Name: rapid and refined cd11b magnetic isolation of primary microglia with enhanced purity and versatility
Uploaded: 2017-04-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
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NS088206とES026892：この作品は、国立衛生研究所（NIH）補助金によってサポートされていました。 AKにAGKとディーンズ教授職にW.ユージンとリンダ・ロイド寄附も認めています。

動物やプロトコル手順の使用は、アイオワ州立大学（エイムズ、IA、USA）の施設内動物管理使用委員会（IACUC）によって承認され、監督されました 1.混合グリア培養の成長<ol><li> 5.5インチのオペレーティングハサミで素早くの1- 2日齢の仔を刎ねる、そして氷上で50 mLチューブにすぐに頭を置きます。この断頭は、安楽死のモードであることに注意してください。 </li><li> 層流フードでは、頭蓋骨と4.5インチのストレートマイクロ解剖ハサミを使用して髄膜に小さな切開部を作ります。吻側端（鼻）に尾側端部から切断し始めます。断頭により形成された開口部を使用することによって皮膚の下に取得します。 <ol><li>切開をした後、側に半球の1を剥離。次いで、脳全体を除去するために、湾曲したまたはフックピンセットを使用します。 </li></ol></li><li> 0.25％トリプシンethylenediaminetetraacetを含む新しい50mLチューブ中脳（複数可）を浸し37℃の水浴中で15分間、酢酸（EDTA）を食べました。脳あたりトリプシンEDTAの2ミリリットルを使用してください。 </li><li>追加および除去することにより、新鮮な増殖培地（10％FBS、DMEM / F12、1％ペニシリン/ストレプトマイシン、1％L-グルタミン、1％ピルビン酸ナトリウム、および1％非必須アミノ酸）と脳（単数または複数）を洗浄メディア。この4倍を繰り返します。 </li><li>各脳のために、増殖培地を含有する2つのT-75フラスコにプレート。そのため、チューブに脳あたりの成長培地の2ミリリットルを追加します。したがって、T-75フラスコ当たり増殖培地の8-9 mLでホモジナイズした脳の1 mLに等しくなります。 </li><li> 最大から最小にするために、異なる開口サイズのピペットと脳（複数可）を粉砕することによりホモジナイズします。脳組織は、次のピペットへの遷移を小さくなっていないことが表示されている場合。粉砕の最後に、懸濁液は可視チャンクと、明らかです。 <ol><li> 25 mlピペット、5mLのピペット、次いで10mLのピペットを順次使用。 </li></ol></li><li>各homogを渡し単一細胞培養にそれを作るために70μmのセルストレーナーを通してenous脳サスペンション。 </li><li>各ホモジナイズ脳、ステップ1.5（T-75フラスコ当たり増殖培地の8-9 mLでホモジナイズした脳の1 mL）に記載されているように、増殖培地を含むプレート2つのT-75フラスコのために。 </li><li> 6日後に増殖培地を変更し、16日目に分離するまでに成長。 </li></ol>ミクログリア細胞の単離2 <ol><li> 16日後、フラスコから成長培地を除去し、新鮮な50mLチューブに入れ。