Este protocolo fornece informações detalhadas sobre como planejar, realizar e analisar respostas de brainstem auditivas em camundongos. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite um perfil auditivo complexo e rápido de modelos de camundongos farmacológicos e mutantes. Os novos insights sobre o APP inicial alt-er-ed e a mudança associada no processamento auditivo em camundongos e ratos podem ser traduzidos para humanos.
Portanto, esse método é de importância central na caracterização e fenotipagem de doenças auditivas, neurológicas e. Este método é mais importante para a identificação de disacusia, hipoacusia e anacusis. Por exemplo, na perda auditiva metabólica, congênita e aspi-met-acury, por exemplo, em déficits auditivos devido a deformidades ou malformações, lesões e neoplasias.
Os usuários novos na técnica devem prestar atenção especial à adequada eletro-colocação e calibração pré-experimental do sistema. A demonstração visual do método é fundamental para ilustrar anestesia, gravação de ABR, processos de filtragem ABR e neur-o-lass-es automatizados. Comece ligando o pré-amplificador conectado ao microfone, pelo menos cinco minutos antes da calibração, para permitir o equilíbrio do sistema.
Ligue o osciloscópio. Em seguida, posicione o microfone, conectado a um pré-amplificador dentro do cubical atenuante do som, para imitar o ouvido murino experimental. Em seguida, abra os softwares de processamento e aquisição disponíveis comercialmente e programe os protocolos de estímulo para os cliques e estouros de tom.
Comece com a entidade de estímulo ao clique para analisar e determinar os limiares de clique. Seguido pela simetria ABR da orelha esquerda e direita. E amplitudes e latências ABR mais tardes mais tarde.
Em seguida, use o mesmo software para verificar o protocolo de estimulação de explosão de tom usando o software de design de estímulo Sig-Gen RZ. E verifica as configurações de estímulo, sob o software de aquisição Bio-Sig RZ. Programe a faixa de frequência apropriada a ser testada, dependendo da questão científica, e certifique-se de que as faixas de frequência a serem aplicadas atendam às capacidades técnicas do alto-falante.
Para a média, defina o número de estímulos acústicos sequenciais, cliques ou rajadas de tom, por exemplo, em 300 vezes, com uma taxa de 20 por segundo; uma duração média de 25 milissegundos e o fator de amplificação do pré-amplificador, 20 vezes. Em seguida, verifique a taxa de amostragem apropriada para aquisição de dados ABR e, em seguida, passe filtro usando um filtro de seis pesquisas de manteiga. Ative o filtro de entalhe, se necessário.
Inicie a calibração da explosão de tom selecionando o arquivo calibração:CAL200K;dentro do software, para ativar o modo de configuração de calibração. E escolha perímetros de acordo com as condições experimentais. Use o sistema do processador para executar o procedimento de calibração.
Certifique-se de que as especificações técnicas do microfone e alto-falante, em termos de nível de pressão sonora ou limites de SPL, faixa de frequência e distribuição se harmonizam. Em seguida, selecione e inicie o protocolo de estimulação de cliques pré-definido. Execute um SPL de um único clique para verificar se o espectro de estímulos sonoros é analisado pela transformação rápida e rápida do osciloscópio, corresponde aos requisitos.
Selecione e inicie o protocolo de estimulação de explosão de tom pré-definido, dentro da faixa de um a 42 kilohertz. Confirme o espectro de frequência dos estímulos de teste acústico registrados, usando um osciloscópio e FFT on-line. Finalmente, complete a calibração da explosão de tom carregando o arquivo de calibração criado para o protocolo de estímulo de explosão de tom.
Comece colocando o mouse anestesiado dentro de um cubículo atenuante de som, forrado com espuma acústica. Para o registro do tronco cerebral monaural evocava potenciais auditivos, insira eletrodos sub dérmicos de aço inoxidável no vértice, axial do olho-pino e ventral-lateral do pinão direito ou esquerdo, dependendo da orelha a ser medida. Na outra ponta, para gravações binaurais, coloque os eletrodos negativos tanto na pina direita quanto na esquerda.
Posicione o eletrodo moído no quadril do animal. Antes da inserção, forme uma forma de gancho na ponta do eletrodo de aço inoxidável que é a fixação sub-dérmica dos eletrodos. E uma vez inserido, coloque corretamente o rostrum do mouse 10 centímetros oposto ao alto-falante.
Conecte todos os eletrodos ao estágio da cabeça e verifique se há impedância. Em seguida, realize medições de impedância de todos os eletrodos, antes de cada gravação, para verificar o posicionamento e condutividade adequados do eletrodo. Grave ABRs em condições de campo livre usando um único alto-falante alto.
Finalmente, realize a análise de ABR através de detecção automatizada de limiares e análise de latência de ondas para determinar picos positivos e ondas negativas. Como primeiro passo na análise do desempenho geral da audição, foram investigadas as ABRs evocadas por cliques para diferentes SPLs, entre zero e 90, utilizando o sistema automatizado de detecção de limiares ABR. Foram analisadas alterações potenciais nos níveis de limiar de ABR evocados por diferentes frequências de estouro de tom.
Nas linhas exemplares do mouse, Cav3.2 plus, menos e Cav3.2 menos, menos exibidos aumento de limiares auditivos relacionados ao clique e ao tom em comparação com os controles. Por fim, a função de crescimento de amplitude ABR evocada por cliques e a análise de latência da forma de onda ABR foram realizadas por meio da abordagem baseada em ondas. Este último permite uma visão da possível influência spacio-temporal do gene de interesse no processamento de informações auditivas dentro do ouvido interno e do tronco cerebral.
A colocação adequada do eletrodo ABR na medição e calibração do sistema do Pinna são essenciais para a realização desta técnica. A abordagem auditiva aqui apresentada, também pode ser utilizada em combinação com um sistema de telemetria para analisar potenciais complexos, de latência média e auditiva tardia. Isso ajuda na caracterização e no fenotipagem de doenças auditivas, neurológicas e neurológicas.
