNF) を用いた腫瘍血管操作の結果、化学療法剤として、ドキソルビシンのカプセル化されたリポソーム製剤は原稿5,で表示されます。18,19. いくつか時間、そうでない場合に血液循環20日循環する dextrans と対照をなしてペグインターフェロン ナノ粒子が作られています。
前述したように、腫瘍領域は事前研究の質問に応じて正しい腫瘍領域を特定するスキャンすることができます。薬物の運命は、既に破損した血管床 (データは示されていない) と区域対機能血管分野で評価できます。細胞傷害性干渉することがなく抗癌剤の運命を調べるためには、治療上のエージェントと同じ組成を持つナノ粒子をモデル薬物として使用できます。ENOStag GFP 動物これらのナノ粒子に扱われた静脈、後 24 h をイメージします。ナノ粒子は腫瘍間質に最小限の血管外漏出と、血管内に存在していた (図 4 a-私)。しかし、ナノ粒子は、TNF との組み合わせで管理された、血管外漏出が増加腫瘍薬物送達腫瘍間質 (図 4 a II) に血流から観察されました。高分解能対物レンズを使用して、化合物の細胞内局在化することができます認識ヘキスト緑内皮細胞と腫瘍間質 (図 4 b) の細胞の核の位置によって次のよう。また、ドキソルビシンのような多くの化学療法薬は、DNA にインターカ レート、としてこれらの化合物の局在を評価できます。ドキソルビシン赤の蛍光特性があり、ナノキャリアが例えば、tetramethylindotricarbocyanine 過塩素酸塩 (でした) でラベル付けできます。ENOStag GFP 動物は Doxil を点滴を注射された-TNF との組み合わせでは、治療後 24 時間に撮影されました。Doxil-血管からバリウムしたしたし、取られた周囲の腫瘍組織を (図 4-私)。個々 の細胞 (図 4 C II) のより詳細な評価は、リリースされたドキソルビシンは細胞の核に認められた間質でキャリアを見つけることができることを示した。
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55115/55115fig1.jpg"> 図 1: 楽器、背側プロシージャに必要な皮下脂肪の商工会議所と機器のセットアップ。(A) 腫瘍片 (、)、注入に必要な手術器械。標準計測器が耳パンチャー (b)、(c) マイクロ スクリュー ドライバー、曲がった針 (d)。(B) 背皮下脂肪ウィンドウ商工会議所。表 (a) と (b) ウィンドウを裏 (矢印: 縫合の穴; 矢印: ボルト用の穴)、2 ボルト (c)、2 ナット (d)、1 充填ガラス (e)、2 カバー ・ メガネ (f)、および保持リング (g) 2。また、止め輪なしフック (白い矢印) を必要がある場合で使用できます。(C) 特注チャンバー ホルダー (a)、商工会議所・ チャンバー ホルダー (b)、ボルト温度制御プラットフォーム (c)、プラットフォーム (d)、商工会議所のホルダーを固定するボルトし、麻酔のホルダー チューブ (e)。(D) 動物はプラットフォームでチャンバー ホルダーにマウントされています。B16BL6 腫瘍 (矢印) は、ウィンドウの表示領域に表示されます。(E) 生体評価に必要な装置。イメージング顕微鏡制御ソフトウェア (a) 標準的な蛍光ライト (b) と、顕微鏡とコンピューター。多光子共焦点だった麻酔ユニット (d) と (c) を使用。<a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55115/55115fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/55115/55115fig2.jpg"> 図 2: トランスジェニック動物の本質的な蛍光します。ここで示されているすべての画像は、50 〜 70 μ m 厚の間 Z スタック予測をされます。(A) eNOSGFP のタグラインで GFP はゴルジ (アスタリスク) と内皮細胞の細胞膜 (矢印) で表されます。スケールバー = 100 μ m。 (B) 腫瘍発現ローザ mTmG ラインの mTomato が血管細胞 (矢印) と (アスタリスク) の血液細胞の細胞膜で主に見られます。スケールバー = 100 μ m。 (C) A への投影成長血管前面の非血管腫瘍。スケールバー = 100 μ m。 (D) A (アスタリスク) 確立され、破損した血管と腫瘍の部分の投影。