各T-75フラスコに3mlの0.25％トリプシンEDTAを加えます。オービタルシェーカー上でRTで5分間フラスコを振ります。 <ol><li>遠心分離5分間0.4×gで除去し、増殖培地と後の工程でトリプシンEDTA反応を停止するために使用します。 </li></ol></li><li> 5分間振とうした後、トリプシンEDTA反応を停止させる（新鮮または2.1.1から使用される媒体）増殖培地を4mLの最小値を加えます。 </li><li>確実にするために粉砕すること、すべてのCellsは切り離されています。 </li><li>粉砕後、単一細胞培養にそれを作るために70μmのセルストレーナーを通して細胞を渡す細胞計数を行い、次いで5分間0.4×gで細胞をスピンダウン。 </li><li>すべての100×10 6個の細胞（約15×T-75フラスコ）のために、細胞ペレットを再懸濁するために推奨培地（2％FBS、DPBS（カルシウム及び塩化マグネシウムを含まない）、1mMのEDTA）1mLのを使用。 注：すべての次のステップは、1 mLの分離に合わせて調整されています。 </li><li> 、5mLのポリスチレンチューブに乗り推奨メディアの1 mLを加え、メニスカスをマーク。 2.5 mlまでの推奨メディアを追加しても、このマークを付けます。推奨メディアを捨て、5mLのポリスチレンチューブに再懸濁した細胞を移します。 </li><li>浮遊細胞のすべての1 mLのためのラット血清の50μLを追加します。 RTで5分間インキュベートします。 </li><li>これらのコンポーネントは、プロプライエタリである成分Aの25μLと成分Bを25μLを混合することにより選択カクテルを調製します。 </li><li> 50を追加1;細胞に選択カクテルL。 RTで5分間インキュベートします。 注：純粋な文化のために、繰り返しステップ2.9（推奨しますが、必須ではありません）。 </li><li> 45秒間ボルテックスマイクロスフェア。サンプルの1ミリリットルあたりのマイクロスフェアの80μLを追加します。 RTで3分間インキュベートします。 </li><li>推奨メディアを追加することにより、ポリスチレンチューブに2.5mLの体積をもたらします。 </li><li>室温で3分間磁石にチューブを入れてください。純度を高めるために、インキュベーションを調整します。ゆっくりと、まだポリスチレンチューブ中に磁石を15 mLのチューブに推奨メディアを注ぎます。 </li><li>手順を繰り返し2.12 3回。追加の磁気インキュベーションは、純度を高めるために行うことができます。 </li><li>増殖培地の3ミリリットルを追加し、細胞カウンターを用いて細胞の数を数えます。 </li><li>従って、ポリ-D-リジン（PDL）の治療のためにコーティングされたプレートにプレート細胞。 inPDL被覆プレートに播種した後、細胞を48時間処置します。これは、細胞が分離のストレスから回復することができます。 注：チェ以前に15記載のように免疫細胞化学を用いて培養の純度をCK。 </li><li>増殖培地中のT-75フラスコ中で、主にアストロサイトを含有する陰性画分を（15 mLチューブに回収）、プレート。 </li><li> 37℃のインキュベーター中でのインキュベーションの少なくとも6時間後、培地を変更し、それはO / Nを成長させ。治療のために次の日アストロサイトを分割します。 </li></ol>

