Dieses Protokoll enthält detaillierte Informationen darüber, wie man Click- und Ton-Burst-evozierte Hörreaktionen bei Mäusen plant, durchführt und analysiert. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie eine komplexe und schnelle auditive Profilierung von pharmakologischen und mutierten Mausmodellen ermöglicht. Die neuen Erkenntnisse über alt-er-ed frühe APP und damit verbundene Veränderungen in der auditiven Verarbeitung bei Mäusen und Ratten können auf den Menschen übertragen werden.
Daher ist diese Methode von zentraler Bedeutung bei der Charakterisierung und Phänotypisierung von Audit, neurologischen und Erkrankungen. Diese Methode ist am wichtigsten für die Identifizierung von Dysakus, Hypoakus is und Anacusis. Zum Beispiel bei altersbedingten, lärminduzierten metabolischen, angeborenen und aspi-met-acury Hörverlust sowie bei Hördefiziten aufgrund von Missbildungen oder Fehlbildungen, Verletzungen und Neoplasmen.
Benutzer, die neu in der Technik sind, sollten besonderes Augenmerk auf die richtige Elektroplatzierung und vorexperimentelle Kalibrierung des Systems richten. Die visuelle Demonstration der Methode ist entscheidend, um Anästhesie, ABR-Aufzeichnung, ABR-Filterprozesse und automatisierte ABR-Neur-o-lass-es zu veranschaulichen. Beginnen Sie, indem Sie den an das Mikrofon angeschlossenen Vorverstärker mindestens fünf Minuten vor der Kalibrierung einschalten, um den Ausgleich des Systems zu ermöglichen.
Schalten Sie das Oszilloskop ein. Positionieren Sie dann das Mikrofon, das mit einem Vorverstärker im Inneren des totlassenden kubischen Klangs verbunden ist, um das experimentelle murine Ohr nachzuahmen. Als nächstes öffnen Sie die handelsüblichen Verarbeitungs- und Erfassungssoftwaren und programmieren Sie die Stimulusprotokolle für die Klicks und Tonausbrüche.
Beginnen Sie mit der Klick-Stimulus-Entität, um zu analysieren und Klickschwellenwerte zu bestimmen. Gefolgt von ABR-Symmetrie des linken und rechten Ohres. Und ABR-Amplituden und Latenzen später.
Als Nächstes verwenden Sie die gleiche Software, um das Ton-Burst-Stimulationsprotokoll mit der Stimulus-Design-Software Sig-Gen RZ zu überprüfen. Und überprüft Stimulus-Einstellungen unter Bio-Sig RZ Akquisitionssoftware. Programmieren Sie den geeigneten Frequenzbereich, der je nach wissenschaftlicher Frage getestet werden soll, und stellen Sie sicher, dass die anzuwendenden Frequenzbereiche den technischen Fähigkeiten des Lautsprechers entsprechen.
Für die Mittelung, stellen Sie die Anzahl der sequenziellen akustischen Reize, entweder Klicks oder Ton Bursts zum Beispiel, 300 Mal, mit einer Rate von 20 pro Sekunde; eine Mittelungsdauer von 25 Millisekunden und der Verstärkungsfaktor des Vorverstärkers, 20 Mal. Überprüfen Sie als Nächstes die geeignete Abtastrate für die ABR-Datenerfassung, und übergeben Sie dann den Filter mit einem Butterwertfilter mit sechs Poll. Aktivieren Sie ggf. den Kerbfilter.
Starten Sie die Ton-Burst-Kalibrierung, indem Sie die Datei "Kalibrierung:CAL200K" auswählen, um den Kalibrierungskonfigurationsmodus innerhalb der Software zu aktivieren. Und wählen Sie Perimeter nach den experimentellen Bedingungen. Verwenden Sie das Prozessorsystem, um den Kalibrierungsvorgang auszuführen.