(確立された悪性腫瘍血管 (EI) 船舶 (EII); 成熟した目盛りを表示 E) の投影糸状 (EIII、矢印) と新生血管内皮細胞元単一内皮細胞拡張 (EIV、アローヘッド) filopodium 間に成熟した容器。スケールバー = 100 μ m、糸状の (F) 動き続いて 1 時間。15 分毎に、Z スタックを取られた;最大投影がここで表示されます。(白い矢印) を拡張している、糸状停滞 (=)、後退 (赤矢印)、または完全に消える (-)。スケール バー = 25 μ m.<a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55115/55115fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/55115/55115fig3.jpg"> 図 3: 血管外漏出と血液の流れを説明するために投与注射ラベル。(A) A ローザ mTmG マウスは、紫の蛍光ナノ粒子を注入した、侵略の先端細胞前部の z は、10 分後 (AI) を取られました。最も血管内皮を示す投影もやし機能ルーメン (AII、矢印) があります。(AII、矢印) の流れのない、内皮もやしを稀だけ見ることができます。スケール バー = 250 μ m。 この Z スタック投影法 (B) 前処理 (BI) eNOStag GFP 動物に破壊された腫瘍血管領域を示しています。動物は、ナノ粒子 (紫、BII) とヘキスト (ブルー、BIII) 注入しました。ナノ粒子とヘキストは、顆粒細胞の残骸がまだ gfp によって示されている破壊された領域に到達しません。スケール バー = 250 μ m。 (C) eNOStag GFP マウスは、異なるサイズの 2 つの dextrans と注入された (赤 = デキストラン 2 MDa; 紫 = デキストラン 10 KDa) とヘキスト (青 = 615 ダ)、単一平面画像をご紹介し。注入後 10 分、血液や血管外漏出の存在は、同じイメージで見られています。ヘキストは血管からほとんどすぐに extravasates し、周囲の細胞 (CI) で取り上げられています。デキストラン 10 KDa (CII) は、血管と腫瘍間質で見ることができます。デキストラン 2 MDa (CIII) は、血管で見つけることができます。注射 (CIV) 後 40 分デキストラン 10 KDa が血 (CV) から消え、デキストラン 2 MDa の蛍光強度も低下 (CVI) だった。スケールバー = 100 μ m.<a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55115/55115fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/55115/55115fig4.jpg"> 図 4: 化学療法の代理店の運命を調査します。ENOStag GFP 動物 (A) ナノ粒子と扱われた静脈、後で 24 h のイメージを作成します。ナノ粒子は、腫瘍間質 (AI) 最小限の血管外漏出、船舶にまだある存在。ナノ粒子は TNF と組み合わせれば、血管外漏出が血流から腫瘍間質 (AII) に観察されます。スケール バー = 250 μ m。 (B) による高解像度レンズ、内皮細胞質 (緑)、個々 のセルの核 (青) を認識することができます。スケールバー = 50 μ m。 (C) eNOStag GFP 動物だった Doxil と点滴を注入-TNF との組み合わせでは、画像が 24 h 後で撮影されました。ここでは、Doxil の血管外漏出-でした、腫瘍に血管から間質は明らか (CI)。個々 のセル (CII) のより詳細な評価は、リリースされたドキソルビシン (赤) は細胞の核 (矢印) で観察される間、(矢印)、細胞質に、紫のキャリアを見つけることができますを示しています。スケールバー = 50 μ m.<a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55115/55115fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Intravital Microscopy of Tumor-associated Vasculature Using Advanced Dorsal Skinfold Window Chambers on Transgenic Fluorescent Mice