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著者は、彼らが競合する金融利害関係を持たないことを宣言します。

古いミクログリアの単離方法は、種々のタンパク質に適していない限られた回復を有するウェスタンブロットによって分析し、RNAは、定量RT-PCRにより解析します。差動付着および軽度のトリプシン処理の方法は、低ミクログリア収率13、14、15を有する2つの一般的なアプローチです。列ベースのCD11bのアプローチは、低い回...

ミクログリアのc-kit + / CD45-から分化中胚葉起源のMybの非依存常駐マクロファージは、卵黄嚢1,2の血島前駆細胞をerythromyeloidれます。発生学的ミクログリアは、中枢神経系（CNS）のコロニーを形成した後、それらは、分枝形態3にアメーバからの遷移します。そのダイナミックな波及効果は、潜在的な侮辱4のための健全な脳実質を探るため、これらの成人ミクログリアは、監視者として分類されています。ミクログリアのみCNS細胞集団の約10％に寄与するものの、お互いの中のタイルへの能力は実質4、5の最大スキャンを保証します。そのようなαシヌクレイン6,7およびアミロイドβ8、又はP等の危険関連分子パターン（DAMPS）そのようなリポ多糖（LPS）9としてathogen関連分子パターン（のPAMPs）は、古典的アメーバ様活性状態への復帰及び一酸化窒素の産生、腫瘍壊死因子α（TNFα）、インターロイキン1βによって特徴付けられる炎症反応を促進するミクログリアを活性化（IL-1β）、IL-6、IL-12、およびケモカインCCモチーフリガンド2 9、10、11。病原αシヌクレインを蓄積してきたパーキンソン病などの神経炎症条件において、神経変性サイクルをさらにミクログリア7の古典的な活性化を促進し、より凝集αシヌクレインを放出するドーパミン作動性ニューロンの死から作成されます。周辺のマクロファージと同様に、ミクログリアはそれらに強力を与える、あるいは抗炎症性サイトカインIL-4およびIL-10の存在下で活性化する能力をも有していてもよいです神経の修復を促進し、炎症2、11の減衰IAL。別にCNSにおける免疫学的役割から、ミクログリアは、開発中のシナプスを剪定することにより、神経回路の重要な調節因子として記載されています。例えば、Cx3cr1- KOマウスは、低密度ミクログリア及び樹状突起棘、未熟シナプス、及び後進CNS 12の電気パターンの過剰につながる減少シナプス剪定を有します。 CNSの恒常性にこれらの生理学的な複雑さとミクログリアの多様な機能的役割を理解することは、神経変性疾患を標的に治療薬を探索するために重要です。 神経免疫学の分野では、in vitroの実験が原因機構研究のための大きな可能性を非常に望ましい、低メンテナンスコスト、およびより少ない時間と労働集約的であるために。 Furthermo再、細胞集団を単離する能力は、所定の条件の下で、それらの標的細胞の機能性を描くことが重要です。多数のミクログリアの分離方法が存在するが、それらは幅広い実験13、14、15のために比較的高い数値と純度を得る能力によって制限されています。例えば、分化11B（のCD11b）のクラスタは、単球、マクロファージおよびミクログリア16の一般的な表面マーカーです。 CD11bを利用することによって、磁気分離の方法は、第一〜99.5％の純度および新生児脳17あたり〜1.6×10 6ミクログリアを得たカラムベースの手法として説明しました。我々の研究室では、最近、我々はフィコエリトリン（PE）にコンジュゲートモノクローナル抗体のCD11bをタグ付けすることによってポリスチレンチューブ中で行わカラムフリーのCD11b磁気分離法15を 、開発しました。二重特異性secondaPEとPEおよびデキストラン複合体にRY抗体。一度結合し、デキストラン被覆磁性粒子は抗体複合体のデキストラン端に結合する、導入されます。最後に、ポリスチレンチューブは、ミクログリアを単離するための磁石内に配置されます。このアプローチは、新生児の脳当たりしかし〜97％までの純度を低下させるコストで〜3.2×10 6ミクログリアの収量を倍増しました。 本明細書において、我々は、迅速かつ精製カラムフリーのCD11b磁気分離プロトコル（ 図1）を実証します。 CD11bを磁気分離キットの価格は同じであるので、この改良された方法は、私たちの元の列フリー法と同様に実現可能なまま。終了時間は、細胞生存および収率を最大に重要であることができる半分に低減されます。注目すべきは、この最適化された方法により達成純度は〜&gt; 99％、当研究室が開発した15元の列のない方法で達成純度を超える顕著な改善です。最も重要なことは、CD11bを-PE光から離れるインキュベートする必要性を排除し、蛍光顕微鏡検査のために赤色チャネルの使用を可能にする、利用されません。最後に、元のCD11bの方法のように、高収率および高純度の星状細胞の画分は、この改良された方法で得られます。アストロサイトは、彼らの恒常性維持機能が病態生理学18との関係で不可欠であるという考えにつながる、CNSの中で最も多数のグリア細胞です。これらのグリア細胞は、神経膠に彼らの捜査の可能性を例示する、栄養サポートを提供し、血液脳関門を形成する神経伝達物質の恒常性の維持、傷害、神経保護に対応してグリアの傷を形成し、学習と記憶、および神経炎症などの多様な生理機能に役割を果たしています生物学19。ミクログリアとアストロサイトの形態と機能はG、共焦点顕微鏡、ウェスタンブロッティング、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）を介して確認されていますriess亜硝酸塩アッセイ、およびルミネックス多重サイトカインアッセイ。このプロトコルにより提供される改良は、in vitroの実験のために重要であるすべては、ミクログリアやアストロサイトの純度、赤チャネルの利用可能性を持つ蛍光顕微鏡のより広範なアプリケーションに関連する自信を増加し、時間を節約できます提供しています。

