我々は、我々は、我々は脂肪の小さな違いを測定するために十分にアクリであるフッ素NMRを使用して熱狂性化合物の脂溶性測定のための簡単な方法を開発しました。この方法は、一般的な薬効化学で関心のある分解された変化する脂肪性変化に対する有機化合物の形成の影響を体系的に研究するために使用することができる。この方法の利点は、化合物が反応性である必要はなされないこと、および完全に純粋である必要がなされないことが含まれます。
正確な質量や体積を測定する必要はなく、キャリブレーション曲線を確立する必要もありません。適切な基準化合物を選択し、サンプリング段階でアリコートの交差汚染を避けるべきである。このビデオでは、サンプリング、NMRチューブシール、およびデータ処理のためのNMRソフトウェアの正しい使用のための適切な実践的なスキルを示します。
化合物Xの6.0ミリグラムと10ミリリットルの梨の形のフラスコに参照化合物の3.0ミリグラムを追加します。化合物を約2ミリリットルのHPLC級n-オククタノールに溶解し、2ミリリットルのHPLC級水を加えます。フラスコを温度管理されたレセプタクルの中に攪拌板の上に置き、再循環チラーに接続します。
25°Cで二方体を2時間かき混ぜ、攪拌速度を600 RPMに設定します。完全な相分離を可能にするために、一晩摂氏25度で混合物を平衡化します。フラスコをクランプでレトルトスタンドに固定します。
長い針を持つ1ミリリットルの使い捨てプラスチック注射器を使用して、水とn-Octanolの両方の層から約0.70〜0.85ミリリットルのアリコートを取ります。水のアリコートを取る場合は、注射器に約0.02ミリリットルの空気を引き込み、注射器に針を入れます。上部のn-オクタノール層を通して針を水層に移動させながら、空気を静かに押し出して、n-オクタノール溶液が針に入るのを防ぎます。
混合物から長い針を取り除きます。少量の水サンプルを捨て、約0.6ミリリットルのサンプルをシリンジに残します。慎重に乾燥したティッシュで針を拭き、きれいなNMRチューブに約0.5ミリリットルの水サンプルを注入します。
キャップで NMR チューブを素早く閉じます。n-オククタノールサンプルの場合、n-オククタノール層から長い針を取り除きます。少量のn-Octanolサンプルを捨て、約0.6ミリリットルのサンプルをシリンジに残します。
乾燥したティッシュで針を注意深く拭いた後、n-Octanolサンプルの約0.5ミリリットルをきれいなNMRチューブに注入する。キャップで NMR チューブを素早く閉じます。他の段階からの汚染がないか、n-Octanolと水サンプルの両方を視覚的に検査します。
各NMRチューブに、N-オククタノールと水の両方で混和可能な重水素化NMR溶媒を0.1ミリリットル加え、NMR取得中のシグナルロックを可能にします。沸点の低い化合物の場合は、ブローチを使用してNMRチューブを密封し、冷却後にチューブを反転して漏れを確認します。密封されたまたは非密封されたNMR管を20回慎重に反転し、F19 NMR実験のための均質な溶液を得る。
プロトン分離フッ素NMR実験を実行して、N-オクタノールおよび水NMRサンプルの両方で化合物Xおよび参照化合物の化学シフトを同定する。テキスト プロトコルにリストされている標準の NMR パラメータ設定を使用します。反転回復シーケンスを使用して、蛍光核酸の診断用スピンラティス緩和時間(T1)を測定します。
正確な定量的NMR統合のために得られたT1値から適切なパルス遅延時間のレベルを測定する。クイック F19 H1 スペクトルを実行して、初期パラメータを設定します。90度のパルス幅を測定し、T1測定実験用のパラメータを設定し、反転回復シーケンスを使用してT1測定実験を実行します。
調整されたパラメータ設定でプロトン分離フッ素NMR実験を再度実行します。D1を設定し、2つの診断フッ素信号間の周波数オフセットポイントを中央に配置して、両方の核を均等に励起できるようにします。また、スペクトル幅を 300 PPM に設定し、過渡の数を 64 に設定します。
信号対雑音比が高い場合は、これらの値を調整します。取得したデータを ACD NMR プロセッサ アカデミック エディション、または他のカスタム NMR 処理ソフトウェアを使用して処理します。NMR データ ファイルを開きます。
次に、pdata フォルダを開き、その後にフォルダ 1 を開きます。1r ファイルを削除します。NMR データ ファイルに戻り、FiD ファイルを ACD NMR プロセッサ ウィンドウにドラッグします。
ウィンドウ機能ボタンをクリックし、指数を選択し、線幅の広がり値を2として設定し、大丈夫ボタンをクリックします。ここで、ゼロ充填ボタンをクリックし、番号の横にある小さなボタンをクリックしてポイント数を元のポイント数の4倍に増やして、okボタンをクリックします。フーリエ変換ボタンを選択します。
次に、フェーズ ボタンをクリックし、マウス のフェーズ ボタンをクリックします。マウスの左ボタンをクリックしたまま、スペクトルの主要なピークが適切に段階的になるまでマウスを前後に移動します。次に、マウスの右ボタンをクリックしたまま、スペクトルの他のピークが適切に段階的になるまでマウスを前後に移動します。
次に、マウスのフェージングボタンをクリック解除し、フッ素のピークでスペクトル領域にズームインします。微調整をクリックし、前述の手順に従って必要に応じて位相補正を実行し、チェック ボタンをクリックします。ベースライン ボタンをクリックし、次にオプション ボタンをクリックします。
自動モデルのスペクトル平均を選択し、必要に応じてボックスの半角のポイント数を調整します。[大丈夫]、[自動]をクリックし、チェック ボタンをクリックします。次に、統合をクリックし、診断フッ素ピークを統合し、チェック ボタンをクリックします。
最後に、n-オクタノールおよび水NMRサンプルから積分比を得て、logP計算式で使用して、化合物X.using 2,2-トリフルオロエタノールを参照化合物として、2つのフルオロエタノールに対して0.75のlogP値を得て、3,3,3,2,2,20のlogP値を検出した。続いて、2つのフルオロエタノールの親油性を再決定したが、3、3、3、2、2−ペンタフルオロプロパノールを基準としている。測定されたlogP値は0.76で、基準として2-2-2-トリフルオロエタノールを用いて測定した値と比較した場合、0.01 logP単位の差しかありませんでした。
同様に、シス-2、3-ジフルロ-1、4-ブタンジオールについては、2つのフルオロエタノールとそのトランス異性体を用いることによって測定されたlogP値の差は非常に小さい。これは、再現性が良好であり、参照化合物の選択がlogP測定に影響を与えないことを示しています。選択した追加の例を次に示します。
これらの非UV活性アロファティック化合物のすべては、フッ素化炭水化物からフッ素ヒドロヒリンまで、この方法で容易に測定することができる。他のプロトNMRベースの方法は、あなたの化合物がフッ素を含んでいない場合に使用することができ、化合物がUVクロマフォマを含む場合、logP測定は、UV定量を使用して行うことができます。非UV活性フルオロヒドリンおよび脱酸化炭水化物の広い範囲の親油性を測定した。
得られたデータライブラリは、脂肪族フッ素化が脂肪性に及ぼす影響に関する傾向と規則を確立するために使用された。オクタノールと水は最小限の安全上の危険をもたらす。もちろん、測定される危険と参照化合物は常に考慮する必要があります。