このプロトコルは細胞特異的蛍光マーカーを発現するトランスジェニック マウスの生体イメージングを説明します。生体イメージングは、プロセスの顕微可視化が可能な埋込型の windows を使用して生きている動物の高解像度観測の非侵襲的な方法を提供します。このメソッドは、特に縦方向プロセスの研究に有用です。

腫瘍関連血管系を使用しての生体顕微鏡が背高度な蛍光トランスジェニック マウスの皮下脂肪のウィンドウの部屋

Tumor and tumor vessel development, as well as tumor response to therapeutics, are highly dynamic biological processes. Histology provides static ...

intravital-microscopy-tumor-associated-vasculature-using-advanced

Research

JoVE Journal

Medicine

13.7K ビュー.  Erasmus MC. このプロトコルは細胞特異的蛍光マーカーを発現するトランスジェニック マウスの生体イメージングを説明します。生体イメージングは、プロセスの顕微可視化が可能な埋込型の windows を使用して生きている動物の高解像度観測の非侵襲的な方法を提供します。このメソッドは、特に縦方向プロセスの研究に有用です。

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Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

Kidney diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in the permeability barrier comprised of podocytes, vascular endothelial cells, and a basement membrane working in unison. Data from our laboratory using intravital 2-photon microscopy revealed a more permeable glomerular filtration barrier (GFB) than previously thought under physiologic conditions, with retrieval of filtered albumin occurring in an early subset of cells called proximal tubule cells (PTC)1,2,3.
Previous techniques used to study renal filtration and establishing the characteristic of the filtration barrier involved micropuncture of the lumen of these early tubular segments with sampling of the fluid content and analysis4. These studies determined albumin concentration in the luminal fluid to be virtually non-existent; corresponding closely to what is normally detected in the urine. However, characterization of dextran polymers with defined sizes by this technique revealed those of a size similar to serum albumin had higher levels in the tubular lumen and urine; suggesting increased permeability5.
Herein is a detailed outline of the technique used to directly visualize and quantify glomerular fluorescent albumin permeability in vivo. This method allows for detection of filtered albumin across the filtration barrier into Bowman's space (the initial chamber of urinary filtration); and also allows quantification of albumin reabsorption by proximal tubules and visualization of subsequent albumin transcytosis6. The absence of fluorescent albumin along later tubular segments en route to the bladder highlights the efficiency of the retrieval pathway in the earlier proximal tubule segments. Moreover, when this technique was applied to determine permeability of dextrans having a similar size to albumin virtually identical permeability values were reported2. These observations directly support the need to expand the focus of many proteinuric renal diseases to included alterations in proximal tubule cell reclamation.

A technique utilizing high resolution intavital 2-photon microscopy to directly visualize and quantify gloemrular filtration in surface glomeruli. This method allows for direct determination of permeability characteristics of macromolecules in both normal and diseased states.

ミュンヘンWistar系ラットにおける2光子顕微鏡を用いた蛍光高分子の糸球体透過性を定量化

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

医学

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered perfusion can aid research into the mechanisms of retinal pathologies. Intravital video microscopy of fluorescent tracers can be used to measure vascular diameters and bloodstream velocities of the retinal vasculature, specifically the arterioles branching from the central retinal artery and of the venules leading into the central retinal vein. Blood flow rates can be calculated from the diameters and velocities, with the summation of arteriolar flow, and separately venular flow, providing values of total retinal blood flow. This paper and associated video describe the methods for applying this technique to mice, which includes 1) the preparation of the eye for intravital microscopy of the anesthetized animal, 2) the intravenous infusion of fluorescent microspheres to measure bloodstream velocity, 3) the intravenous infusion of a high molecular weight fluorescent dextran, to aid the microscopic visualization of the retinal microvasculature, 4) the use of a digital microscope camera to obtain videos of the perfused retina, and 5) the use of image processing software to analyze the video. The same techniques can be used for measuring retinal blood flow rates in rats.

Intravital microscopy can be used in animals to visualize and measure retinal vascular diameters, bloodstream velocities, and total retinal blood flow.