<table><tbody><tr><td>EasySep CD11b Separation Kit II</td><td>StemCell Technologies</td><td>18970</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Magnet</td><td>StemCell Technologies</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 (1:1) (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate</td><td>Life Technologies</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>MEM Non-essential amino acids (100x)</td><td>Life Technologies</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine (100x)</td><td>Life Technologies</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Sigma</td><td>13H469</td><td></td></tr><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA</td><td>Gibco by Life Technologies</td><td>25200</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s PBS (DPBS)</td><td>Gibco by Life Technologies</td><td>14190250</td><td></td></tr></tbody></table>

rapid and refined cd11b magnetic isolation of primary microglia with enhanced purity and versatility

ミクログリアは、中枢神経系傷害への一次対応者です。しかし、多くの神経炎症の調節におけるその役割については不明のまま。ミクログリアは、炎症性ストレスを調査中で、マクロファージと同様に機能する中胚葉細胞です。古典（M1型）および代替（M2型）マクロファージの活性化にも良く、これらの表現型は、パーキンソン病、アルツハイマー病、およびハンチントン病などの神経炎症の状態で持っている根本的な相互作用を理解するための努力にミクログリアに拡張されました。 試験管内の実験では初代ミクログリアを利用生体内環境に拡張することができる迅速かつ信頼性の高い結果を提供しています。これはin vivoでの実験を超える明らかな利点ですが、最適な純度の十分な収量を達成しながら、ミクログリアを分離することが課題となっています。現在使用されている一般的な方法は、どちらかは、低回収率、低純度、またはその両方に苦しみます。ここで、我々はDEM時間の半分の量の高い細胞の回復と強化された純度を実現し、カラムフリーのCD11b磁気分離法の改善onstrate。私たちは、神経炎症および神経変性を研究する目的のための主要なミクログリアの分離の非常に有用なモデルとして、この最適化された方法を提案します。

ミクログリアはIIは、高純度を持っているのCD11b陽性選択キットを用いて単離し初代マウスミクログリアは、上述したプロトコルを用いて単離し、単離の純度を確認するために、ポリ-D-リジンでコーティングしたカバースリップ上に播種しました。十千個の細胞をウェルあたり播種し、免疫細胞化学分析は、単離されたミク?...

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Rapid and Refined CD11b Magnetic Isolation of Primary Microglia with Enhanced Purity and Versatility

ここでは、in vitroの実験のために出生後の仔マウス（1日目）からミクログリアを分離するためのプロトコルを提示します。分離のこの即興方法は、高収率および高純度、ミクログリア生物学を解明する目的で、広範囲の実験を可能にする別の方法を超える有意な利点の両方を生成します。

強化された純度と汎用性を持つ初代ミクログリアの迅速かつ洗練されたCD11b磁気分離

Microglia are the primary responders to central nervous system insults; however, much remains unknown about their role in regulating neuroinflammation. ...

rapid-refined-cd11b-magnetic-isolation-primary-microglia-with

Research

JoVE Journal

Neuroscience

9.7K ビュー.  Iowa State University. ここでは、in vitroの実験のために出生後の仔マウス（1日目）からミクログリアを分離するためのプロトコルを提示します。分離のこの即興方法は、高収率および高純度、ミクログリア生物学を解明する目的で、広範囲の実験を可能にする別の方法を超える有意な利点の両方を生成します。 

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Characterization and Isolation of Mouse Primary Microglia by Density Gradient Centrifugation