Stellen Sie sicher, dass die technischen Spezifikationen des Mikrofons und des Lautsprechers in Bezug auf Schalldruckpegel oder SPL-Grenzwerte, Frequenzbereich und Verteilung harmonisieren. Wählen Sie dann das vordefinierte Klickstimulationsprotokoll aus und starten Sie es. Führen Sie eine SPL mit einem Klick aus, um zu überprüfen, ob das Spektrum der Klangreize durch eine schnelle Vier-Ay-Transformation des Oszilloskops analysiert wird, die den Anforderungen entspricht.
Wählen und starten Sie das vordefinierte Ton-Burst-Stimulationsprotokoll im Bereich von ein bis 42 Kilohertz. Bestätigen Sie das Frequenzspektrum der aufgezeichneten akustischen Testreize, indem Sie ein Oszilloskop und Online-FFT verwenden. Vervollständigen Sie schließlich die Ton-Burst-Kalibrierung, indem Sie die erstellte Kalibrierungsdatei in das Ton-Burst-Stimulus-Protokoll laden.
Beginnen Sie, indem Sie die anästhesierte Maus in eine schalldämpfende Kabine legen, die mit akustischem Schaum ausgekleidet ist. Zur Erfassung von monauralen Hirnstamm evozierten Hörpotentiale, setzen Sub-dermal Edelstahlelektroden an der Scheitelpunkt, axial des Pin-Auge und ventral-lateral der rechten oder linken Pinna je nach Ohr zu messen. Auf der anderen Seite, für binaurale Aufnahmen, legen Sie die negativen Elektroden sowohl auf der rechten und linken Pinna.
Positionieren Sie die Bodenelektrode an der Hüfte des Tieres. Vor dem Einsetzen eine Hakenform an der Spitze der Edelstahlelektrode bilden, die eine subdermale Fixierung der Elektroden gewährleistet ist. Und einmal eingefügt, richtig stellen Sie die Tribüne der Maus 10 Zentimeter gegenüber dem lauten Lautsprecher.
Schließen Sie alle Elektroden an die Kopfstufe an und prüfen Sie, ob sie impedanz. Führen Sie dann vor jeder Aufnahme Impedanzmessungen aller Elektroden durch, um die richtige Elektrodenpositionierung und Leitfähigkeit zu überprüfen. Zeichnen Sie ABRs unter freien Feldbedingungen mit einem einzigen Lautsprecher auf.
Führen Sie schließlich ABR-Analysen mittels automatisierter Schwellenerkennung und Wellenlatenzanalyse durch, um positive Spitzen und negative Wellen zu bestimmen. Als ersten Schritt bei der Analyse der allgemeinen Hörleistung wurden klickbezicht tevokedabRs für verschiedene SPLs zwischen Null und 90 mit dem automatisierten ABR-Schwellenwerterkennungssystem untersucht. Mögliche Veränderungen der ABR-Schwellenwerte, die durch unterschiedliche Tonburstfrequenzen hervorgerufen werden, wurden analysiert.
In den beispielhaften Mauslinien, Cav3.2 plus, minus und Cav3.2 minus, zeigte minus erhöhte Klick- und Tonburst-bezogene Hörschwellen im Vergleich zu Kontrollen. Schließlich wurden die klickbezichtige ABR-Amplitudenwachstumsfunktion und die ABR-Wellenformlatenzanalyse über wavelet-basierte Ansätze durchgeführt. Letzteres ermöglicht Einblicke in den möglichen spacio-zeitlichen Einfluss des Gens von Interesse auf die auditive Informationsverarbeitung im Innenohr und Hirnstamm.
Die richtige PLATZIERUNG der ABR-Elektroden in der Messung und Systemkalibrierung von pinna ist für die Durchführung dieser Technik unerlässlich. Der hier vorgestellte auditive Ansatz kann auch in Kombination mit einem Telemetriesystem verwendet werden, um komplexe, mittlere Latenz- und späthörige evozierte Potenziale zu analysieren. Dies hilft bei der Charakterisierung und bei der Phänotypisierung von Hör-, Neurologie- und Neuroerkrankungen.