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). At the most severe end of the spectrum is Fetal Alcohol Syndrome (FAS), characterized by growth retardation, craniofacial dysmorphology, and neurobehavioral deficits. Studies with animal models, including rodents, have elucidated many molecular and cellular mechanisms involved in the pathophysiology of FASDs. Ethanol administration to pregnant rodents has been used to model human exposure during the first and second trimesters of pregnancy. Third trimester ethanol consumption in humans has been modeled using neonatal rodents. However, few rodent studies have characterized the effect of ethanol exposure during the equivalent to all three trimesters of human pregnancy, a pattern of exposure that is common in pregnant women. Here, we show how to build vapor chambers from readily obtainable materials that can each accommodate up to six standard mouse cages. We describe a vapor chamber paradigm that can be used to model exposure to ethanol, with minimal handling, during all three trimesters. Our studies demonstrate that pregnant dams developed significant metabolic tolerance to ethanol. However, neonatal mice did not develop metabolic tolerance and the number of fetuses, fetus weight, placenta weight, number of pups/litter, number of dead pups/litter, and pup weight were not significantly affected by ethanol exposure. An important advantage of this paradigm is its applicability to studies with genetically-modified mice. Additionally, this paradigm minimizes handling of animals, a major confound in fetal alcohol research.

We demonstrate the construction of alcohol vapor chambers using readily available materials that simultaneously house 6 mouse cages. We further describe their use in a mouse model of fetal alcohol exposure equivalent to all 3&#160;trimesters of human pregnancy. This paradigm exposes animals during gestation and postnatal days 1-12.

人間開発の3つのすべての学期の等価時にはアルコールにマウスを公開するために使用蒸気チェンバースの建設

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

マウスの背部皮脂商工における虚血性組織損傷：皮膚弁モデル急性永続虚血を調査する

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound and aortic blood pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is raised then lowered incrementally by intravenous infusion of vasoactive drugs phenylephrine and sodium nitroprusside. Aortic diameter is measured for each pressure step to characterize the pressure-diameter relationship of the ascending aorta. Stiffness indices derived from the pressure-diameter relationship can be calculated from the data collected. Calculation of arterial compliance is described in this protocol.
This technique can be used to investigate mechanisms underlying increased aortic stiffness associated with cardiovascular disease and aging. The technique produces a physiologically relevant measure of stiffness compared to ex vivo approaches because physiological influences on aortic stiffness are incorporated in the measurement. The primary limitation of this technique is the measurement error introduced from the movement of the aorta during the cardiac cycle. This motion can be compensated by adjusting the location of the probe with the aortic movement as well as making multiple measurements of the aortic pressure-diameter relationship and expanding the experimental group size.

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We describe a technique for measuring aortic stiffness from its pressure-diameter relationship in vivo in mice. Aortic diameter is recorded by ultrasound and aortic pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is changed incrementally and the resulting diameter is measured.

昇順大動脈剛性の測定<em&gt;インビボ</em&gt;超音波​​を使用したマウスにおける

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound ...

Exergaming in Older People Living with HIV Improves Balance, Mobility and Ameliorates Some Aspects of Frailty

Approximately 1.2 million people in the United States live with HIV infection. Medical advancements have increased the life expectancy and this cohort is aging. HIV-positive individuals have a high incidence of frailty (~20%) characterized by depression and sedentary behavior. Exercise would be healthy, but due to the frail status of many HIV-positive individuals, conventional exercise is too taxing. The aim of this study was to evaluate the effectiveness and acceptability of a novel game-based training program (exergame) in ameliorating some aspects of frailty in HIV-infected individuals. Ten older people living with HIV were enrolled in an exergame intervention. Patients performed balance exercises such as weight shifting, ankle reaching, and obstacle crossing. Real-time visual/audio lower-extremity joint motion feedback was provided using wearable sensors to assist feedback and encourage subjects to accurately execute each exercise task. Patients trained twice a week for 45 min for 6 weeks. Changes in balance, gait, psychosocial parameters and quality of life parameters were assessed at the beginning, midterm and at conclusion of the training program. Ten patients completed the study and their results analyzed. The mean age was 57.2 &#177; 9.2 years. The participants showed a significant reduction in center of mass sway (78.2%, p = .045) during the semi-tandem balance stance with eyes closed and showed a significant increase in gait speed during a dual task motor-cognitive assessment (9.3%, p = .048) with an increase in stride velocity of over 0.1 m/sec. A significant reduction in reported pain occurred (43.5%, p = .041). Preliminary results of this exergame intervention show promise in improving balance and mobility while requiring older people living with HIV to be more active. The exergame can be continued at home and may have long term as well as short-term benefits for ameliorating frailty associated with HIV infection.