Microglia, the resident immune cells in the brain, are the first responders to inflammation or injury in the central nervous system. Recent research has revealed microglia to be dynamic, capable of assuming both pro-inflammatory and anti-inflammatory phenotypes. Both M1 (pro-inflammatory) and M2 (pro-reparative) phenotypes play an important role in neuroinflammatory conditions such as perinatal brain injury, and exhibit differing functions in response to certain environmental stimuli. The modulation of microglial activation has been noted to confer neuroprotection thus suggesting microglia may have therapeutic potential in brain injury. However, more research is required to better understand the role of microglia in disease, and this protocol facilitates that. The protocol described below combines a density gradient centrifugation process to reduce cellular debris, with magnetic separation, producing a highly pure sample of primary microglial cells that can be used for in vitro experimentation, without the need for 2-3 weeks culturing. Additionally, the characterization steps yield robust functional data about microglia, aiding studies to better our understanding of the polarization and priming of these cells, which has strong implications in the field of regenerative medicine.

A protocol for the isolation of primary microglia from murine brains is presented. This technique aids in furthering the current understanding of neurological conditions. Density gradient centrifugation and magnetic separation are combined to produce sufficient yield of a highly pure sample. Furthermore, we outline the steps for characterization of microglia.

特性と密度勾配遠心によるマウスのプライマリ ミクログリアの分離

Microglia, the resident immune cells in the brain, are the first responders to inflammation or injury in the central nervous system. Recent research has ...

神経科学

Isolation and Culture of Rodent Microglia to Promote a Dynamic Ramified Morphology in Serum-free Medium

Microglia represent 5 - 10% of all central nervous system (CNS) cells and are increasingly drawing attention due to their contributions during development, homeostasis, and disease. Although macrophages have been studied in detail for decades, specialized features of microglia, the tissue-resident macrophages of the CNS, have remained largely mysterious, in part due to limitations in the ability to recapitulate mature microglial properties in culture. Here, we illustrate a straightforward procedure for the rapid isolation of pure microglia from the mature rodent brain. We also describe serum-free culture conditions that support high levels of microglial viability over time. Microglia cultured under these defined-medium conditions exhibit elaborate ramified processes and dynamic surveillance behavior. We illustrate some effects of serum exposure on cultured microglia and discuss how these serum-free cultures compare to both serum-exposed cultures as well as microglia in vivo.

Efforts to understand microglial function in detail have been hindered by the lack of microglial culture models that recapitulate the properties of mature in vivo microglia. This protocol describes an isolation and culture approach designed to maintain robust survival of highly ramified mature rat microglia under defined-medium conditions.

動的なを促進するために齧歯動物のミクログリアの分離と培養分岐無血清培地の形態

Microglia represent 5 - 10% of all central nervous system (CNS) cells and are increasingly drawing attention due to their contributions during ...

Isolation of Region-specific Microglia from One Adult Mouse Brain Hemisphere for Deep Single-cell RNA Sequencing

As resident macrophages in the central nervous system, microglia actively control brain development and homeostasis, and their dysfunctions may drive human diseases. Considerable advances have been made to uncover the molecular signatures of homeostatic microglia as well as alterations of their gene expression in response to environmental stimuli. With the advent and maturation of single-cell genomic methodologies, it is increasingly recognized that heterogenous microglia may underlie the diverse roles they play in different developmental and pathological conditions. Further dissection of such heterogeneity can be achieved through efficient isolation of microglia from a given region of interest, followed by sensitive profiling of individual cells. Here, we provide a detailed protocol for the rapid isolation of microglia from different brain regions in a single adult mouse brain hemisphere. We also demonstrate how to use these sorted microglia for plate-based deep single-cell RNA sequencing. We discuss the adaptability of this method to other scenarios and provide guidelines for improving the system to accommodate large-scale studies.

We provide a protocol for isolation of microglia from different dissected regions of an adult mouse brain hemisphere, followed by semi-automated library preparation for deep single-cell RNA sequencing of full-length transcriptomes. This method will help to elucidate functional heterogeneity of microglia in health and disease.

