このプロトコルは、マウスのクリックおよびトーンバースト呼び起こされる聴覚脳幹応答を計画、実行、分析する方法に関する詳細な情報を提供します。この技術の主な利点は、薬理学的および変異型マウスモデルの複雑で迅速な聴覚プロファイリングを可能にすることです。alt-er-ed初期APPに関する新しい洞察と、マウスおよびラットにおける聴覚処理の関連する変化は、ヒトに翻訳することができる。
したがって、この方法は、聴覚、神経学的および疾患の特性評価およびフェノタイピングにおいて中心的に重要である。この方法は、ジサクーシス、低酸素症および無酸素症の同定のために最も重要である。例えば、年齢に関連する、騒音誘発代謝、先天性およびアスピ・メット・アキュリー難聴、ならびに変形または奇形、傷害および新生物による聴覚障害において。
この技術に新しいユーザーは、システムの適切な電気配置および実験前の較正に特別な注意を払う必要があります。この方法の視覚的なデモンストレーションは、麻酔、ABR記録、ABRフィルタリングプロセスおよび自動化されたABR-neur-o-lass-esを説明するために重要です。まず、キャリブレーションの少なくとも5分前にマイクロホンに接続されたプリアンプをオンにして、システムの平衡を可能にします。
オシロスコープをオンにします。次にマイクロホンを、音減衰キュービカル内のプリアンプに接続し、実験用マウス耳を模擬する。次に、市販の処理および取得ソフトウェアを開き、クリックとトーンバーストの刺激プロトコルをプログラムします。
クリック刺激エンティティから分析を開始し、クリックしきい値を決定します。その後、左右の耳のABR対称性が続く。そして後でABRの振幅と待ち時間。
次に、同じソフトウェアを使用して、Sig-Gen RZ刺激設計ソフトウェアを使用してトーンバースト刺激プロトコルを検証します。そして、バイオシグRZ取得ソフトウェアの下で、刺激の設定をチェックします。科学的な質問に応じて、テストする適切な周波数範囲をプログラムし、適用される周波数範囲が大音量のスピーカーの技術的能力を満たしていることを確認します。
平均化の場合は、例えば、クリックまたはトーンバーストの数を、例えば300回、毎秒20回、平均持続時間25ミリ秒、プリアンプの増幅係数を20回設定します。次に、ABR データ取得に適したサンプリング レートを確認し、6 つのポーリングのバター値フィルターを使用してフィルターを渡します。必要に応じて、ノッチ フィルタをアクティブにします。
ソフトウェア内でキャリブレーション:CAL200Kファイルを選択してトーンバーストキャリブレーションを開始し、キャリブレーション設定モードをアクティブにします。そして、実験条件に応じて境界を選択します。プロセッサシステムを使用して、キャリブレーション手順を実行します。
音圧レベルまたはSPL限界、周波数範囲、および分布の観点から、マイクと大音量のスピーカーの技術仕様が調和していることを確認してください。次に、事前定義されたクリック刺激プロトコルを選択して開始します。シングルクリックSPLを実行して、音刺激のスペクトルがオシロスコープのオンライン高速4ay変換によって分析されることを確認し、要件に一致します。
1 ~ 42 キロヘルツの範囲内で、定義済みのトーン バースト刺激プロトコルを選択して開始します。記録された音響試験刺激の周波数スペクトルを、オシロスコープとオンラインFFTを用いて確認する。最後に、作成したキャリブレーションファイルをトーンバースト刺激プロトコルにロードして、トーンバーストキャリブレーションを完了します。
麻酔をかけられたマウスを音響発泡体が並ぶ音響減衰キュービクルの中に入れることから始めます。聴覚電位を誘発するモノラル脳幹の記録のために、測定される耳に応じて、頂点に皮下ステンレス電極、右または左ピナのピンアイの軸方向および腹側を挿入する。もう一方の端では、バイノーラル記録の場合、負極を左右のピナに置きます。
地面電極を動物の股関節に置きます。挿入の前に、電極の皮下固定であるステンレス鋼電極の先端にフック形状を形成することが保証される。そして、挿入したら、適切に大音量のスピーカーとは向かいにマウスの10センチメートルのロストラムを配置します。
すべての電極をヘッドステージに接続し、インピーダンスを確認します。次に、全ての電極のインピーダンス測定を行い、各記録に先立って、適切な電極位置及び導電性を検証する。単一の大音量スピーカーを使用して、フリーフィールド条件下でADRを録音します。
最後に、自動しきい値検出と波遅延解析を使用して ABR 解析を実行し、正のピークと負の波を決定します。一般的な聴覚性能を分析する最初のステップとして、ゼロから90の間の異なるSPLsのクリック誘発ABRを、自動化されたABRしきい値検出システムを使用して調査した。異なるトーンバースト周波数によって誘発されるABR閾値レベルにおける潜在的な変化を分析した。
例示的なマウスラインでは、Cav3.2 plus、マイナスおよびCav3.2マイナス、マイナスマイナス、マイナスはコントロールと比較して増加したクリックとトーンバースト関連のヒアリング閾値を示した。最後に、クリック誘発ABR振幅成長関数及びABR波形状遅延解析はウェーブレットベースアプローチを用いて行った。後者は、内耳および脳幹内の聴覚情報処理に対する関心のある遺伝子の可能性のあるスペシオ的な影響に関する洞察を可能にする。
この技術を実行するには、ピナの測定とシステムキャリブレーションにおける適切なABR電極配置が不可欠です。ここで提示される聴覚的アプローチは、テレメトリーシステムと組み合わせて使用して、複雑で、待ち時間中および後期聴覚誘発電位を分析することもできる。これは、特性評価および聴覚、神経疾患および神経疾患のフェノタイピングに役立ちます。