Persons infected with HIV are often frail, depressed and live a sedentary lifestyle for which conventional exercise is too taxing. Here, we present an exercise protocol that ameliorates aspects of frailty in HIV-infected persons. An exergame integrating cognitive control was developed using biosensors that measured balance, weight-shifting and obstacle crossing.

HIVとともに生きる高齢者に運動ゲームをすることは、バランス、モビリティが向上し、虚弱の諸相を改善します

Approximately 1.2 million people in the United States live with HIV infection. Medical advancements have increased the life expectancy and this cohort is ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

実験的大腸炎の間、腸上皮バリア機能に栄養補助食品の有益な効果を分析

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

ヘアレスマウスの耳たぶにおける生体顕微鏡および血栓誘導

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

Overwhelming tissue accumulation of highly activated immune cells represents a hallmark of various chronic inflammatory diseases and emerged as an attractive therapeutic target in the clinical management of affected patients. In order to further optimize strategies aiming at therapeutic regulation of pathologically imbalanced tissue infiltration of pro-inflammatory immune cells, it will be of particular importance to achieve improved insights into disease- and organ-specific homing properties of peripheral lymphocytes. The here described experimental protocol allows to monitor lung accumulation of fluorescently labeled and adoptively transferred human lymphocytes in the context of papain-induced pulmonary inflammation. In contrast to standard in vitro assays frequently used for the analysis of immune cell migration and chemotaxis, the now introduced in vivo setting takes into account lung-specific aspects of tissue organization and the influence of the complex inflammatory scenario taking place in the living murine organism. Moreover, three-dimensional cross-sectional light-sheet fluorescence microscopic imaging does not only provide quantitative data on infiltrating immune cells, but also depicts the pattern of immune cell localization within the inflamed lung. Overall, we are able to introduce an innovative technique of high value for immunological research in the field of chronic inflammatory lung diseases, which can be easily applied by following the provided step-by-step protocol.

The here introduced protocol allows characterization of the lung homing capacity of primary human lymphocytes under in vivo inflammatory conditions. Pulmonary infiltration of adoptively transferred human immune cells in a mouse model of allergic inflammation can be imaged and quantified by light-sheet fluorescence microscopy of chemically cleared lung tissue.

In Vivo 光シート顕微鏡観察に基づくアレルギー性炎症の実験的肺ホーミング ヒトリンパ球のイメージング高度な

Overwhelming tissue accumulation of highly activated immune cells represents a hallmark of various chronic inflammatory diseases and emerged as an ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

平滑筋細胞系譜トレース マウスの高度な動脈硬化病変における細胞構成の定量的解析

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

腫瘍関連血管系を使用しての生体顕微鏡が背高度な蛍光トランスジェニックマウスの皮下脂肪のウィンドウの部屋

要約

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ミュンヘンWistar系ラットにおける2光子顕微鏡を用いた蛍光高分子の糸球体透過性を定量化

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

人間開発の3つのすべての学期の等価時にはアルコールにマウスを公開するために使用蒸気チェンバースの建設

マウスの背部皮脂商工における虚血性組織損傷：皮膚弁モデル急性永続虚血を調査する

昇順大動脈剛性の測定

HIVとともに生きる高齢者に運動ゲームをすることは、バランス、モビリティが向上し、虚弱の諸相を改善します

実験的大腸炎の間、腸上皮バリア機能に栄養補助食品の有益な効果を分析

ヘアレスマウスの耳たぶにおける生体顕微鏡および血栓誘導

In Vivo 光シート顕微鏡観察に基づくアレルギー性炎症の実験的肺ホーミングヒトリンパ球のイメージング高度な

平滑筋細胞系譜トレースマウスの高度な動脈硬化病変における細胞構成の定量的解析

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