ディープシングルセルRNAシーケンシングのための1つの成人マウス脳半球からの領域特異的ミクログリアの分離

As resident macrophages in the central nervous system, microglia actively control brain development and homeostasis, and their dysfunctions may drive ...

Primary Microglia Isolation from Postnatal Mouse Brains

Microglia are the mononuclear phagocytes in the central nervous system (CNS), which play key roles in maintaining homeostasis and regulating the inflammatory process in the CNS. To study the microglial biology in vitro, primary microglia show great advantages compared to immortalized microglial cell lines. However, microglia isolation from the postnatal mouse brain is relatively less efficient and time-consuming. In this protocol, we provide a quick and easy-to-follow method to isolate primary microglia from the neonatal mouse brain. The overall steps of this protocol include brain dissection, primary brain cell culture, and microglia isolation. Using this approach, researchers can obtain primary microglia with high purity. In addition, the harvested primary microglia were able to respond to the lipopolysaccharides challenge, indicating they retained their immune function. Collectively, we developed a simplified approach to efficiently isolate primary microglia with high purity, which facilitates a wide range of microglial biology investigations&#160;in vitro.

Primary cell culture is one of the primarily used approaches for studying microglial biology in vitro. Here, we developed a method for simple and rapid microglia isolation from the mouse postnatal day 1 (P1) to P4.

Microglia are the mononuclear phagocytes in the central nervous system (CNS), which play key roles in maintaining homeostasis and regulating the ...

Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures

Microglia, as brain resident macrophages, are fundamental to several functions, including response to environmental stress and brain homeostasis. Microglia can adopt a large spectrum of activation phenotypes. Moreover, microglia that endorse pro-inflammatory phenotype is associated with both neurodevelopmental and neurodegenerative disorders. In vitro studies are widely used in research to evaluate potential therapeutic strategies in specific cell types. In this context studying microglial activation and neuroinflammation in vitro using primary microglial cultures is more relevant than microglial cell lines or stem-cell-derived microglia. However, the use of some primary cultures might suffer from a lack of reproducibility. This protocol proposes a reproducible and relevant method of magnetically isolating microglia from neonate pups. Microglial activation using several stimuli after 4 h and 24 h by mRNA expression quantification and a Cy3-bead phagocytic assay is demonstrated here. The current work is expected to provide an easily reproducible technique for isolating physiologically relevant microglia from juvenile developmental stages.

Primary microglia cultures are commonly used to evaluate new anti-inflammatory molecules. The present protocol describes a reproducible and relevant method to magnetically isolate microglia from neonate pups.

初代細胞培養のための新生児マウスからのミクログリア細胞の磁気単離

Microglia, as brain resident macrophages, are fundamental to several functions, including response to environmental stress and brain homeostasis. ...

Isolation of Mouse Primary Microglia by Magnetic-Activated Cell Sorting in Animal Models of Demyelination

Microglia, the resident innate immune cells in the brain, are the primary responders to inflammation or injury in the central nervous system (CNS). Microglia can be divided into resting state and activated state and can rapidly change state in response to the microenvironment of the brain. Microglia will be activated under different pathological conditions and exhibit different phenotypes. In addition, there are many different subgroups of activated microglia and great heterogeneity between different subgroups. The heterogeneity mainly depends on the molecular specificity of microglia. Studies have revealed that microglia will be activated and play an important role in the pathological process of inflammatory demyelination. To better understand the characteristics of microglia in inflammatory demyelinating diseases such as multiple sclerosis and neuromyelitis optica spectrum disorder, we propose a perilesional primary microglial sorting protocol. This protocol utilizes columnar magnetic-activated cell sorting (MACS) to obtain highly purified primary microglia and preserve the molecular characteristics of microglia to investigate the potential effects of microglia in inflammatory demyelinating diseases.

Here, we present a protocol to isolate and purify primary microglia in animal models of demyelinating diseases, utilizing columnar magnetic-activated cell sorting.

脱髄の動物モデルにおける磁気活性化細胞選別によるマウス原発性ミクログリアの単離

Microglia, the resident innate immune cells in the brain, are the primary responders to inflammation or injury in the central nervous system (CNS). ...

In vitroアッセイのためのMACSを用いたマウスからの視床下部ミクログリアの単離

Isolation of Hypothalamic Microglia from Freshly Perfused Adult Mouse Brain by Magnetic-Activated Cell Sorting

Microglia, as the resident macrophages of the brain, are essential for maintaining brain homeostasis. They shape neuronal circuits during development, survey their environment for debris or dead cells, as well as respond to infection and injury in the brain, among many other functions. However, their important role in neurodevelopment and synaptic plasticity and pathophysiology has not been fully defined, highlighting the need for further investigation. To gain a more comprehensive understanding of the role of microglia in these processes, we need to isolate microglia and characterize them genetically, metabolically, and functionally. However, the isolation of microglia from adult mice, especially from small brain structures, is challenging as they represent a small percentage of the total brain cells, and the yield of isolated microglia is often too low. Here, the magnetic isolation of microglia using CD11b+ microbeads allows us to sort microglial cells from the hypothalamus of a freshly perfused adult mouse brain. The current method allows us to achieve relatively high purity and yield in a short period while maintaining cell viability.

著者スポットライト:マウスの脳機能および代謝障害に対する栄養の影響の調査 

We describe a protocol for isolating microglial cells from the mouse hypothalamus (or equivalent small brain structures) using magnetically activated cell sorting (MACS), in a relatively short time. The MACS-sorted hypothalamic microglia can be used for ex vivo analysis and can be plated to perform in vitro assays.

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離  

Microglia, as the resident macrophages of the brain, are essential for maintaining brain homeostasis. They shape neuronal circuits during development, ...

Magnetic Isolation of Microglia from Mouse Pup Brains

Source: Bokobza, C. et al., <a href="https://app.jove.com/v/62964">Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures.</a> J. Vis. Exp. (2022)
In this video, we describe a protocol for isolating CD11b cells, including microglia, from mouse pup brains using magnetic-activated cell sorting. The brain tissues are homogenized to obtain single-cell suspensions, which are incubated with anti-CD11b antibody-coated microbeads, followed by a magnetic column-based separation to purify the CD11b+ cell population.

マウスの仔脳からのミクログリアの磁気分離

Source: Bokobza, C. et al., Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures. J. Vis. Exp. (2022)
In this video, we ...

強化された純度と汎用性を持つ初代ミクログリアの迅速かつ洗練されたCD11b磁気分離

要約

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特性と密度勾配遠心によるマウスのプライマリミクログリアの分離

動的なを促進するために齧歯動物のミクログリアの分離と培養分岐無血清培地の形態

ディープシングルセルRNAシーケンシングのための1つの成人マウス脳半球からの領域特異的ミクログリアの分離

Primary Microglia Isolation from Postnatal Mouse Brains

初代細胞培養のための新生児マウスからのミクログリア細胞の磁気単離

脱髄の動物モデルにおける磁気活性化細胞選別によるマウス原発性ミクログリアの単離

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離

マウスの仔脳からのミクログリアの磁気分離

強化された純度と汎用性を持つ初代ミクログリアの迅速かつ洗練されたCD11b磁気分離

要約

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特性と密度勾配遠心によるマウスのプライマリ ミクログリアの分離

動的なを促進するために齧歯動物のミクログリアの分離と培養分岐無血清培地の形態

ディープシングルセルRNAシーケンシングのための1つの成人マウス脳半球からの領域特異的ミクログリアの分離

Primary Microglia Isolation from Postnatal Mouse Brains

初代細胞培養のための新生児マウスからのミクログリア細胞の磁気単離

脱髄の動物モデルにおける磁気活性化細胞選別によるマウス原発性ミクログリアの単離

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離

マウスの仔脳からのミクログリアの磁気分離

特性と密度勾配遠心によるマウスのプライマリミクログリアの分離